解淀粉芽胞杆菌关键酶基因过表达对鸟苷积累的影响

【目的】研究鸟苷生物合成途径中的3个关键酶编码基因(prs,purF,guaB)过表达对解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)发酵生产鸟苷的影响。【方法】利用穿梭表达载体PBE43,构建含有prs、purF和guaB基因的单独表达载体和prs、purF基因的串联表达载体,将它们分别转入鸟苷生产菌B.amyloliquefaciens TA208后,通过实时定量PCR测定各工程菌株内相关基因的转录水平;通过酶活检测分析关键酶基因扩增对肌苷酸脱氢酶活性的影响;通过摇瓶发酵实验考察工程菌株与对照菌株的生长、耗糖和鸟苷积累情况。【结果】转录分析结果表明prs、purF和guaB基因过表达的同时都伴随着自身转录水平的显著上调。与此同时,prs和purF基因单独表达均轻微下调了嘌呤操纵子的转录水平,但是guaB基因的过表达并不影响嘌呤操纵子和prs基因的转录。酶活分析结果表明prs和purF基因扩增并不影响肌苷酸脱氢酶的活性,guaB基因的扩增使其活性提高了126%。摇瓶发酵实验发现prs和purF基因的单独过表达均未促进宿主菌合成鸟苷,而含guaB基因过表达载体的工程菌鸟苷产量较出发菌株提高20.7%。将prs和purF基因串联表达后,鸟苷产量提高14.4%,糖苷转化率增加6.8%。【结论】过表达guaB基因能够大幅提高鸟苷产量,而prs和purF基因只有实现协同表达才能对宿主菌积累鸟苷产生积极影响,为通过代谢工程技术提高鸟苷产量奠定了研究基础。     

基于Golden Gate技术的齐整小核菌转录单元高效组装系统

【目的】为齐整小核菌代谢工程研究建立高效的转录单元组装系统。【方法】通过应用Golden Gate技术,以mobius assembly为基础,分别设计并构建DNA元件标准化接口改造、单转录单元组装、应用质粒(多转录单元)组装等功能的载体,从而形成一套完整的多转录单元组装系统。【结果】构建了2个用于DNA元件标准化接口改造的Level 0载体,4个用于单转录单元组装的Level 1载体,4个用于应用质粒组装的Level 2载体和13个应用质粒组装的辅助质粒。然后应用此系统为齐整小核菌组装了若干经过标准化接口改造的DNA元件质粒、单转录单元质粒和硬葡聚糖相关基因的功能分析质粒。所构建的最终应用质粒可以同时适用于齐整小核菌的根癌农杆菌介导转化法、电穿孔转化法和原生质体转化法。【结论】此质粒系统具有强大的DNA设计、组装和容纳能力,为未来齐整小核菌代谢工程和功能基因组学研究提供了高效的质粒构建技术平台。     

高等植物的次级代谢—C11和C16萜烯同系物和间接自我保护

［２Ｈ５］－橙花叔醇,［２Ｈ５］－咙牛儿基沉香醇和糖甙酶等为底物,对５０多种单子叶和双子叶植物进行培养实验,证明许多高等植物尤其是大多数农作物在被害虫侵袭时,叶片中所含橙花叔醇糖甙被水解产生游离醇,又在细胞内的氧化裂解酶的作用下产生次级代谢,表现为其次级代谢物将大大增多,其中萜类以及Ｃ１１、Ｃ１６萜烯同系物的含量增加更加显著。许多试验表明,植物以此引诱害虫天敌,实现自我保护。     

贵阳地区中华大蟾蜍越冬习性观察

大瞻蜍Bufo bufo系广泛分布于我国东北、华北、华南和西南地区的一种两栖类,在贵州为常见种类之一,是居民点和菜地中的优势种。关于大蟾蜍繁殖和食性方面的报道较多,但有关其越冬习性研究较少。1982年9月至1983年3月;1984年9月至1985年3月作者     

三氯杀虫酯类似物的化学结构与生物活性的关系

以合成的系列三氯杀虫酯类似物,对家蝇和棉蚜进行药效测定。结果表明:羧酸烷基为甲基,苯环上的取代基为Br或F时,对家蝇无效。在苯环的邻位上有-OCH₃取代时也无效,如在间位上有-OCH₃取代的化合物,则有一定的杀虫效果,但不如在邻位和对位上都有-OCH₃取代的化合物的药效高。当α-碳上苯环的取代基为3,4-次甲二氧基,而只变换羧酸酯上的烷基(R)时,对家蝇的杀虫效果,趋向于随着α-碳原子与羧酸酯基的R碳链增长而递减。但R为苯基时,则效果不明显。同时从结果中也可以看出所测化合物,可能由于对家蝇和棉蚜的作用机理不同,因而其杀虫效果不成平行关系。     

川金丝猴粪样内3种类固醇激素保存时效分析

川金丝猴(Rhinopithecus roxellanae)是中国特有的灵长类物种,生存于海拔1 400～3 300 m的山地森林地带。采用拾取新鲜粪便的非损伤性途径研究该物种野生种群生理状态,必须首先确定其新鲜粪便在特定保存方法下的保存时效。本项研究探讨在川金丝猴自然分布区夏季可获得的低温(4±1)℃、在95%乙醇中保存条件下,该物种新鲜粪便内3种类固醇激素(睾酮、雌二醇、孕酮)在8个设定天数:0(标准对照)、5、6、7、8、10、20、30 d的保存时效。结果表明,雌性川金丝猴粪样内睾酮和雌二醇在30 d内可稳定保存,孕酮含量在保存10 d时的平均值显著性低于标准参照值(P0.05);雄性川金丝猴粪样中睾酮含量在保存6 d时的平均值显著低于标准参照值(P0.05)。本研究说明,在野生川金丝猴新鲜粪便保存条件一致的情况下,该物种新鲜粪样内睾酮、孕酮、雌二醇3种激素保存时效并不一致,实际运用时需要结合研究目的区别对待。     

细胞色素P450与除草剂抗性转基因植物

介绍了除草剂代谢有关的细胞色素P450基因及其应用,已从动植物体中分离具有除草剂代谢活性的细胞色素P450基因,通过转基因方法,成功培育出抗除草剂的转基因植物。     

有机磷杀虫剂使家蝇中毒后对酯酶的抑制作用

本文研究了乐果、敌百虫和TOCP等三种药剂对家蝇胆碱酯酶与脂族酯酶的体内抑制与中毒症状之间的关系。试验以家蝇为材料,用上述药剂的LD₅₀剂量处理后观察其在不同时间内的中毒症状,并用Warburg测压法分别在不同时间内测定家蝇头部和胸腹部胆碱酯酶和脂族酯酶的抑制情况 所得结果表明:无论头部和胸腹部胆碱酯酶的抑制程度都与中毒症状密切相关。当家蝇中毒倒伏时胆碱酯酶的活性最低。脂族酯酶的抑制作用与中毒症状虽有一定的关系,但是单独抑制脂族酯酶不表现出任何症状。因此,可以认为有机磷杀虫剂的主要中毒作用是抑制胆碱酯酶,虽然也可能是两种酶同时受抑制的作用。     

粉红椋鸟聚群觅食行为

粉红椋鸟是社群型动物,在迁徙、繁殖和觅食中都聚集成群。聚群觅食是依靠从隐蔽处惊吓出猎物而采用一种捕食方式,是对其主要食物蝗虫普遍具有保护色的适应。     

枯草杆菌的遗传学

高桥伊和夫（Iwao Takahashi）博士是加拿大McMaster大学生物系教授。枯草 杆菌的转导现象及其转导噬菌体PBS1就是由他发现的。高橘博士从事抱子形成遗传调节的 研究,曾绘制第一张抱子基因在染色体上的分布图。今牟四月,他应中国科学院遗传研究所的 邀请来华访问,这是他在访华期间所作的一篇报告。