结构指导的玉米赤霉烯酮水解酶的热稳定性改造

玉米赤霉烯酮是世界上污染最为广泛的一种镰刀菌(Fusarium)毒素,严重危害牲畜以及人类的健康。来源于粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)的玉米赤霉烯酮水解酶(zearalenone hydrolase,ZHD)能有效降解饲料中的玉米赤霉烯酮,然而饲料加工中的高温环境限制了该酶的应用。基于结构特征的理性设计可为酶的热稳定性改造提供指导。本研究首先基于蛋白质结构比对(multiple structure alignment, MSTA)筛选ZHD的结构灵活区,随后基于序列保守性打分以及构象自由能计算设计突变文库,得到基于136号和220号残基的9个单点突变设计。结果表明,9个突变体的热熔融温度(Tm)提高了0.4–5.6℃,其中S220R和S220W热稳定性表现最好,Tm分别提高了5.6℃和4.0℃,45℃下的热半失活时间分别延长了15.4倍和3.1倍,相对酶活分别为野生型的70.6%和57.3%。分子动力学模拟分析表明突变位点及附近区域的作用力得到了增强,突变体S220R和S220W的220-K130氢键成键概率分别增加了37.1%和19.3%、K130-D223盐桥成键概率分别增加了30.1%和12.5%,为ZHD热稳定性的提高作出了贡献。这项工作表明结合天然酶的结构比对、序列分析及自由能计算的热稳定性改造策略的可行性,并获得了热稳定性增强的ZHD变体,为ZHD在工业上的应用打下基础。     

植物体细胞胚干化处理研究述评

人工种子技术是一项新兴的植物生物技术,它在快速繁殖无性系、固定杂种优势发及与基因工程相结合等方面具有广阔的应用前景。到目前为止,已经发展有4种系统利用体细胞胚(体胚)制作人工种子:1.流质播种系统(fluid drilling system,Drew,1979);2.海藻酸钠凝胶包裹体胚(Redenbaugh et al.,1984,1986);3.体胚干化处理     

红隼的繁殖习性及领域选择的研究

红隼是森林益鸟。本文着重记述了其分布和数量、活动规律、繁殖习性、雏鸟生长等,并对繁殖期的领域选择作了较深入的探讨。     

中国突脐孢属一新记录种

突脐孢属(Exserohilum)由Leonard和Suggs(1974)建立。迄今,已被接受约有26个种。我国已报道了6个种。本文报道我国突脐孢属一个新记录种。 材料和方法:将采集的植物样品剪成约5cm长的小段,在培养皿中22～24℃下,保湿2～3天     

流式细胞光度计

我们研制成功的FC-1型流式细胞光度计(流式细胞计)已于1990年12月17日通过院级鉴定,鉴定委员会经过认真的测试与评审认为:我们研制的流式细胞光度计是国内第一台能同时测定细胞的两个波段的荧光,前向散射光和90°散射光的多参数仪器,具有四路线性     

侧脑室注射微量吗啡和纳络酮对小鼠记忆保持的影响

实验观察侧脑室注射微量吗啡和纳络酮对小鼠记忆保持的影响.结果表明:侧脑室注射吗啡后,小鼠从迷宫始点走到终点所需的时间显著延长,出现错误的次数增多,且具有一定的量效反应关系。这一作用可被纳络酮所阻断。而纳络酮对记忆的增强作用又可被吗啡所抵消。本实验提示中枢神经系统里的内源性阿片肽很可能参与记忆巩固的调制。     

用聚合酶链反应和生物素寡核苷酸探针分析HLA-DQα的基因型

 来自不同人的染色体DNA经聚合酶链反应(PCR)将其HLA-DQα基因的多态区242bp人工地扩增30个循环。用1/10扩增产物点在尼龙膜上。将四种不同的等位基因特异的寡核苷酸(ASOs)经Bio-11-duTP进行3'末端标记得生物素探针。以此探针对不同扩增标本做狭缝印迹杂交。结果表明用此种非放射性的方法能探测出人白细胞表面抗原DQα基因的微多态性,从而得到不同个体的基因型。ASO分型是对血清HLA分型的重要补充和发展,它在骨髓或器官移植以及法医的个人识别中有一定实用价值。