应用PCR技术对先天性长QT综合征KCNQ1 基因进行定点突变的研究

利用聚合酶链反应（PCR）技术对长QT综合征（LQTS）KCNQ1基因进行定点突变的研究。首先设计两对引物（包含预定的突变）,通过3轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段,然后将片段克隆入T载体中,通过酶切连接的方法将突变点引入到pIRES2-EGFP-KCNQ1中,随后用Effectene转染试剂介导转染HEK293细胞。结果在真核表达载体pIRES2-EGFP-KCNQ1基础上获得了KCNQ1 cDNA C934T的突变体,测序表明在序列中发生了预期的突变。将含突变点的pIRES2-EGFP-KCNQ1转染HEK293细胞后,在荧光显微镜下观察到被转染的HEK293细胞发出绿色荧光,表明含突变点的pIRES2-EGFP-KCNQ1得到了表达。Abstract: To study PCR site-directed mutagenesis of long QT syndrome KCNQ1 gene in vitro. The site-directed mutagenesis of LQTS gene KCNQ1 was made by PCR. Two sets of primers were designed according to the sequence of KCNQ1 cDNA, and mismatch was introduced into primers. Mutagenesis was performed in a three-step PCR. The amplified fragments from the third PCR which contained the mutation site were subcloned into the T-vecor PCR2.1.Then the fragments containing the mutation site was obtained from PCR2.1 with restriction enzyme digestion and was inserted into the same restriction site of pIRES2-EGFP-KCNQ1. With Effectene Transfection Reagent, pIRES2-EGFP-KCNQ1 was transfected into HEK293 cell. The sequencing analysis showed that the mutation site was correct. Mutation from T to C in 934 site of KCNQ1 cDNA was found. Under the fluorescence microscope, the green fluorescence was spread in the transfected HEK293 cell, meaning the pIRES2-EGFP-KCNQ1 containing the mutation site was expressed correctly.     

The Fate of Mitochondria in Ibex-hirus Reconstructed Early Embryos

Nuclear transfer can be used to maintain limited popu-lations of highly endangered species [1–3] . Especiallywhen the oocytes of these species are difficult to obtain,inter-species nuclear transfer seems more appropriate forthis goal. The main methods are as follows: somatic cellis injected directly or fused by electroporation with re-cipient enucleated oocyte. Therefore, nDNA as well asmtDNA ought to be transferred totally or partially to theoocyte. Mitochondria provides adenosine triphos…     

Tissue Distribution and Purification of Prophenoloxidase in Larvae of Asian Corn Borer, Ostrinia furnacalis Guenée (Lepidoptera: Pyralidae)

Phenoloxidase (PO) plays an important role in the de-fense response to the foreign invaders, e.g. pathogens andparasites, in the formation of melanin as well as in cuticlesclerotization in insects [1]. PO is synthesized as azymogen, prophenoloxidase (PPO)…     

小麦RAN1在酵母系统中影响微管的完整性和核质运输过程

真核生物的小G蛋白 Ran在进化过程中比较保守,它可直接参与细胞周期调控过程,它的缺失突变可以影响很多细胞生理进程。我们已经从小麦(Triticum aestivum L. cv. Jingdong No. 1) cDNA文库中克隆到一个新的RanGTPase的同源基因TaRAN1。在此基础上利用裂殖酵母模式系统研究了该基因的功能。研究结果表明,TaRAN1基因超表达可产生缺陷的纺锤体微管,这可能是导致我们以前观察到的异常染色体分离现象的原因。反义TaRAN1基因表达的酵母细胞,微管系统受到破坏。我们推测TaRAN1蛋白在细胞有丝分裂的纺锤体组装和维持微管系统的完整与稳定过程中起着重要作用。透射电镜观察实验结果显示, 超表达TaRAN1的酵母细胞具有异常的核膜结构,反义表达TaRAN1的酵母细胞有异常的液泡结构和紊乱的膜结构,由此推测, TaRAN1在整个核质运输事件中可能是必须的。     

拟南芥室内培养技术

本文报道了室内培养拟南芥的一些简便易行的改进技术。采用我们改进的营养土、蛭石、素沙混合培养介质和直播方式培养拟南芥, 并根据其生物学特性在温度、空气湿度、土壤水分和光照等方面给予适当管理,能培养出生长更健壮、更好地满足实验要求的拟南芥植株。此外还介绍了播种、浇水、生育期调节、种子保存、病虫害防治和防混杂等环节的一些技巧措施。与其他培养方法相比,此法不仅简便、效果好,而且适合较简易的培养条件。     

克氏原螯虾洞穴的生态特征及其对水利工程安全影响的初步研究

在分类学上,克氏原螯虾(Procambarus clarkia(Girard))隶属于节肢动物门,甲壳纲,十足目,爬行亚目,螯虾科,原螯虾属[1]。克氏原螯虾为外来物种,原产于北美洲,主要分布在美国南部和墨西哥北部,1930年引入日本,约在20世纪40年代由日本引入我国南京[2],由于食性广、繁殖快、生长迅速、适应性强,现在已成为分布于长江中下游地区一些水域虾类资源的优势种群。克氏原螯虾具有掘洞的习性,洞穴在其生活史中是重要的环境要素,因此人们一直担心其对江河大堤和水库大坝会造成危害[3]。国外对克氏原螯虾的穴居行为以及对农田的危害作过一些研究[4—6],但国内类似的研究以及有关克氏原螯虾对水利工程影响的研究尚属空白。作者就克氏原螯虾掘洞生态习性及其对堤坝工程安全影响开展了初步研究,以期为有关部门采取有效措施来降低其不利影响和根除隐患,确保水利工程的安全提供一些科学的决策依据。1材料与方法1·1研究区域研究区域为长江中下游地区的湖南、湖北、江西、安徽、江苏和上海五省一市,该区域克氏原螯虾种群分布较多,洪水发生频率较高。研究水体为江河、湖泊、水库、塘堰和沟渠,重点研究长江干流荆江段、鄱阳湖、洞庭湖、三湖连江水库...     

广州市红树林和滩涂湿地生态系统与大气二氧化碳交换

在生物量调查和土壤温室气体排放量测定基础上,对广州市红树林和滩涂湿地生态系统与大气CO₂交换进行研究,分析湿地植被净生产力吸收CO₂的能力和不同积水状态下(常年积水、间歇积水、无积水)湿地碳汇功能.结果表明:红树林湿地植被净生产力吸收CO₂ 33.74 t·hm^-2·a^-1,土壤排放CO₂(包括CH₄折算成CO₂的温室效应量)12.26 t·hm^-2·a^-1,湿地每年净吸收大气CO₂ 21.48 t·hm^-2,说明红树林湿地是一个强的碳汇;滩涂湿地植被净生产力吸收CO₂ 8.54 t·hm^-2·a^-1,土壤排放CO₂ 5.88 t·hm^-2·a^-1,排放CH₄ 0.19 t·hm^-2·a^-1,若按碳素折算,湿地每年吸收大气中碳素2.33 t·hm^-2,土壤排放碳素1.74 t·hm^-2包括（CH₄中的碳),系统净固定碳0.59 t·hm^-2,说明滩涂湿地是一个弱的碳汇,若将CH₄的温室效应折算成CO₂量,则土壤排放CO₂ 9.78 t·hm^-2·a^-1,排放比吸收多1.24 t·hm^-2·a^-1,对大气温室效应而言,滩涂湿地是一个弱碳源;常年积水下排放的温室气体主要是CH₄,无积水下排放的温室气体主要是CO₂;常年积水湿地碳汇功能最大,无积水湿地碳汇功能最小.     

一种改进的水稻成熟胚愈伤组织高效基因转化系统

以成熟胚愈伤组织为材料的农杆菌介导水稻转化法虽已建立,但转化频率仍有待提高.本文以粳稻(Oryza sativa)品种(中花10号和中花11号)的成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,对组织培养体系及影响遗传转化的因素进行优化,建立了一套改进的农杆菌介导的水稻高效遗传转化系统.农杆菌菌株为EHA105,质粒载体是pUN1301/OsRAA1,其中含有标记基因GUS和筛选基因HPT.愈伤组织诱导培养基为NBD2(NB 2 mg·L-12,4-D),继代培养基为NBD0.5,预分化与分化培养基为RE1(MS 1 mg·L-16-BA 0.25 mg·L-1NAA 0.5 mg·L-1KT 0.2 mg·L-1ZT)和RE2(MS 1 mg·L-16-BA 0.5 mg·L-1NAA 0.5 mg·L-1KT 0.2 mg·L-1ZT).另外,还分析了影响T-DNA转移的多种因素,如外植体种类、愈伤组织预培养基和愈伤组织继代次数等.采用优化的转化程序,水稻愈伤组织转化率和植株转化率可达70%以上.     

小麦春化相关基因的分子克隆与功能分析

小麦春化相关基因的分子克隆与功能分析@种康$中国科学院植物研究所!北京100093@许智宏$中国科学院植物研究所!北京100093@谭克辉$中国科学院植物研究所!北京100093小麦;;基因;;分子克隆     

无血清培养鹌鹑胚胎骨骼肌细胞的光镜与电镜观察

用无血清、无胚胎抽提液培养液（Ｅａｇｌｅ’ｓ，ＭＥＭ）培养孵育８ｄ的鹌鹑胚胎骨骼肌细胞，接种后圆形的生肌细胞可发育、分化形成线状的肌管，历时４—６ｄ。对培养７２ｈ肌细胞苏木精－伊红染色光镜照相和电镜观察证明肌细胞在本实验条件下能分化形成肌细胞特有的横纹结构和肌丝结构。