高分子膜载体固定化木瓜蛋白酶

在浸润条件下,以0.5%(v/v)戊二醛交联的高分子膜尼龙载体固定化木瓜蛋白酶。对固定化条件进行了优化,比较了固定化酶与游离酶的酶学参数。结果表明,4℃、pH6.0条件下,将膜载体浸润于2mg/mL酶液中5h,固定化酶活为303.4U/g。固定化酶最适反应pH为6.0～7.0,最适反应温度为65℃。其pH稳定性、热稳定性均比游离酶高。     

原发陛胃癌REG 1A mRNA的表达与临床病理特性的关系研究

本文采用RT—PCR的方法检测胃癌组织的REG 1A基因mRNA表达,并分析其与胃癌临床特征的相关性。结果显示有78％（183／235）的原发性胃癌REG 1A mRNA阳性。REG 1A mRNA在胃癌中的表达与肿瘤的浸润生长方式、印戒细胞癌及低分化胃腺癌关系密切。与REG 1A mRNA阳性的肿瘤患者相比,REG 1A mRNA阴性高分化腺癌患者有更好的预后。同时REG 1A mRNA阳性的肿瘤发生血行转移的机会要显著高于REG 1A mRNA阴性肿瘤。因此REG 1A mRNA的表达与胃癌浸润性生长密切相关。可能是高分化胃腺癌的一个不良预后指标。     

靶向细胞周期蛋白B1的抗肿瘤研究

细胞周期蛋白B1(cyclin B1,CCNB1)是有丝分裂期(M期)周期蛋白,与细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)结合形成成熟促进因子(maturation promotingfactor,MPF),MPF的激活为真核细胞启动有丝分裂所必需.CCNB1在肿瘤组织中普遍高表达,该蛋白质作为一种细胞周期进程调节剂在肿瘤细胞内的表达量是判断肿瘤恶性程度高低的指标之一,被视为肿瘤抗原,故靶向CCNB1进行抗肿瘤治疗是肿瘤基因治疗中一个极有潜力的策略.首先分析了CCNB1与肿瘤的相关性,进而从CCNB1活性抑制因子、药物或化合物对CCNB1的抑制作用及CCNB1与抗肿瘤免疫等多方面对靶向CCNB1的抗肿瘤研究进行了综述.     

小鼠膈腹膜淋巴孔和膈淋巴管的发育

应用透射电镜、扫描电镜和酶组织化学方法,研究胚胎期和出生后不同时期小鼠膈腹膜淋巴孔（PLS）和膈淋巴管的发生和发育,并用Elescope计算机图像处理技术对PLS进行定量分析。结果发现：胚胎13天时,膈腹膜仅由扁平形间皮细胞（FMC）组成;胚胎15天时,FMC间出现立方形间皮细胞（CMC）和早期腹膜淋巴孔（NLS）;胚胎18天时,膈毛细淋巴管出现,台盼蓝吸收试验显示NLS无物质吸收功能;出生后1天（PND1）,膈毛细淋巴管内皮细胞向PLS伸出胞质突起,并横跨CMC下结缔组织纤维和基底膜,形成腹膜下小管。后者与PLS沟通,建立了腹膜腔内物质转归通路。台盼蓝吸收试验表明,出生后PLS具有物质吸收功能,即为成熟腹膜淋巴孔（MLS）。PND5,立方细胞嵴（CMCR）发生,膈毛细淋巴管数量增多。PND10,大量立方细胞嵴融合,形成条带状分布的立方细胞区域,其上分布有大量MLS。随着发育进展,MLS平均面积和平均分布密度逐渐增大,且随着膈淋巴管的发育,吸收功能逐渐增强。     

卵巢上皮肿瘤淋巴转移与血管内皮生长因子C的表达

研究卵巢上皮肿瘤血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达与新生淋巴管和血管生成及肿瘤转移的关系。应用原位杂交和免疫组织化学法,检测卵巢上皮癌、交界性肿瘤和良性肿瘤组织VEGF-CmRNA和蛋白的表达,并结合图像分析,计数血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)阳性脉管数和以CD31标记的微血管密度(MVD)。结果显示,卵巢上皮癌VEGF-CmRNA和蛋白表达阳性率、VEGFR-3阳性脉管数和MVD均显著高于交界性肿瘤和良性肿瘤(p<0.05)。卵巢上皮癌组织中,有淋巴结转移患者VEGF-C表达阳性率、VEGFR-3阳性脉管数和MVD高于无淋巴结转移患者,临床分期Ⅲ-Ⅳ期患者VEGF-C表达阳性率、VEGFR-3阳性脉管数和MVD高于Ⅰ-Ⅱ期患者(p<0.05),VEGF-C阳性表达患者的VEGFR-3阳性脉管数和MVD均显著高于阴性表达患者(p<0.05),VEGFR-3阳性脉管数和MVD呈正相关(p<0.01)。研究提示VEGF-C促进了肿瘤诱导的淋巴管生成和血管生成,在卵巢上皮癌的淋巴转移中起重要作用,VEGF-C可作为判断肿瘤淋巴转移的生物学指标之一。     

端粒和端粒酶的发现历程

端粒是染色体末端的特殊结构,它由简单重复的DNA序列和与之结合的蛋白质构成,保护染色体末端不被降解或融合,并使染色体能够完全复制。端粒酶是特殊的逆转录酶,它利用自身的RNA亚基作为模板复制出端粒DNA。端粒和端粒酶的研究进程中贯穿着发现现象/问题-提出概念/模型-实验验证的思路,整个过程就像相继解开一个个谜团一样有趣。因此它是一个很好的科学问题推演的案例。本文以时间为顺序进行整理,重现了这一发现历程。     

微水相超声波协同固定化脂肪酶催化酯交换过程优化

超声波协同固定化脂肪酶催化制备生物柴油的最佳工艺条件为：超声波功率70W、叔丁醇为反应介质、叔丁醇用量3％（v／v）、醇油比3：1且甲醇分三批加入、反应温度40℃、水含量为2％（v／v）。副产物甘油对固定化脂肪酶使用寿命影响最大,使用后的固定化脂肪酶用丙酮洗去表面的甘油,进行酯交换反应,酶的稳定性大为提高,可连续使用16批次。     

RET原癌基因与先天性巨结肠相关性的分子遗传学研究进展

先天性巨结肠(hirschsprung disease,HSCR),又称肠无神经节细胞症,是典型的肠神经系统发育异常疾病.目前已经发现11种基因和5个易感位点与HSCR发病相关.其中RET原癌基因(RET proto-oncogene,RET)是主要的易感基因.虽然大部分HSCR发病风险都与RET基因相关,但只有不到15%的散发性HSCR患者发生RET基因编码区的突变.近期研究发现,RET基因非编码区的调节性突变可能在HSCR发生中起重要作用.现着重对RET基因与HSCR相关性的最新研究进展进行综述.     

环境污染物对巨噬细胞的影响及生物监测意义

研究环境污染物亚硫酸盐和无机汞对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,探讨巨噬细胞作为生物监测指示物的意义。实验取小鼠腹腔巨噬细胞分别经Na_2SO_3和HgCl_2体外培养,光镜和电镜下观察细胞形态学改变,检测其NO产量,还原MTT能力和吞噬功能。结果显示,小鼠腹腔巨噬细胞染毒后,细胞形态均发生显著改变;NO浓度明显降低,还原MTT能力受抑制,吞噬功能明显减弱(p<0.05或p<0.01)。高浓度(10~(-4)mol/L)HgCl_2细胞毒性作用显著,可致巨噬细胞坏死。实验表明,Na_2SO_3和HgCl_2对小鼠腹腔巨噬细胞具有明显损伤作用,进而直接影响巨噬细胞的非特异性防御功能。实验提示巨噬细胞可作为生物监测指示物,应用于环境污染的生物监测。     

抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测

为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白,本研究采用重叠延伸PCR方法将2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟病毒E2蛋白主要抗原编码区基因)拼接成融合基因2E8mE2,并插入原核表达载体pET-DsbA,将重组表达质粒pET-DsbA-2E8mE2转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)PlysS中进行IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定,结果表明:2E8mE2融合基因在大肠杆菌中获得了表达,表达产物以包涵体形式存在,分子量约为65kDa,与预期的大小一致。分别采用亲和层析法和谷胱甘肽再氧化法对融合蛋白进行纯化和复性,红细胞凝集试验证实:2E8mE2融合蛋白复性效果良好,既能够与人红细胞结合,又能够与猪瘟病毒抗体反应,具有双功能特性。