东亚钳蝎神经毒素基因BmK IT3的克隆及其在大肠杆菌中的表达

东亚钳蝎毒素基因ＢｍＫＩＴ3 编码是由 6 5个氨基酸残基组成的多肽物质。该类毒素为专一性作用于昆虫的抑制型神经毒素 ,它已被广泛用于研究离子通道作用机理[1 ] ;同时 ,它是研究蛋白质结构和功能的极好模型 ,是研究神经药理学的理想工具 ,将具有药理活性和昆虫毒性的基因导入细胞或动植物体内具有十分重要的应用价值。它对昆虫作用的专一性很高 ,对哺乳动物无害或毒性很小 ,可作为一种安全、有效的生物杀虫剂[2 ,3 ] 。我们的研究是对该基因密码子进行优化 ,采用化学合成的方法合成了适于在昆虫中表达的ＢｍＫＩＴ3 的两条长的引物 ,通过…     

酵母氨基酸发酵研究

从32株酵母菌中筛选到丙氨酸产生株产朊假丝酵母(Candida utilisY18),丙氨酸产量为1 mg/ml,发酵最适时间为72小时,最适pH值为6—7。用NTG和DES对菌株Y18进行诱变获得了一些芳香簇氨基酸变异株(FPA~r、T_(rp)~-、phe~-)和赖氨酸类似物抗性变异株(AEC~r)以及其他一些变异菌株。通过对这些变异菌株的氨基酸发酵研究,从芳香簇氨基酸、极性氨基酸和中性氨基酸三个方面,分析和探讨了酵母菌作为氨基酸生产菌的潜力及可行性。     

糖缀合物在细胞识别中的作用

<正> 细胞识别是指生活细胞对胞外信号物质的选择性的相互作用。并因而引致细胞发生专一的反应或变化,被细胞所识别的信号物质,可以是胞外介质中的某种化合物,也可以是另一细胞表面的某种成份;在后者情况下,往往随之发生细胞之间的选择性的粘着,称之为细胞一细胞之间的识别。 细胞识别的现象普遍存在于胚胎发育、神经传导、激素调节、有性繁殖、免疫反应、病     

乙肝病毒表面抗原抗体可变区基因的克隆及人－鼠嵌合抗体重链基因的表达

本文采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,从鼠抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）单克隆细胞中克隆到了该抗体重、轻链可变区（Ⅴ区）基因,并分别将其与人的恒定区基因Ｃγ３,Ｃｋ相拼接,构建人－鼠嵌合抗体基因。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ分析结果证实嵌合抗体重链基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中得到了表达。间接ＥＬＩＳＡ法免疫测定的结果表明该表达产物具有与乙肝表面抗原结合的能力。     

卵清蛋白糖肽对hCG信号转导系统的抑制作用

大鼠睾丸细胞经0.03%胶原酶分散后,采用不连续/连续Percoll密度梯度离心,可得到高纯度的间质细胞。0.52nmol/L hCG、0.1μmol/L霍乱毒素和10μmol/L Forsko-lin均可刺激间质细胞cAMP(霍乱毒素>For-skolin>hCG)和睾酮(三者无显著性差异)生成。采用链霉蛋白酶非特异性水解法制备的卵清蛋白糖肽对hCG、霍乱毒素和Forskolin刺激大鼠睾丸间质细胞cAMP和睾酮的生成均有显著的抑制作用,结果表明hCG寡糖链可能参与受体、G蛋白和腺苷酸环化酶之间的偶联过程,卵清蛋白糖肽Asn-糖链可直接抑制腺苷酸环化酶活性及/或G蛋白与腺苷酸环化酶之间的偶联。     

蓖麻蚕核糖体RNA基因在大肠杆菌中的无性繁殖

用pBR322作运载体,构建了含有蓖麻蚕核糖体RNA基因(rDNA)完整重复单位的重组质粒-pAR3。pAR3含有11.1Kb rDNA完整重复单位,包含有pAR1和pAR2所携带的rDNA片段。制作了pAR3和rDNA的限制性内切酶图谱。发现限制酶图谱与郑仲承等报道的一致,而与家蚕的rDNA的图谱不同。     

大肠杆菌启动基因的重组和表达——Ⅱ.不同启动基因对抗四环素基因表达的影响

质粒pHE5为pBR322的EcoRI—HindⅢ片段由噬菌体T4基因37的EcoRI-HindⅢ片段取代、构建而成,抗Tc基因的启动基因被破坏。在抗Tc结构基因前插入新的启动基因,可以使抗Tc功能恢复,以此可以筛选各种启动基因。我们用pHE5构建了含大肠杆菌启动基因的重组质粒800株,对它们抗四环素程度的分布作了测定,制作了重组质粒pTP210、pTP213的限制性酶切图谱,并且就应用这二个质粒作为真核基因表达运载体的可能性进行了初步讨论。     

末端片段杂交法——一种方便的基因酶切图谱分析法

由于基因工程技术的出现,很多基因可以由复杂的基因组中分离纯化。进一步分析基因结构的工作,首先便是酶切图谱的分析。本文报道的末端片段杂交法,是一种方便、通用的新方法。     

大肠杆菌启动基因的重组和表达 Ⅰ.不同启动基因对β-半乳糖苷酶结构基因表达的影响

质粒pKL6带有β-半乳糖苷酶结构基因(lacZ),启动基因突变失活,lacZ不能表达。在lacZ前插入外源DNA片段,观察lacZ的表达,可以研究启动基因的功能作用。我们用大肠杆菌染色体DNA的HindⅢ片段与pKL6重组,获得一批重组体,对这些重组体的β-半乳糖苷酶的活力水平和限制性图谱作了分析,对它们用作表达载体的可能性进行了讨论。