双孢蘑菇部分cDNA文库的构建及筛选

构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus菌株AA和A41的部分cDNA文库,其滴度分别为1.0?05 pfu/ml和6.0×104pfu/ml。用地高辛标记的丛生差异片段探针对文库进行筛选,分别获得5个和3个阳性克隆。     

双孢蘑菇杂交菌株As2796家系的分子遗传研究

应用PCR和凝胶电泳等技术,对双孢蘑菇杂交菌株As2796及其亲本和子代作分子遗传标记跟踪分析,结果如下: 1) 总DNA的RAPD分析表明,随着遗传代数的增加,杂种子代和出发异核体亲本间的遗传差异逐渐增大; 2) mtDNA的酶切图谱表明,亲本8213及其杂交子代具有相同的基因型,表明双孢蘑菇的mtDNA呈单亲遗传; 3) Est同工酶的PAGE图谱表明, 结合了亲本02高产特征和8213优质特征的杂交子代具有两个亲本的标记带型,证明Est同工酶标记是双孢蘑菇新菌株特性预测或鉴定的有效指标。     

双孢蘑菇野生种质资源营养成分分析与评价

为了评价双孢蘑菇野生种质资源的营养成分,筛选具有较好或特殊营养成分的种质,为双孢蘑菇育种提供科学的参考依据。以3份主栽品种为对照,分析评价了93份双孢蘑菇野生种质材料的蛋白质、氨基酸和脂肪酸的营养成分含量,并以营养成分含量均高于均值为依据筛选营养高效均衡的种质资源。结果表明,双孢蘑菇野生种质的蛋白质含量为29.50-37.60 g/100g,必需氨基酸含量为4.51-8.89 g/100g,必需氨基酸的比例为24.69%-40.59%,亚油酸含量为4086.55-14190.28 mg/kg,不饱和脂肪酸的比例为77.63%-87.47%。氨基酸的平均变异系数21.05%,亚油酸的变异系数22.93%。93份双孢蘑菇野生种质资源中氨基酸、脂肪酸含量存在丰富的变异,基于实验结果筛选到14份营养高效均衡的种质资源,可为双孢蘑菇品质提升定向育种提供亲本材料。     

双孢蘑菇耐热相关基因的表达载体构建及转化研究

构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus耐热相关基因028-1全长cDNA序列的双元表达载体,通过农杆菌介导转化双孢蘑菇非耐热菌株8213,经潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得了一批双孢蘑菇转基因菌株。对10株转基因菌株进行了不同温度下的草管走菌试验,结果显示大部分转基因菌株的耐热性能有较为明显的提高。