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具有自我剪接能力的Ⅰ型和Ⅱ型内含子有编码蛋白质的功能。Ⅰ型内含子编码成熟酶和核酸内切酶,后者参与Ⅰ型内含子的归巢。Ⅱ型内含子编码的蛋白质呈现成熟酶核酸内切酶和逆转录酶活性,三种活性都在Ⅱ型内含子归巢中起作用。除归巢外,Ⅰ型和Ⅱ型内含子的转移还表现为转位和丢失。内含子作为可转移遗传因子,可能在进化中有一定的意义。 相似文献
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编码日本血吸虫抱雌沟蛋白及肌动蛋白的基因性别间的表达差异性 总被引:4,自引:0,他引:4
研究了所克隆的日本血吸虫两个基因的性别间的表达差异性。分别将所克隆到的编码日本血吸虫抱雌沟蛋白的cDNA(SjGCP1)和肌动蛋白的cDNA(SjAct)制成DNA探针,利用Southern blotting,Northern blotting和斑点印迹法对其相应基因性别间的表达差异性进行了研究。结果显示,日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因在雄虫中转录而雌虫中不转录,血吸虫肌动蛋白基因在雄虫中转录量高于雌虫,表现出转录量的差异。证明这两个基因转录具有性别间的表达差异性。 相似文献
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根据日本血吸虫菲律宾株编码21.7kD蛋白的基因设计引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR法扩增出大小为558bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段为编码日本血吸虫中国大陆株21.7kD蛋白基因的完整阅读框,与菲律宾株该基因的碱基序列同源性为98%。将其克隆到表达载体pET28a(+)中,在大肠杆菌BL21中获得表达,融合表达产物分子量约为25.4kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明该基因的表达产物具有抗原性。 相似文献
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日本血吸虫中国大陆株TPI基因的克隆及其表达产物特性 总被引:2,自引:2,他引:2
磷酸丙糖异构酶(TPI)是血吸虫病疫苗重要的候选抗原基因之一。参考日本血吸虫已发表的TPIcDNA序列,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR法快速克隆出一大小约800bp的DNA片段。DNA序列分析证实,所扩增到的DNA片段即为日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(SjTPIc)基因。将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T中,表达的GST融合蛋白分子量约54kD。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达30mg/L培养物。免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,是一种较为理想的抗原分子。 相似文献
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以日本血吸虫mRNA为模板,用RTPCR法快速克隆到一大小约600bp的DNA片段,DNA序列分析证实,所扩增到的DNA片段中含有日本血吸虫22.6膜相关蛋白(Sj22.6(Ch))基因,将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T中,表达的GST融合蛋白分子量约48kD,用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达40mg/L培养物,免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,为其在血吸虫病抗感染中的免疫作用研究创造了条件。 相似文献
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尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2的表达及其生化特征 总被引:4,自引:0,他引:4
将尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2(A.aBPLA2)基因克隆至温敏表达载体pBLMVL2,在大肠杆菌RR1中成功诱导表达.表达产物A.aBPLA2约占细菌蛋白质总量的20%,并以包涵体的形式存在.纯化包涵体后,将产物变性、复性,然后用FPLC SuperoseTM12纯化,产物经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测只有单一条带.对纯化后的表达A.aBPLA2进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定.结果显示,表达A.aBPLA2的酶活性与变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶A2酶活性相近,具有类似变性后复性江浙蝮蛇碱性磷脂酶A2的溶血活性,没有抑制血小板聚集活性.最后对磷脂酶A2的结构与这些活性的关系进行了讨论. 相似文献
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利用质粒pBR322作运载体,获得了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体rRNA基因(rDNA)的部分片段在E.coli中的无性繁殖株。酶切图谱分析及Southern法分子杂交鉴定证明,重组质粒pARI含有1.95MdrDNA EcoRI-BamHⅠ双酶切片段;pARⅡ含有2.6Md的rDNABamHⅠ片段。并测定了BamHⅠ片段与pBR322连接方向。 相似文献
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苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达 总被引:21,自引:0,他引:21
将全长3.5kb的Bt基因3’端缺失,得到长为2.1kb、1.8kb的基因。分别将这3个长度(1.8kb、2.1kb、3.5kb)的基因置于水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子调控之下,并与选择标记基因aadA(编码氨基糖苷-3’-腺苷酸转移酶,具壮观霉素抗性)表达盒相连;以烟草叶绿体基因trnH-psbA-trnK为同源片段,构建成叶绿体转化载体pBT3、pBT8和pBT22。用基因枪把Bt基 相似文献
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辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
无论从应用还是从理论研究角度,辣根过氧化物酶(HRP)是一种非常重要的酶.HRP基因克隆与表达将有利于更深入研究HRP的结构与功能.利用反转录PCR从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶C(HRP-C)一个cDNA,并测定其序列.结果发现,从基因推导出的氨基酸序列与Welinder报道的辣根过氧化物酶序列有90.6%的同源性.将该基因连接到表达载体pET-24b上,利用抗HRP多克隆抗体进行Westernblot,检测有少量目标产物表达.在诱导表达过程中,没有发现细菌生长受抑制或受明显的毒害 相似文献
50.
TALF(Tachyleus antilipoposaccharide factor)对细菌内毒素(LPS)的核心部分有抑制作用。研究TALF cDNA基因在大肠杆菌中的表达,首先将TALF cDNA基因分别插入大肠杆菌表达载体pGEX-4T-2、pET22b、pET28a中,构建重组表达质粒,转化于大肠杆菌BL21(DE3)。结果表明克隆于pET22b、pET28a中的TALF cDNA基因没有表达,而融合了GST的TALF基因(GST-TALF)能够在大肠杆菌中表达,并形成包涵体。从1L培养基中可获得4mg纯度为91%的GST-TALF融合蛋白。经复性和纯化后的融合蛋白GST-TALF几乎检测不到抑菌活性及LPS中和活性,但该融合蛋白经凝血酶消化后表现出明显的体外抑菌活性及LPS中和活性。 相似文献