深圳郊区寄生小菜蛾的赤眼蜂种类及消长动态

在深圳郊区龙岗示范生态农场,寄生于小菜蛾的赤眼蜂为拟澳洲赤眼蜂Trichogrammaconfusum和赤眼蜂一新种Trichogramma sp.,其中拟澳洲赤眼蜂稍占优势.其寄生率受季节和化学农药的影响,全年中以秋季为最高,在收获期的菜芯地可高达30-35%;夏季降雨是寄生率低于5%的主要原因;在经常施用化学农药的菜地,寄生率始终维持在10%以下.小菜蛾卵不孵率随寄生率增加而升高,使小菜蛾卵总死亡率增加.     

寄主植物对瓜蚜实验种群生命表参数的影响

在(25±1)℃条件下比较了5种寄主植物上瓜蚜实验种群生命表参数.结果表明:在不同寄主植物上,瓜蚜各龄历期、成蚜寿命、日均产仔量、净增殖率、内禀增长率、周限增长率、平均世代历期和种群加倍时间等均存在显著差异.瓜蚜完成1代所需时间在瓢葫芦上最长,为5.84 d,其他4种供试植物上差异不显著(5.24～5.45 d).成蚜寿命在黄瓜上最长,为20.04 d,其他4种供试植物上差异不显著(14.76 ～ 16.03 d).瓜蚜种群存活曲线在所有供试寄主植物上均为Ⅰ型,即死亡主要发生在后期,而且在黄瓜上的存活率高于其他4种供试植物.根据瓜蚜内禀增长率大小排序,寄主适合性依次为哈密瓜＞瓢葫芦＞南瓜＞黄瓜＞茭瓜.     

鸡Zong菌的液体发酵与毒理研究

鸡Ｚｏｎｇ菌Ｔｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｕｍｉｎｏｓｕｓ（Ｂｅｒｋ）．Ｈｅｉｍ采自四川西昌野生子实体,经分离,纯化,鉴定、保存于ＰＤＡ琼脂斜面培养基。报道鸡Ｚｏｎｇ菌菌丝体深层发酵在５００Ｌ发酵罐中,温度２８～３０℃,ｐＨ６．０～７．０接种量１％～１．５％,通气量为１：１～１：１．２（体积比）,可在３０ｈ获得鸡Ｚｏｎｇ菌菌丝体２４．５ｇ／Ｌ（干重）还对鸡Ｚｏｎｇ菌菌丝体的毒性进行了探讨,选用Ａｍ     

南瓜单粒花粉可溶蛋白等电聚焦研究

利用显微操作方法对南瓜单个花粉可溶蛋白成功地进行了等电聚焦,获得了清晰的电泳谱带。分析其谱带表明,同一植株同一朵花上的花粉之间存在着蛋白谱带的差异,统计结果显示其按１：１的孟德尔规律分离。单花粉蛋白等电聚焦结合显微镜操作技术对于遗传育种和发衣生物学研究具有重要的应用前景。     

鱼类和两栖类性别决定的研究进展

鱼类和两栖类在脊椎动物的演化过程中是非常关键的两个类群,人们对于这两类动物性别决定的研究已经取得了一些进展.这些进展不仅对动物性别决定演化的研究有基础性贡献,而且对发展养殖业也有理论指导意义.     

沙葱萤叶甲海藻糖磷酸酶基因GdTPP的克隆、原核表达及对温度胁迫的响应

【目的】海藻糖磷酸酶(Trealose-6-phosphate phosphatase,TPP)是参与昆虫海藻糖合成的关键酶之一。本研究旨在克隆和表达沙葱萤叶甲Galeruca daurica海藻糖磷酸酶基因,分析其对不同温度胁迫的响应,以期为进一步揭示其在沙葱萤叶甲生长发育及抗寒、耐热中的作用奠定基础。【方法】根据沙葱萤叶甲转录组数据,通过cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆沙葱萤叶甲TPP的全长cDNA序列,并对该基因进行生物信息学分析;将该基因与pET28a载体链接构建表达载体,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)使其表达;利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测TPP基因在沙葱萤叶甲2龄幼虫不同温度下的表达格局。【结果】克隆获得1条沙葱萤叶甲TPP基因cDNA全长序列(GdTPP,GenBank登录号:MG431210),该基因全长1 372 bp,开放阅读框(ORF)864 bp,编码287个氨基酸;蛋白预测分子量为32.32 ku,等电点(pI)为6.19;无信号肽和跨膜结构;包含2个N-糖基化位点;蛋白质亚细胞定位预测该蛋白位于细胞质中。同源性分析表明,GdTPP与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata TPP亲缘关系最近。成功构建原核表达载体pET28a-GdTPP,经IPTG诱导,GdTPP在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中高效表达。qPCR结果表明,低于25℃对照时,GdTPP表达量随着温度下降而上升,﹣10℃时达到最高值,为对照的1.82倍;高于25℃对照时,GdTPP表达量随着温度上升而上升,40℃时达到最高值,为对照的1.68倍。【结论】沙葱萤叶甲幼虫通过上调GdTPP的表达来应对高温和低温胁迫,该结果为进一步揭示TPP在昆虫应对温度胁迫过程中的作用奠定了基础。     

冰核细菌表达冰核蛋白特性的研究

选用１００２５Ａ和ＱＦ－９５－Ｆ１９两株分离自杨树的冰核活性细菌,探讨了两株菌不同生长阶段与它们冰核活性表达的特性。实验结果显示,冰核活性细菌在ＭＰＤＡ培养液中表达冰核蛋白的特性及活性与细菌浓度、菌龄以及培养的环境条件相关,两株菌在表达冰核活性时对培养基的营养组分没有表现出特殊的要求。同时还进一步阐明了不同生长温度冰核活性细菌对冰核蛋白表达的影响。     

鸡菌的液体发酵与毒理研究

鸡菌Termitomycesalbuminosus（Berk）．Heim采自四川西昌野生子实体,经分离、纯化、鉴定、保存于PDA琼脂斜面培养基。报道鸡菌菌丝体深层发酵在500L发酵罐中,温度28～30℃,pH6.0～7．0,接种量1％～1．5％,通气量1：1～1：1．2（体积比）,可在30h获得鸡菌菌丝体24．5g/L（干重）。还对鸡菌菌丝体的毒性进行了探讨,选用Ames试验（TA97,TA98,TA100,TA1024个标准菌株）、小鼠骨髓微核试验,小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变分析,小鼠精子畸形试验,试验结果为阴性。说明鸡菌菌丝体基本安全,无毒。     

人源性基因calsenilin/KChIP3/DREAM单克隆抗体的制备及鉴定

Calsenilin/KChIP3/DREAM, 是脑中高表达蛋白,最初发现是因其与presenilin 和钙离子结合而得名.作为转录因子抑制因子,该基因在细胞核内具有多种功能.该基因在钙离子作用下细胞核内常常与c-fos、prodynorphin等基因的启动子下游的特异性DRE位点相结合,调节这些基因的表达.另一方面,作为钾离子通道结合蛋白,该基因具有4种isoforms,其中KChIP1广泛存在于各种组织中而KChIP2只在心脏中特异表达,KChIP3和 KChIP4则在脑中显示较高的表达.4种基因在C-端结构非常相象,N-端则显示多样性.除此之外,和许多基因相似,calsenilin经PKC、CKI、PKA等激酶作用可产生多位点的磷酸化,其中主要位点Ser63的磷酸化可以阻止caspase-3对该基因的降解作用.另一方面,Calsenilin作为转录因子激动因子结合于维生素D和视黄酸效应因子启动子上游促进转录的进行. 到目前为止,Calsenilin/KChIP3/DREAM在细胞核内具有双重基因表达调控作用,即当结合于启动子上游时显示正调控而当结合在启动子下游时显示负调控.为了更加深入研究calsenilin的功能及寻找新的受其调控的基因,首先制备可特异性识别的单克隆抗体.利用RT-PCR 技术,从人脑中提取RNA扩增calsenilin全基因,克隆于pGEX-4T-2原核细胞表达载体中,经IPTG诱导表达、Gluthathion Sepharose 4B纯化得到GST-calsenilin/DREAM/KChIP3重组蛋白,并免疫小鼠.通过PEG细胞融合得到单克隆抗体.经细胞免疫染色及Western blotting检测显示说明本实验得到单克隆抗体可以用来进行细胞免疫染色及Western blotting等检测.该抗体的成功制备,为今后对calsenilin/DREAM/KChIP3调控基因表达的更深入研究提供了有效工具,也填补了国内尚无该基因单克隆抗体资源的空白.     

沙葱萤叶甲保幼激素结合蛋白基因GdJHBP的克隆及表达分析

【目的】克隆沙葱萤叶甲Galerucadaurica保幼激素结合蛋白基因(Juvenilehormonebinding protein,JHBP)cDNA全长序列,分析其分子特征和表达特性,为进一步明确其在沙葱萤叶甲生长发育及滞育中的作用奠定基础。【方法】基于本实验室组装的沙葱萤叶甲转录组数据库,采用RACE技术,克隆沙葱萤叶甲GdJHBP基因cDNA全长序列;运用ORF Finder、SignaIP、DNAMAN和TMHMM等软件分析其分子特征;利用MEGA6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发育树;应用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)技术分析GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育时期、成虫不同组织及高温胁迫下的表达模式。【结果】克隆获得了沙葱萤叶甲保幼激素结合蛋白基因GdJHBP cDNA全长序列(GenBank登录号:MG460309),cDNA全长为826 bp,开放阅读框(ORF)为714 bp,编码237个氨基酸;蛋白质预测分子量为26.58ku,等电点为4.37;包含1条信号肽,无跨膜区,且在第27-189位氨基酸之间存在一个保幼激素结合蛋白家族JHBP保守结构域。序列比对分析表明,不同昆虫JHBP间氨基酸序列一致性较低,沙葱萤叶甲GdJHBP与棕榈象RhynchophorusferrugineusRfJHBP和马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata JHBP 3p2的氨基酸序列一致性最高也仅为30%。系统发育分析表明,GdJHBP与棕榈象血淋巴JHBP亲缘关系最近。RT-qPCR结果显示,GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育阶段均有表达,在幼虫期表达量最高,在卵和蛹期微量表达;在成虫滞育期间低表达,在滞育前与滞育结束后则有较高表达;在成虫发育过程中,头部的表达量显著低于腹部和胸部;高温(30-40℃)可诱导GdJHBP上调表达,在35℃时表达量达到最高值。【结论】沙葱萤叶甲GdJHBP属于血淋巴JHBP,在沙葱萤叶甲生长发育和成虫夏滞育中可能发挥着重要作用。