NCG小鼠人源化狼疮肾炎模型的构建

目的使用NOD-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Nju(NCG)小鼠建立人源化狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)模型,检测小鼠免疫重建情况及自身抗体水平,并研究小鼠存活时间、肾脏病理表现与患者临床表现的关联。方法通过NCG小鼠尾静脉回输健康人或系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)合并肾损伤患者的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立HC、LN模型。用流式细胞术检测供体PBMCs及小鼠脾脏的人源CD45~+(h CD45~+)细胞、h CD3~+T细胞、h CD19~+B细胞、h CD4~+CD25highh CD127lowTreg细胞、h CD4~+h IFN-γ~+Th1细胞及h CD4~+h IL-17A~+Th17细胞比例,间接免疫荧光法测定抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)水平,过碘酸雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察小鼠肾脏病变。结果通过尾静脉回输移植人PBMCs,可以成功在NCG小鼠中实现人源化免疫重建,重建的人源化白细胞以T细胞为主,B细胞比例极少,但SLE患者PBMCs移植则可导致相对较高程度的B细胞重建;尽管供体回输前细胞具有一定比例的Treg细胞,但回输后并非所有小鼠脾脏均可检测到明显的Treg细胞重建(3/4 HC模型组小鼠Treg细胞重建明显,1/6 LN模型组小鼠Treg细胞重建明显);而健康人Th1细胞与Th17细胞在小鼠中重建不明显(2/2); LN模型组小鼠存活时间明显低于HC模型组小鼠,且根据PBMCs供体患者的临床病情严重程度,具有不同程度的肾炎表现。结论通过SLE患者PBMCs回输的方法在NCG小鼠中建立LN模型具有可行性,该模型为研究SLE合并LN患者的发病机制及个体化治疗提供了可能。     

黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶基因的克隆与序列分析

以黑曲霉(A.niger)TCCC41013的总RNA作为模板,通过RT-PCR扩增出含自身信号肽的脯氨酸蛋白内肽酶基因,将其插入pUCm-T载体上,经PCR和酶切鉴定后进行测序并分析.所克隆的PEP基因全长为1 581bp,编码526个氨基酸残基,成熟肽为504个氨基酸残基.与GeneBank中已报道的A.niger CBS513.88的PEP序列同源性最高,达到99.75%.脯氨酸蛋白内肽酶是一种新型的丝氨酸蛋白酶,黑曲霉PEP与已克隆的其他菌种的PEP同源性不高.     

源自大黄鱼肠道柠檬酸杆菌的外切几丁质酶的特性分析（英文）北大核心CSCD

【目的】从饲喂富含几丁质饲料的大黄鱼肠道分离具有几丁质分解功能的菌株并分离鉴定新的几丁质酶。【方法】利用胶体几丁质平板分离饲喂杂鱼的大黄鱼肠道中的几丁质分解菌。对几丁质酶基因chi-X进行了克隆并在大肠杆菌中表达。对CHI-X的酶学性质进行了分析。【结果】从饲喂杂鱼的大黄鱼肠道内容物中分离出1株具有几丁质分解功能的费氏柠檬酸杆菌,其中的几丁质酶基因编码1个含493个氨基酸残基的蛋白,其中包含一个糖苷水解酶18家族催化域。CHI-X对胶体几丁质具有分解功能。最适p H和温度分别是4.0和60°C。CHI-X具有很强的pH稳定性,在pH 3.0–11.0的范围培育1 h仍保留90%左右的活性。Mn^(2+),Li^+和K^+可促进CHI-X酶活,Ag^+对CHI-X有抑制作用。CHI-X对蛋白酶和石斑鱼肠道内容物有较强的抗逆性。CHI-X可分解胶体几丁质为N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰葡萄糖胺二聚体,表明它是一个几丁质外切酶。最后,CHI-X和另一个几丁质酶Chi565表现出酶活性的加和效应。【结论】分离自肠道菌的CHI-X能很好适应海水鱼类的肠道环境,可以作为温水海水养殖鱼类的饲料添加剂使用。     

综合生物塘水体过氧化氢酶的活性,组成及其与过氧化氢的关系

在我国,关于水体酶学的研究尚未见诸报道。本文讨论了湖北黄州综合生物塘不同净化功能单元中过氧化氢酶(CAT)的组成(即未处理水样和通过孔径为3.0μ的滤膜的过滤水样各自所表现的活性)、CAT活性的变化趋势及其与底物(H_2O_2)浓度的关系。     

镉胁迫下草莓幼龄期叶、根矿质元素积累和分布的变化

采用水培实验,研究重金属镉对草莓幼龄期叶、根矿质元素含量和分布的影响。结果表明,高量镉降低草莓根中K、Ca、Mg、P、Cu、Zn、Mn、Fe的积累,叶片相应元素以及B、Mo含量也随镉浓度增大而呈降低趋势;但镉浓度较低时,K、Mg、P、Zn在叶、根中的含量均增加,而后才随镉处理浓度提高而降低。在镉胁迫下,同一元素在草莓叶、根之间的分布也受到影响,而且某些矿质元素含量间有显著相关性。     

杉木叶绿体和线粒体遗传的研究

利用ＰＣＲ技术分别以亲本杉木（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｉａｌａｎｃｅｏｌａｔａ（Ｌａｍｂ．）Ｈｏｏｋ．）、柳杉（ＣｒｙｐｔｏｍｅｒｉａｆｏｒｔｕｎｅｉＨｏｏｉｂｒｅｎｋ）和杉木×柳杉杂种的总ＤＮＡ为模板,扩增了叶绿体ｔｒｎＬｔｒｎＦ和线粒体ＣｏｘⅢ基因片段,比较了这些扩增片段的限制性内切酶ＡｌｕⅠ,ＤｄｅⅠ,ＨｉｎｆⅠ,ＭｓｅⅠ和ＲｓａⅠ的酶切片段多态性,结果表明：Ｆ１代的叶绿体ＤＮＡ为母系遗传,而线粒体ＤＮＡ为父系遗传。杉木线粒体ＤＮＡ父系遗传方式与杉科其他植物一致,而叶绿体ＤＮＡ母系遗传则为在松柏类植物中首次发现。     

成人腹泻轮状病毒的提纯及其高价免疫血清的制备

本文采用交叉免疫电泳技术,首先提纯了成人腹泻轮状病毒(Adult DiarrhoeaRotavirus简称:ADRV),并经电镜确认,用作免疫抗原,首次制备了高价兔与豚鼠抗ADRV血清和小鼠抗ADRV腹水,其特异性经交叉免疫电泳和对流免疫电泳鉴定,其效价经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测均在1:2,000以上。     

口蹄疫病毒3A基因在大肠杆菌中的高效表达

将口蹄疫病毒(Foot\|and\|Mouth Disease Virus,FMDV)的3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX\|HTb中,转化大肠杆菌BL21和DH5α,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,IPTG诱导表达。SDSPAGE和West bolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含3A蛋白,说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在,所表达的蛋白含量占菌体蛋白的29.2%。     

用基因组原位杂交与RFLP标记鉴定小麦——簇毛麦抗白粉病代换系

用荧光素标记的簇毛麦(Haynaldia villosa)基因组总DNA作探针,以普通小麦基因组总DNA作封阻,与花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ制片的染色体进行原位杂交。结果表明,抗白粉病小麦品系GN22是普通小麦-簇毛麦二体代换系;用已定位在小麦第6部分同源群上的RFLP探针psr113、psr371进行Southern分析,进一步证明,小麦品系GN21、GN22是普通小麦-簇毛麦6A(6V)代换系;结合同工酶等电聚焦电泳分析,首次把簇毛麦编码的α-淀粉酶-1生化位点定位在簇毛麦6V染色体长臂上,暂命名为α-Amy-Ⅴ1。研究结果表明,原位杂交与RFLP技术相结合是全面、准确鉴定小麦外源染色体及其与小麦染色体部分同源关系的有效方法。     

1,3-丙二醇发酵液的絮凝预处理研究*

研究了天然澄清剂Ⅱ型B组份对1-3-丙二醇发酵液的絮凝预处理效果。首先通过单因素实验和正交实验,确定了影响絮凝的主要因素及其最佳工艺条件:即在pH6.0、用量为0.01g/L、NaCl盐浓为0g/L时,絮凝率可以达到95.97％。然后考察了絮凝预处理对发酵液过滤以及电渗析脱盐的影响,实验结果表明:絮凝预处理能显著加快发酵液中固体微粒的沉降,提高过滤速度,其中絮凝样的滤饼湿基、干基重量分别比对照样增加41.13％、51.88％;絮凝预处理还能加快电渗析脱盐速度,与过滤相结合可以代替离心预处理。