日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ法从日本血吸虫中国大陆株成虫ｃＤＮＡ文库中快速克隆出一大小为６００ｂｐ左右的ＤＮＡ片段,ＤＮＡ序列分析证实,所扩增到的ＤＮＡ片段中含有日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（Ｓｊ－１４ＦＡＢＰｃ）基因,将该基因重组到表达型质粒ｐＧＥＸ－２Ｔ中,表达的ＧＳＴ融合蛋白分子量是４１ｋＤ,用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达２５ｍｇ／Ｌ培养物,免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,为其用作疫苗分子创造了条件。     

家蚕的基因文库

本文报导了家蚕Bombyx ,pro基因文库的构建。Sau3A 部分酶解的12-20kb家蚕染色体DNA片段被克隆在λEMBL4的BamHl位点,得到重组噬菌体数5.5×10⁵Pfu,超过了建库要求的理论值。进一步鉴定表明：重组噬菌体呈Spi^-表型;插入的DNA.片段各不相同;并巳从库内筛选到含有与蚊虫酮酶趴基因同源顺序的阳性重组体,这些结果显示了基因文库的可靠性。     

蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体RNA基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖

利用质粒pBR322作运载体,获得了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体rRNA 基因(rDNA)的部分片段在E.coli 中的无性繁殖株。酶切图谱分析及Southern 法分子杂交鉴定证明,重组质粒pARI 含有1.95MdrDNA EcoRI-BamHI 双酶切片段;pARⅡ含有2.6Md 的rDNABamHI片段。并测定了BamHI 片段与pBR322连接方向。     

尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2Ⅱ的表达及其生化特征

将尖吻蝮蛇毒酸性磷酯酶 A2 ( A.a APLA2 )基因克隆至温敏表达载体 p BLMVL2 ,在大肠杆菌 RR1中成功诱导表达 .表达产物 A.a APLA2 约占细菌蛋白质总量 2 5 % ,并以包涵体形式存在 .纯化包涵体后 ,将产物变性、复性 ,然后用 FPLC Superose TM1 2纯化 ,产物经过 SDS- PAGE检测只有单一条带 .对纯化后的表达 A.a APLA2 进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定 .结果显示 ,A.a APLA2 的酶活性处于变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶 A2 和碱性磷脂酶A2 的酶活性之间 ,没有抑制血小板聚集活性 ,只有微弱溶血活性 .最后对 PLA2 的结构与这些活性的关系进行了讨论     

Tn细胞凋亡抑制蛋白(TnIAP)在粉纹夜蛾细胞中的表达和活性研究

在粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)细胞Tn-5B1-4中,高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明,表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白,大部分以不溶的形式存在.这一结果与以往在昆虫细胞中往往表达出可溶性蛋白不同.活性实验表明,可溶的重组TnIAP能够直接抑制caspase-9酶解Ac-LEHD-AFC的活性,也能抑制caspase-9激活HEK293细胞抽提物酶解Ac-DEVD-AFC的活性.结果进一步证明,昆虫和哺乳动物的细胞凋亡分子机制在进化上是极为保守的.     

植酸酶基因在家蚕－杆状病毒表达系统中的表达及其酶学特性

将从黑曲霉菌株Aspergillus niger 963克隆并经改造后的植酸酶基因在昆虫－杆状病毒表达系统中表达,SDSPAGE电泳检测蚕体和蛹的表达量分别达到1.43 g/L血淋巴液和1.90 g/L血淋巴液。酶活性测定结果表明,在蚕体和蛹的表达活性分别为4.67×10⁸u/L血淋巴液和5.99×10⁸u/L血淋巴液。该酶活性的最适温度范围为50～60 ℃,最适pH值为5.5～5.0和2.5。研究表明杆状病毒系统表达的植酸酶具有耐酸性和抗高温的特性,可以用于生产饲用植酸酶。     

丙型肝炎病毒基因组C区、NS3区、NS4区基因的融合、表达及初步应用

通过PCR技术从HCV全长基因组中扩增并克隆到Core区、NS4区的部分优势表面抗原肽的基因和C33a基因。再将它们以Core\,CC3c\,NS4的顺序和C33c、NS4的顺序分别拼接融合成融合抗原CCN、CN。片段之间以Gly-Gly-Gly-Gly柔性连接肽连接。经核苷酸序列分析表明,拼接点序列正确。将融合抗原CN、CCN基因分别克隆至T7启动子控制下的表达质粒PET24(a)+,PET22(b)+中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可高表达分子量约为43kD、58kD的融合抗原,表达产物以包涵体形式存在。表达产物经Ni²⁺IDA亲和柱纯化后,并对融合抗原CN、CCN的抗原性做了初步的鉴定。     

基因工程抗体融合蛋白的构建

抗体融合蛋白可以具有抗体的特性和所融合的功能蛋白的活性,可广泛用于免疫治疗、免疫诊断、抗体纯化及抗体和抗原的分析定量等,特别可用于免疫导向药物的制备。基因工程抗体融合蛋白比传统的化学交联的抗体融合蛋白具有更多的优越性。本文就基因工程抗体融合蛋白的构建和性质做一综述 。     

甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶

表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP)不仅可以深入揭示HRP结构与功能及其生理作用规律,而且为HRP的广泛需要提供新的来源.为了在甲醇酵母P.pastoris中成功表达,将编码HRP-C成熟肽的cDNA构建到pPIC9上,再转化到P.pastoris中,筛选到了分泌表达非糖基化HRP和高糖基化HRP(分子质量超过100 ku)两种主要产物的重组细胞株.优化表达条件,目标产物在摇瓶发酵液中高效表达,可达4～6 g/L.并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP,每毫升发酵液中酶活力约有2 U,经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm.