人乙型肝炎adr亚型病毒(HBVadr)表面抗原与核心抗原基因定位

人乙型肝炎病毒是球状颗粒,它有个含磷脂的蛋白外壳和一个内含DNA的病毒核心。由于外壳上的表面抗原(HBsAg)可作为疫苗,用于乙型肝炎的防治;病毒核心的核衣壳上的核心抗原(HBcAg)对乙型肝炎的诊断非常有用,因而人们对HBsAg和HBcAg     

人17β羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)基因在家蚕系统中的表达(简报)

17β羟类固醇脱氢酶(17β-hydroxystero-id dehydrogenase,17β-HSD)能催化人体内类固醇性激素的形成和转化,例如它可以催化雌二醇与雌酮,雄烯二酮与睾酮之间的相互转化反应。人体内17β-HSD在胎盘组织含量最为丰富,催化17β-雌二醇等雌激素的生成,同时这些激素能够刺激乳腺瘤的增生。因此,如何抑制17β-HSD酶的过高活性,减少癌变发生的可能性,已成为目前这类癌症治疗的一个重要研究目标。目前,从胎盘组织中提取17β-HSD的方法,产量低,比活小,周期长,     

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1在不同载体的表达

目的构建广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达APLA2-1并比较不同表达系统对APLA2-1的表达效果。方法将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(AP-LA2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和pET28a( ),分别转化入大肠杆菌RR1和BL21,经过诱导表达,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)及Western blot观察重组蛋白表达情况。结果成功构建了重组质粒pBLMVL2-APLA2-1和pET28a-APLA2-1。pBLMVL2-APLA2-1在SDS-PAGE上没见明显表达带,在Western blot上可见一14 kD的表达带。pET28a-APLA2-1在SDS-PAGE上有一明显的18 kD表达条带,表达产物AP-LA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在。结论APLA2-1可在大肠杆菌中表达,pET28a( )对APLA2-1的表达效果优于pBLMVL2。     

次级淋巴趋化因子SLC的克隆及其在原核系统中的表达

以中国人的淋巴组织为材料抽提总RNA,用RTPCR的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子(Secondary lymphoid\|tissue chemokine,SLC)的成熟肽基因。序列分析表明,我们克隆的SLC基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异,且并不影响氨基酸的编码。将SLC的cDNA插入含T7启动子的表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET-SLC,转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株。表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3～5h后,超声破菌,离心后将上清进行SDS-PAGE,可以看到在18kD左右处有明显的表达条带。用Ni2+亲和层析柱纯化表达产物,纯度达到90%以上。     

丙型肝炎病毒CS,NS3 NS4区抗原融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

丙型肝炎病毒是与输血有关的非甲非乙肝病毒[1] ;是全世界输血后获得性肝炎的重要病因之一 ,并与急慢性肝炎、肝硬化和肝癌有关。由于主要通过输血的传播 ,会给人民的身体健康尤其输血事业带来极大危害。采用基因工程技术 ,表达含有多段抗原的融合蛋白作为ＨＣＶ检测试剂的抗原 ,可以简化多种抗原的表达及纯化过程 ,并提高了试剂的均一性[2 ] 。研究表明 ,在ＨＣＶ的抗原基因中 ,核心蛋白Ｃｏｒｅ、ＮＳ3区的Ｃ33ｃ抗原、ＮＳ4区基因编码的抗原免疫原性最强 ,相应抗体出现早 ,分布广 ,亲和力强。因此 ,我们构建了含有中国人ＨＣＶ序列的Ｃｏ…     

日本血吸虫中国大陆株22.6kD膜相关蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

以日本血吸虫ｍＲＮＡ为模板,用ＲＴＰＣＲ法快速克隆到一大小约６００ｂｐ的ＤＮＡ片段,ＤＮＡ序列分析证实,所扩增到的ＤＮＡ片段中含有日本血吸虫２２６膜相关蛋白（Ｓｊ２２６（Ｃｈ））基因,将该基因重组到表达型质粒ｐＧＥＸ４Ｔ中,表达的ＧＳＴ融合蛋白分子量约４８ｋＤ,用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达４０ｍｇ／Ｌ培养物,免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,为其在血吸虫病抗感染中的免疫作用研究创造了条件。     

丙肝病毒融合抗原基因NS3-C定点整合入衣藻 叶绿体基因组的研究

用PCR方法从丙型肝炎病毒(HCV) cDNA文库中克隆了两段DNA片段,即HC基因组非结构NS3区抗原基因(约0.7 kb)和核心抗原C区抗原基因(约0.6 kb)的cDNA片段。在两段cDNA间加入连接肽Ser-Pro-Gly-Ser的密码子序列,构建成融合抗原基因NS3-C。将该融合基因与衣藻叶绿体基因atpA的启动子和rbcL基因的3'末端连接,得到丙肝病毒融合抗原基因NS3-C表达盒,再将该表达盒与选择标记基因aadA表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接,构建成衣藻叶绿体转化载体pSS6。基因枪法转化衣藻叶绿体,经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落,对转基因衣藻的PCR和Southern杂交分析表明,融合抗原基因NS3-C已整合到衣藻叶绿体基因组中。 Abstract:　Two DNA fragments encoding the nucleocapsid (C) region protein and the non-structural region 3 (NS3) protein of hepatitis C virus(HCV) were amplified from cDNA library by using PCR method. The 5' terminal of C cDNA fragment was linked up with the 3' terminal of NS3 cDNA fragment by a oligonucleotide linker Ser-Pro-Gly-Ser to form a chimeric gene NS3-C, which was placed under the control of the chloroplast atpA promoter and rbcL 3' region of Chlamydomonas reinhardtii to construct the chimeric gene NS3-C cassette. Then the NS3-C cassette was linked with selectable gene aadA cassette and the chloroplast homologous fragments of Chlamydomonas reinhardtii to generate transformation vector pSS6. Chloroplasts of Chlamydomonas reinhardtii were transformed by particle bombardment. Plastid transformants were selected by their resistance to 100 mg/L of spectinomycin. PCR and Southern hybridization analysis showed that the chimeric gene NS3-C had been integrated into chloroplast genome of Chlamydomonas reinhardtii.     

丙肝病毒融合抗原基因NS3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究

用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段,即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列,构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接,得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒,再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接,构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体,经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落,对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明,融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。     

灰树花子实体多糖D-组分的提取、硫酸化及免疫测定

从灰树花(Maitake)子实体中提取分离得到子实体多糖D组分,并分别考察了提取中的几个关键因素对D组分得率的影响,包括加水倍数、浸提时间、醇沉浓度、浓缩倍数。然后,对D组分进行了硫酸化修饰,得到了两种不同取代度的硫酸化多糖。最后,研究了灰树花多糖D组分及硫酸化灰树花多糖D组分对小鼠的免疫器官重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素形成及淋巴细胞转化率的影响。结果表明,在10mgkg剂量下,灰树花多糖D组分及硫酸化灰树花多糖D组分具有免疫增强作用,并且在合适的取代度下硫酸化灰树花多糖D组分比灰树花多糖D组分表现了更强的免疫调节作用。     

抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合在昆虫细胞中的表达

将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒 pFastBacHTa中 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,表达产物分子量为 4 1kD左右 ,Western印迹分析结果表明 ,以HRP标记的生物素进行蛋白质印迹在 4 1kD处可见表达条带 ,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合 ,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ScFv CS蛋白能特异性结合癌胚抗原