全文获取类型
收费全文 | 356篇 |
免费 | 56篇 |
国内免费 | 164篇 |
专业分类
576篇 |
出版年
2024年 | 3篇 |
2023年 | 11篇 |
2022年 | 22篇 |
2021年 | 20篇 |
2020年 | 17篇 |
2019年 | 18篇 |
2018年 | 23篇 |
2017年 | 17篇 |
2016年 | 20篇 |
2015年 | 25篇 |
2014年 | 26篇 |
2013年 | 33篇 |
2012年 | 21篇 |
2011年 | 35篇 |
2010年 | 14篇 |
2009年 | 21篇 |
2008年 | 28篇 |
2007年 | 15篇 |
2006年 | 15篇 |
2005年 | 17篇 |
2004年 | 13篇 |
2003年 | 12篇 |
2002年 | 10篇 |
2001年 | 12篇 |
2000年 | 8篇 |
1999年 | 14篇 |
1998年 | 7篇 |
1997年 | 6篇 |
1996年 | 3篇 |
1995年 | 9篇 |
1994年 | 10篇 |
1993年 | 7篇 |
1992年 | 6篇 |
1991年 | 5篇 |
1990年 | 8篇 |
1989年 | 10篇 |
1988年 | 8篇 |
1987年 | 5篇 |
1986年 | 3篇 |
1985年 | 4篇 |
1983年 | 3篇 |
1981年 | 3篇 |
1980年 | 3篇 |
1979年 | 1篇 |
1978年 | 1篇 |
1977年 | 1篇 |
1975年 | 1篇 |
1966年 | 1篇 |
1962年 | 1篇 |
排序方式: 共有576条查询结果,搜索用时 15 毫秒
491.
492.
【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。【方法】将PRRSV NADC30-like毒株编码GP5蛋白开放阅读框5(open reading frame 5,ORF5)、ORF6(编码M蛋白)分别连接至pFastBacTMDual载体P10和PH启动子下游多克隆位点,获得穿梭质粒pFB-30-ORF5及pFB-30-ORF6,酶切鉴定后,将ORF6基因插入到穿梭质粒pFB-30-ORF5 PH启动子下游,构建穿梭质粒pFB-30-ORF5-OPF6。将上述3种穿梭质粒分别转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选及PCR鉴定重组杆粒。再将获得的重组杆粒转染至SF9昆虫细胞,发现细胞病变后收获病毒液,继续盲传3代,在透射电镜下观察是否有病毒样颗粒。用第3代病毒液感染SF9细胞后,分别用GP5蛋白、His-tag、Flag-tag单克隆抗体作为一抗,通过免疫电镜、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、Western blotting鉴定重组蛋白。【结果】成功构建了3种穿梭质粒pFB-30-ORF5、pFB-30-ORF6和pFB-30-ORF5-OPF6,酶切鉴定正确。通过蓝白斑筛选及PCR验证后获得重组杆粒,分别命名为Bacmind-30-ORF5、Bacmind-30-ORF6和Bacmind-30-ORF5-ORF6。重组杆粒感染SF9细胞120h时出现明显的细胞病变,收获病毒液后,在透射电子显微镜可观察到大小为50nm左右呈现球形结构的VLPs。免疫电镜可以观察到胶体金颗粒结合在VLPs周围;IFA结果显示实验组均出现了明显绿色的特异性荧光灶;Western blotting结果表明,3种VLPs均出现特异性条带,并与预期大小一致。【结论】制备了3种NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒,为针对PRRSV新谱系流行株疫苗的研发奠定了基础。 相似文献
493.
现行教材只对密码子做了简单介绍,教师教学用书中给出的相关资料也不多。1密码子是如何破译出来的1961年尼伦伯格(Marshall Nirenberg)和马泰(Hein- rich Manhaei)用酶促法合成的尿嘧啶核糖核苷酸长链充当mRNA,加在去除了正常mRNA的细胞抽提物 相似文献
494.
目的:探讨502例丙型肝炎患者病毒基因分型的情况,分析其与性别和年龄的关系,为丙型肝炎的防治提供参考。方法:收集贵州地区502例丙型肝炎患者的血液标本,采用PCR-荧光探针法检测丙型肝炎病毒基因型,并对检测数据进行统计学分析。结果:共检出4种基因型及5种基因亚型,主要以1b型、3b型为主,其次是6a、3a型,2a型较少。不同性别丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布比较,差异有统计学意义(x2=11.029,P=0.026),男、女性患者均以1b型、3b型为主要基因型,但男性感染者明显多于女性。各个年龄组HCV基因型分布比较,差异有统计学意义(x2=102.946,P=0.000),40-59岁组感染者最多,以1b型为主,其次是20-39岁组,以3b型为主,≥60岁组感染人数较少,以1b型为主。结论:贵州地区HCV呈现多基因型分布,1b、3b型为主要流行基因型,6a、3a型次之,其余基因型较少,不同性别、年龄的HCV基因型分布存在差异性。 相似文献
495.
【目的】为较系统地了解宜宾浓香型白酒酿造过程中可培养细菌的多样性,得到一些潜在的微生物资源。【方法】采用改良的NA培养基和高氏I号培养基分离、去除冗余,测定所得细菌纯培养物的16S rRNA基因,进行系统发育分析。【结果】分离得到603株细菌,4株菌的序列与GenBank中典型菌株序列相似性低于97%,代表着潜在新类群;599株菌与GenBank中34个属、101个种的典型菌株序列相似性大于97%,其中以Bacillus为绝对优势菌(315株),Streptomyces(121株)、Lysinibacillus(35株)、Staphylococcus(45株)为次优势菌,其余各属菌株均在10株以下。而且有16个属均只检测到1株菌。【结论】宜宾浓香型白酒发酵过程中的细菌呈现出较为丰富的多样性和一定的稳定性。 相似文献
496.
摘要 目的:探讨小儿危重病例评分(PCIS)联合脑脊液降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)对重症病毒性脑炎(SVE)患儿预后不良的预测价值。方法:回顾性分析2020年1月至2021年12月我院收治的104例SVE患儿的临床病历资料,根据儿童格拉斯哥预后量表(CGOS)将患儿分为预后不良组(CGOS评级1~4级,n=39)和预后良好组(CGOS评级5级,n=65)。采用PCIS对患儿病情严重程度进行评估,采用酶联免疫吸附法检测患儿脑脊液PCT和IL-6水平。采用多因素logistic回归分析SVE患儿预后不良的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估PCIS联合脑脊液PCT及IL-6对预后不良的预测价值。结果:预后不良组意识障碍、惊厥、合并脏器损伤发生率、脑脊液白细胞计数、PCT、IL-6水平高于预后良好组(P<0.05),视频脑电图(VEEG)重度异常构成比大于预后良好组(P<0.05),预后不良组PCIS评分低于预后良好组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示:合并脏器损伤、VEEG重度异常、脑脊液白细胞计数(较高)、PCT(较高)和IL-6水平(较高)是SVE患儿预后不良的危险因素(OR=1.449、3.732、1.355、1.483、1.388,P<0.05),PCIS评分(较高)是SVE患儿预后不良的保护因素(OR=0.769,P<0.05)。PCIS评分、脑脊液PCT和IL-6预测预后不良的曲线下面积(AUC)为0.869,灵敏度、特异性分别为0.85、0.78,均高于单一指标检测。结论:PCIS、脑脊液PCT及IL-6均是SVE患儿预后的影响因素,联合检测有助于预测患儿预后不良发生风险,从而指导临床制定针对性诊疗方案以改善患儿预后。 相似文献
497.
目的:观察腹式子宫全切术后硬膜外镇痛应用舒芬太尼复合吗啡时两种药物不同剂量的镇痛效果和不良反应,以寻找其最佳剂量配伍。方法:选择90例美国麻醉医师协会(ASA)标准Ⅰ-Ⅱ级、年龄20-60岁拟行腹式子宫全切术的病人,均实施腰硬联合麻醉。随机分成3组,每组30例:Ⅰ组:舒芬太尼10μg+吗啡2 mg+氟哌利多1 mg+1%罗哌卡因20 mg;Ⅱ组:舒芬太尼15μg+吗啡1.5 mg+氟哌利多1 mg+1%罗哌卡因20 mg;Ⅲ组:舒芬太尼20μg+吗啡1 mg+氟哌利多1 mg+1%罗哌卡因20mg。术中监测生命体征,记录术后24小时内的镇痛效果、不良反应及辅助镇痛药物的使用情况。镇痛效果评价采用视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)标准。结果:2组各个时间点VAS评分均明显低于1组(P〈0.05),在术后6 h,8 h,12 h,18 h,24 h与3组有统计学差异(P〈0.05),3组在2 h,4 h,6 h的VAS评分低于1组(P〈0.05);2组恶心评分与3组相比明显较低(P〈0.05),其他不良反应三组间没有统计学差异;各组患者在术后24h内辅助镇痛药物使用情况比较无统计学差异(P〉0.05)。结论:舒芬太尼15μg复合吗啡1.5 mg用于腹式子宫全切术后硬膜外镇痛效果优于其他常用剂量配伍,镇痛效果平稳确切且不良反应少,具有临床应用价值。 相似文献
498.
目的 探讨非侵袭性真菌性鼻窦炎的实验室诊断方法,分析其致病菌,为鼻窦炎合并真菌感染的临床诊断、治疗提供依据。方法 对我院临床及鼻内镜下所诊断的10例真菌性鼻窦炎患者,鼻内镜手术时直接吸取病变的鼻窦黏膜及窦腔内容物,通过直接镜检、真菌培养、传统鉴定及分子生物学鉴定和组织病理学检查对其进行检查。结果 10例病例中,直接镜检阳性者8例;病理学检查可见真菌菌丝或者孢子者8例;接种培养及基因鉴定阳性者5例(感染菌株包括2例烟曲霉复合体、1例杂色曲霉、1例枝孢样枝孢霉、1例帚霉)。不同方法检测出的阳性病例并非完全重叠。结论 真菌镜检、真菌培养、真菌分子生物学鉴定、组织病理学检查在诊断真菌感染时可以互补,有助于明确诊断及发现新菌株。 相似文献
499.
500.
新疆草地净初级生产力(NPP)空间分布格局及其对气候变化的响应 总被引:4,自引:0,他引:4
分析植被物候与净初级生产力对气候变化的响应一直是研究全球变化的核心内容之一。新疆草地生态系统极为脆弱,对气候和环境变化的影响十分敏感,在新疆地区开展草地物候和净初级生产力及其对气候变化的响应有着独特的意义。基于遥感数据和野外台站实测数据,利用CASA模型模拟了新疆草地植被净初级生产力(NPP),阐述了2001—2014年新疆地区草地的NPP的空间格局及与气象因子的关系。(1)通过实测生物量精度检验表明,CASA模型基本可以反映新疆地区草地植被NPP。(2)2001—2014年新疆草地NPP平均值为102.49 gC m-2 a-1。不同草地类型的NPPA存在明显差异。其中,山地草甸平均NPP最高,达到252.37 gC m-2 a-1;温性草甸草原次之,为204.93 gC m-2 a-1。高寒荒漠和温性荒漠的平均NPP最低,分别为43.94 gC m-2 a-1,53.11 gC m-2 ... 相似文献