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根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩 增vt1、vt2。诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观 察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中vt2基因检测、克隆和序列分析。结果显示VT2噬菌 体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此 后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑。电镜下噬 菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构。以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA 带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列(X07865,NC_002655,BA000007,AF291819) 的同源性分别达到99%,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体(?)HY。 相似文献
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【目的】研究肝硬化大鼠的细菌易位情况,并探讨甜菜碱对其的干预作用。【方法】随机将48只健康雄性SD(Sprague dawley,SD)大鼠分为四组:正常对照组(N),甜菜碱干预的正常对照组(NB),肝硬化模型组(M),甜菜碱干预的肝硬化模型组(MB)。采用复合致病因素法诱导大鼠肝硬化,NB组和MB组使用1 000 mg/(kg w·d)的甜菜碱水溶液灌胃,N组和M组使用等体积饮用水灌胃;HE染色观察肝脏与小肠损伤情况,并检测各组动物脏器指数与细菌易位情况。【结果】M组大鼠体重增长缓慢(与N组比较,4周和6周时间点均P=0,P0.01);与M组相比,MB组大鼠体重增长较快,至6周时间点体重差异显著(P=0.023,P0.05)。与N组相比,M组动物4周时间点肝脏指数显著升高(P=0,P0.01);6周时间点肝脏(P=0,P0.01)、脾脏指数(P=0.038,P0.05)均显著升高,肾脏指数显著降低(P=0.019,P0.05);与M组相比,6周时间点MB组动物肝脏指数(P=0.038,P0.05)明显降低,肾脏指数(P=0.011,P0.05)明显升高。M组动物肝、肠组织发生明显病理学改变;MB组动物病理学改变减轻。M组发生细菌易位的大鼠数量升高,4周时主要易位于MLN,6周时主要易位于MLN和肾脏;MB组发生细菌易位的大鼠数量有所减少,其中6周时易位至MLN的大鼠数量明显减少(P=0.046,P0.05)。【结论】复合致病因素诱导的肝硬化大鼠,发生细菌易位的器官主要是MLN和肾脏,易位的细菌可通过淋巴管道转位,并随肝硬化病程进展趋于严重。甜菜碱除了其转甲基的保护作用以外,很可能还通过对肠道的保护作用,在一定程度上阻止了肝硬化动物细菌易位的发生,从而发挥了对肝脏的保护作用 相似文献
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根据GenBank中毒素基因vt1、vt2序列设计合成4对引物,以大肠杆菌O157菌株DNA为模板,扩增vt1、vt2,从只含有vt2的菌株中诱导释放噬菌体,以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,获得vt2、vt2-A、vt2-B 3条特异性DNA带;将vt2-A、vt2-B扩增产物纯化后,分别插入pMD18-T载体,测序结果与相应序列比较,vt2-A和vt2-B亚单位的基因序列与GenBank中编码VT2毒素的A、B亚单位的核苷酸序列(X07865,NC_002655,BA000007,AF291819)的同源性分别为98%~99%、96%~100%,确定vt2位于噬菌体,并为进一步研究大肠杆菌O157中VT噬菌体的毒力转导、VT2毒素的表达和应用奠定基础. 相似文献
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根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157H7菌株DNA为模板,扩增vt1、vt2.诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中vt2基因检测、克隆和序列分析.结果显示VT2噬菌体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑.电镜下噬菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构.以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列(X07865,NC_002655,BA000007,AF291819)的同源性分别达到99%,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体()HY. 相似文献