高糖高脂致家兔糖尿病的实验模型探讨

目的　建立饮食诱导新西兰兔糖尿病模型 ,探讨脂肪毒性和葡萄糖毒性在 2型糖尿病发病中的意义。方法　将雄性新西兰兔 30只按血糖血脂浓度随机分为 2组 ,15只饲以基础饲料作为正常对照组 (C组 ) ;15只饲以高糖高脂饲料作为实验组 (DD组 ) ,共观察 32周 ,每 4周从禁食过夜的兔耳静脉抽取血样 ,测定血清中血糖、胰岛素、甘油三酯。于 32周时 ,全部处死动物 ,取动物胰腺。取部分胰腺用 10 %中性甲醛液固定 ,常规石蜡包埋切片 ,H、E染色 ,光学显微镜下观察 ;另一部分胰腺用 2 5 %戊二醛固定 ,常规电镜样品制备 ,透射电镜下观察并照相。结果　实验组 4周后即出现高血糖、高甘油三酯 ,并随着喂养时间延长 ,而有所升高 ,基础饲料组血糖、甘油三酯未见明显升高 ,两组比较差异具有显著性意义 (P <0 0 1)。以不同喂养时间作方差分析 ,整体上差异具有显著性意义。实验组血清胰岛素水平整体上差异没有显著性意义 (P >0 0 5 )。实验组胰腺组织表现为胰岛萎缩 ,胰岛边缘皱缩 ,胰岛数目减少 ,胰岛内细胞数量亦减少 ,多数细胞呈梭形 ,细胞核呈杆状 ,胰岛周围少量淋巴细胞浸润。透射电镜下观察到实验组胰岛 β细胞体积略小 ,核较小 ,部分分泌颗粒呈空泡状 ,细胞内可见局部结构较模糊 ,粗面内质网少 ,未见明显淀粉样变     

对一株藤黄微球菌合成海藻糖能力的鉴定

报道了一株藤黄微球菌 (Micrococcusluteus)具有产酶能力 ,可以淀粉糊精为底物合成海藻糖 ,从还原糖含量变化、纸层析和高效阴离子交换 脉冲安培法检测几方面对酶反应予以证实。     

NT-proBNP、BNP及hs-CRP在老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者血浆中的表达及临床意义

目的:探讨N末端前体脑钠肽(NT-proBNP)、脑钠肽(BNP)及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)在老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者血浆中的表达及临床意义。方法:选择2015年2月～2018年7月在我院进行诊治的老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者200例为观察组,选择同期在我院进行诊治的非冠脉综合征患者100例为对照组。入院后次日检测所有患者的血浆中的NT-proBNP、BNP及hs-CRP等指标的水平,并对比两组患者以及观察组中不同血管病变支数患者上述指标水平。两组患者均随访6个月,观察心血管不良事件的发生率。结果:观察组患者的NT-proBNP、BNP及hs-CRP水平均显著高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。观察组内单支血管病变、双支血管病变、三支血管病变患者间NT-proBNP、BNP及hs-CRP水平比较差异有统计学意义(P0.05),各项指标水平随着血管病变支数增加而升高(P0.05)。观察组在出院后为期6个月随访期间心血管不良事件发生率为16.50%,高于对照组心血管不良事件发生率为6.00%,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。患者冠脉血管病变支数与血浆NT-proBNP、BNP及hs-CRP水平间呈正相关(P0.05)。结论:血浆NT-proBNP、BNP及hs-CRP水平在老年急性非ST段抬高型心肌梗死患者中显著升高,且随着患者血管病变程度的增加而升高,对患者预后心血管不良事件判断有较好的预测作用。     

藤黄微球菌海藻糖生物合成基因的克隆与鉴定

首次从一株能利用淀粉产生海藻糖的藤黄微球菌中克隆了海藻糖生物合成基因。采用PCR方法结合非随机鸟枪法得到藤黄微球菌中低聚麦芽糖苷基海藻糖合成酶(MTSase)基因(MtreY)的全序列及低聚麦芽糖苷基海藻糖水解酶(MTHase)基因(MtreZ)的部分序列,其中MtreY共有2,370个碱基,编码789个氨基酸,表达产物分子量为86·7kD。同源性分析表明,与已报道的MTSase和α-淀粉酶家族成员具有相同的保守模体。将MtreY基因在大肠杆菌JM83中表达,证明表达产物具有预期的酶活性。     

螺内酯联合美托洛尔缓释片治疗老年慢性心力衰竭患者的疗效 及对左室心功能的影响

目的:探究螺内酯联合美托洛尔缓释片治疗老年慢性心力衰竭(CHF)患者的临床疗效,并分析其对左室心功能的影响。方法:选择2012年2月至2015年5月期间我院收治的老年CHF患者87例,将其随机分为研究组和对照组,研究组45例,对照组42例。对照组采用常规药物治疗方式,研究组在对照组基础上采用螺内酯联合美托洛尔缓释片治疗,疗程共12周。对比两组患者的临床疗效及治疗前后的左心室功能变化。结果:研究组患者总有效率为91.11%,对照组为69.05%,组间差异有统计学意义(P0.05);治疗后研究组LVEF高于治疗前,LVEDV、LVESV低于治疗前,且改善程度明显优于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:螺内酯联合美托洛尔缓释片能够显著改善老年CHF患者的左室重构和心脏功能,疗效显著,可在临床上推广使用。     

一种新型的基因定点突变方法及其在DdsA突变研究中的应用

为了发展基因突变技术,介绍一种新型的基因定点突变方法.该方法巧妙利用了基因序列中广泛存在的不完整的平端酶切位点.与传统方法相比,可以迅速地在全基因的任何部位替换核苷酸,并可以在突变实验过程中直接将目的基因克隆到T载体上,便于测序及进一步克隆.利用该方法成功地获得了DdsA（decaprenyl diphosphate synthase,十聚异戊二烯焦磷酸合成酶）在4个氨基酸位点上的19个变体酶.这些位点分布在基因的不同区域内.证明这种新方法的高效性.     

重组酿酒酵母腺苷激酶的表达、纯化和鉴定

腺苷激酶 (adenosinekinase ,AK)是控制细胞中腺苷浓度的一种关键酶 ,在许多细胞和组织中发挥着重要的生理效应子作用。从酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)中克隆了腺苷激酶基因 (ak) ,并将其接入大肠杆菌pET16b表达质粒中进行表达。重组蛋白质经部分纯化后 ,测定其酶动力学常数 ,结果表明该酶对腺苷的Km 值为 (3.5± 0 .2 ) μmol L ,对ATP的Km 值为(10 0 .0± 11.0 ) μmol L ,对腺苷的kcat值为 (15 30± 2 0 )min- 1 ,对ATP的kcat值为 (14 4 8± 2 5 )min- 1 。该酶对其他核苷和脱氧核苷的Km 值测定数据表明 ,从酵母中克隆得到的该重组腺苷激酶具有较高的底物特异性。     

SDF-1α基因与绿色荧光蛋白融合载体的构建及亚细胞定位

目的构建SDF-1α基因与绿色荧光蛋白的融合蛋白表达载体,进而观察SDF-1α基因编码蛋白在细胞内的定位情况。方法用EcoRI内切酶从pMD-T18一SDF-1α重组载体中酶切分离SDF-1α基因的完整ORF,构建pEGFP-C1-SDF-1α的融合表达载体,脂质体转染COS-7细胞,并在荧光显微镜下观察表达的融合蛋白。结果SDF-1α基因在COS-7细胞中高效表达,激光共聚焦的结果显示,SDF-1α基因定位在细胞质内。结论成功构建了pEGFP-C1-SDF-1α的融合表达载体,SDF-1α基因主要在细胞质中表达。     

除草剂乐草隆对红鲫的遗传毒性研究

目的　探讨除草剂乐草隆对红鲫的遗传毒性。方法　用单细胞凝胶电泳检测不同浓度的乐草隆对红鲫外周血淋巴细胞DNA的损伤作用。结果　乐草隆致毒红鲫的淋巴细胞DNA的迁移度均较阴性对照组高 (P<0 0 5 ) ,在一定浓度范围内 (0～ 7 0 0mg L)DNA损伤程度与浓度呈正相关 (r=0 982 ,P <0 0 1)。在 12h、2 4h、4 8h、96h、10d实验组DNA损伤程度均有增强的趋势。结论　乐草隆对红鲫具有一定的遗传毒性     

放线菌次级代谢途径的设计

近来有关放线菌次级产物生物合成的分子遗传学和生物化学方面的进展为我们改造其代谢途径提供了一个明确的方向。近年来,对微生物的初级代谢途径进行基因改造取得了成功,但放线菌的次级代谢工程产物却都没有达到中试或生产规模。进展如此缓慢的主要原因是放线菌自身复杂的代谢途径以及细胞循环中复杂的调节方式及其特异性。目前人们着力于通过基因操作改造酶,从而重新设计以其催化产物为基本骨架的代谢途径,最终产生修饰的或新的天然终产物。本文将讨论达到此目的的几种设计策略。