意大利蜜蜂工蜂中肠的环状RNA及其调控网络分析

【目的】环状RNA(circRNA)在可变剪接、转录调控和来源基因的表达调控等方面具有重要功能。本研究旨在分析意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂中肠circRNA的数量、种类、结构特征和作用,并通过构建和分析circRNA的调控网络探索circRNA的调控功能。【方法】在实验室条件下人工饲养意大利蜜蜂工蜂,利用circRNA-seq技术对意大利蜜蜂7和10日龄成年工蜂中肠样品进行深度测序。利用find_circ软件从质控后的数据中预测circRNA。通过BLAST比对GO和KEGG数据库,对circRNA的来源基因进行功能和代谢通路注释。利用TargetFinder软件预测circRNA靶向结合的miRNA及miRNA靶向结合的mRNA,通过Cytoscape v.3.2.1软件对circRNA-miRNA和circRNA-miRNA-mRNA调控网络进行构建及可视化。通过设计背靠背引物和线性扩增引物RT-PCR对预测出的circRNA进行验证。【结果】意大利蜜蜂工蜂中肠样品的测序平均得到136 463 071条clean reads,去除rRNA后各样品的anchor reads均在136 779 122条及以上。共预测出10 833个circRNA,长度主要介于15~1 000 nt;上述circRNA的类型丰富,其中已注释的外显子circRNA数量最多,分布在西方蜜蜂1号染色体的circRNA数量最多,其次为8号染色体。CircRNA的来源基因可注释到包括结合、细胞进程和细胞在内的45个GO条目,以及包括内吞作用、内质网蛋白加工及核糖体在内的121条KEGG代谢通路,表明circRNA在意大利蜜蜂工蜂中肠的生长、发育、新陈代谢和细胞生命活动等生物学过程中发挥重要作用。进一步构建circRNA-miRNA和circRNA-miRNA-mRNA调控网络,分析结果显示部分circRNA可能作为竞争性内源RNA吸附结合microRNA,从而调控基因的表达水平。最后,对随机选择的3个circRNA的RT-PCR结果验证了其真实存在。【结论】本研究对意大利蜜蜂工蜂中肠中的circRNA进行预测、分析及鉴定。研究结果提供了中肠circRNA的数量、种类、结构特征、作用和调控网络的信息,揭示了circRNA可能通过作用于来源基因和作为竞争性内源RNA在意大利蜜蜂工蜂中肠的生长发育和免疫防御中发挥作用,为深入研究circRNA在意大利蜜蜂中肠发育及胁迫响应过程中的功能奠定了基础。     

红曲干酪的工艺及成熟特性研究

以新鲜牛乳为原料,通过单因素实验和正交实验,对红曲干酪的加工工艺进行了研究。研究结果表明,最优工艺参数为:发酵剂添加量为0.03 g/L,凝乳酶添加量为0.2 g/L,加盐量为2%,红曲添加量为0.15 g/L。在此工艺条件,干酪经42 d成熟后,其p H 4.6-可溶性氮(p H 4.6 acidsoluble nitrogen,p H 4.6-SN)含量为42.39%,12%三氯乙酸-可溶性氮(12%TCA-soluble nitrogen,12%TCA-SN)含量为33.76%。随着成熟时期的延长,干酪水分含量呈下降趋势,p H值呈现逐渐上升趋势。聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,红曲干酪外层蛋白质降解程度要高于干酪内层,并且红曲干酪对酪蛋白降解要比蓝纹干酪更加温和。反向高效液相色谱分析显示,随着成熟时间的延长,红曲干酪中可溶性多肽的种类和含量逐渐增加,表明干酪在成熟过程中蛋白水解程度不断增大,并且最终多肽的种类和含量要比蓝纹干酪更丰富。干酪感官评价最终得分为89.12,所制干酪成熟状态良好,香味浓厚,味道突出,表现出较佳的感官品质。     

应用微波技术对脱色后的H．E切片进行免疫组织化学反应的方法及应用

应用微波技术对脱色后的Ｈ．Ｅ切片进行免疫组织化学反应的方法及应用苏红,谷化平,熊正文,胡海霞（中国人民解放军第二五一医院病理科张家口０７５０００）在日常的病理工作中经常会遇到因组织块很小,所获得有意义的组织、细胞数太少,制成的切片很有限,或外地送检的...     

免疫过氧化物酶显色方法的改进及应用

免疫过氧化物酶显色方法的改进及应用熊正文苏红胡海霞李春光冯骥良张家口解放军二五一医院病理科０７５０００免疫组化染色技术以其敏感性高,特异性强,方法步骤统一等优点能将形态、机能和代谢密切结合起来,已广泛用于临床病理诊断和研究之中。目前较常用的ＰＡＰ、Ａ...     

抗原修复的常用技术及评价

抗原修复的常用技术及评价熊正文综述１史景泉２王泊云３审校１解放军第２５１医院病理科,张家口０７５０００２第三军医大学病理学教研室,重庆６３００３８３第四军医大学病理学教研室,西安７１００３２）免疫组织化学（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）又...     

宝天曼保护区的国家一级保护动物——金钱豹

我国《重点保护野生动物名录》所列保护动物共计206种,其中一级保护动物84种,豹的排号在第19位。豹的分布非常广泛,遍及亚洲和非洲大部分地区。金钱豹全身皮毛呈橙黄色,浑身有黑色斑点和环纹。但产于不同地区的金钱豹,其毛色深浅以及斑纹和环纹的形状及密度均不同,如产在我国东北的豹,毛色就较淡雅,因此,有银钱豹之称。金钱豹一般体长90～150厘米,体重50     

核壳结构CdS-TiO_2纳米颗粒体外光催化灭活白血病HL60细胞实验研究

本文研究了核壳结构CdS-TiO_2纳米颗粒光对HL60细胞光催化灭活作用,并初步探讨了CdS量子点增强TiO_2光催化灭活效率的作用机理。实验利用超声法制备了核壳结构CdS-TiO_2纳米颗粒,使用CCK-8法检测了其对白血病HL60细胞的光催化灭活效果,并采用活性氧分析和荧光发光光谱等分析手段对CdS量子点增强TiO_2光催化灭活效率的作用机理进行了分析。细胞实验结果表明,在暗室条件下,随着CdS包裹的TiO_2外壳的增厚,细胞的暗室存活率从28.5%逐渐上升至80%;在可见光照下,细胞的存活率显著下降。CdS-TiO_2纳米颗粒对HL60细胞的光催化灭活率均超过60%,其中CdS-TiO_2样品0.6对HL60细胞的光催化灭活效率最高,达到95%。根据荧光光谱和活性氧含量分析的结果推测,这可能是由于核壳结构的CdS内核与TiO_2外壳之间产生了有效的电子转移,抑制了TiO_2的空穴电子的复合,增强了TiO_2外壳的光催化活性,最终增加了TiO_2对HL60细胞的PDT灭活效果。     

酵母人工合成细胞生产植物源天然产物北大核心CSCD

植物源天然产物在医疗保健领域有着广泛的应用。目前,生产植物源天然产物的主要方式为从原植物直接提取,但此法面临诸多问题。基于合成生物学的理念,创建酵母人工细胞工厂发酵生产植物源天然产物是一种新的资源获取途径。本文将从植物源天然产物在药物和营养领域的应用前景,发酵法生产青蒿酸的研发历程,部分萜类、生物碱和长链多不饱和脂肪酸的研究进展,以及该领域相关技术前沿4个方面介绍酵母人工合成细胞生产植物源天然产物的近况。     

陕西七纺器蛛和拉土蛛不同组织酯酶同工酶的比较研究

陕西七纺器蛛(Heptathela shaanxiensis),拉土蛛(Latouchia sp.)均于1987年10月采自陕西泾阳。在同条件下采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行了不同组织的酯酶同工酶比较。实验方法酶液的制备:将饥饿10天的两种蜘蛛按常规解剖,分别取各组织置于研钵内,根据样品重量之差异,分别加入40%蔗糖溶液1—3ml,匀浆过滤,离心(3500rpm×15′)。取上清液作酶源,贮存于4℃冰箱备用,点样时加入适量0.1%澳酚蓝作电泳的指示染料。酯酶同工酶的聚丙烯酰胺疑胶电泳分离和染色、脱色:基本参照邱琼华等(1987)的方法。用日本20M光密度计(波长570nm,狭缝0.4cm)扫描…