转基因植物中T-DNA整合的分子特征及表达

植物中不同转基因方法转化外源基因的T-DNA整合特征既具有共性,又具有特性,使得转基因的遗传在各独立转化体间呈现多样性,另外多种遗传因子和限制因素使受体植物中外源基因的表达存在下降,甚至出现基因沉默等复杂现象。本文主要对农杆菌介导及裸露DNA直接转化转基因植物中T-DNA的分子特征和转基因表达的影响因子进行了介绍和概述。转化体中转基因的遗传稳定性和表达主要取决于转基因在植物基因组中的整合位置、拷贝数及组成结构。因而,通过对具有表达水平各异的转化体进行深入的遗传分析和分子生物学研究以及转化体之间进行的比较研究,将对转基因技术自身的完善、定点整合以及更有效的利用转基因技术都具有十分重要的意义。     

2011～2012年度中国B型流感病毒病原学特征分析

为了解本监测年度我国B型流感病毒的流行特点,明确流行株与国际疫苗株和国内代表株的匹配情况,本文对2011年4月至2012年3月流感监测年度中国大陆流感监测网络分离的B型流感毒株进行了抗原性和基因特性研究。结果表明2011年4月至2012年3月我国大陆B型流感病毒主要以Victoria系流感病毒为主,Victoria系病毒主要位于分支1,并且存在着HA1与NA基因分支间的重配,但不同分支间抗原性无显著差异,72.8%的病毒与本年度使用的疫苗株B/Brisbane/60/2008疫苗株抗原性类似。本监测年度疫苗组分中不含有Yamagata系组分,大部分Yamagata系流感病毒中与国内代表株B/湖北伍家岗/158/2009(97.8%)和B/四川安岳/139/2011(85.2%)抗原性类似;基因特性分析显示绝大部分流行的B型Yamagata系流感病毒均与B/湖北伍家岗/158/2009和B/四川安岳/139/2011在同一分支,且没有发现HA1与NA基因分支间重配的病毒。上述监测结果表明本年度所使用的疫苗株与我国流行的病毒匹配,我们所筛选的国内代表株能够代表我国各地流行株的病原学特征。     

野大豆内生假单胞菌YDX26的鉴定及促生抗逆特性

[背景] 野大豆具有栽培大豆所不具有的一些优良特性,这与其特有内生菌有关,已成为当下研究热点。[目的] 对野大豆内生细菌进行分离鉴定,并从中筛选出具有促生和抗逆潜能菌株。[方法] 以组织分离法和涂布划线法进行细菌分离培养;根据形态特征、生理生化特性及基于16S rRNA基因序列系统发育分析对菌株进行菌种鉴定;通过选择性培养基或比色法等对菌株进行促生特性分析,采用水培试验分析菌株对水稻幼苗生长的影响;利用盐胁迫及聚乙二醇（Polyethylene Glycol,PEG）-6000模拟干旱胁迫探究菌株抗逆性。[结果] 分离得到一株编号为YDX26的细菌,基于菌株形态、理化特性和16S rRNA基因序列系统发育分析,将菌株YDX26初步鉴定为假单胞菌（Pseudomona s sp.）。该菌株溶磷量为46.12 mg/L,吲哚-3-乙酸（Indole-3-Acetic Acid,IAA）活性为19.97 μg/mL, 1-氨基环丙烷-1-羧酸（1-Amino-Cyclopropane-1-Carboxylic Acid,ACC）脱氨酶活性为3.95μmol/（mg·h）。菌株YDX26对水稻幼苗株高、根长、地上部干重与地下部干重均有明显促进作用,分别提高了17.34%、12.19%、5.32%和10.70%。相较于对照菌株DX22,在盐胁迫和干旱胁迫下,菌株YDX26表现出较好的耐盐和抗旱能力。[结论] 野大豆内生细菌菌株YDX26具有较好的促生、耐盐和抗旱能力,可以作为农业生产上新的菌种资源。     

流感病毒感染中固有免疫和获得性免疫的研究进展

流感病毒一直以来是免疫学领域研究的重点目标。不仅仅是因为流感病毒在全球造成的危害，而且因为流感病毒感染机体后逃逸免疫系统的抗病毒反应的花样层出不穷。当流感病毒侵染宿主后，虽然免疫系统会通过固有免疫和获得性免疫进行全方位抗病毒反应，但是这些抗病毒反应同时也会使宿主自身受损。这需要研究人员除了不断探索机体免疫系统抵抗流感病毒侵染的免疫机制，从中搜寻治疗流感病毒感染的新靶点。同时，也要基于新的研究进展来兼顾治疗流感病毒感染患者的过程中，减小免疫系统对机体造成的免疫病理伤害。     

脂质体递药系统的靶向修饰

作为药物递送载体，脂质体（LPs）由于免疫原性低、稳定性好、毒性低和成本低而被认为是有前途的纳米药物递送系统。然而，LPs的靶向递送效果并不理想，往往会对正常的机体细胞造成伤害，因此，如何优化LPs药物，使其具有靶向性仍然是当前研究的重点。本文结合近年来国内外相关研究进展，重点介绍了多肽、抗体、糖类、配体，以及核酸适配体等靶向修饰物对LPs功能的影响，并归纳总结了各种靶向修饰目前存在的优势与挑战，以期对LPs给药系统的进一步研究提供科学参考及新药研发提供理论依据。     

金叶连翘叶片色素含量和解剖结构研究

金叶连翘不同冠层的成熟叶片呈现为不同颜色。以朝鲜连翘深绿色叶为对照,观察金叶连翘冠层上、中、下位叶色,测定其叶片大小和叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素及类胡萝卜素含量,同时观察分析叶片横切面解剖结构,旨在阐明叶片色素含量和解剖结构对叶色的影响。研究表明:上层黄色、中层黄绿色、下层浅绿色,黄、黄绿、浅绿色叶总叶绿素含量分别是对照组的0.51%、4.44%和66.47%,均极显著低于对照(P <0.01),但黄绿叶的叶绿素a/b比值显著升高(P <0.05),黄、黄绿叶的总叶绿素/类胡萝卜素比值极显著降低(P <0.01)。黄、黄绿叶的叶绿体发育停滞于单片层时期,类囊体分化程度低,浅绿叶类囊基粒片层肿胀;黄叶细胞器降解,栅栏组织细胞形状难以辨别,黄绿叶上表皮细胞凸起。金叶连翘属于总叶绿素及叶绿素b合成减少型突变体,表现为叶绿素严重缺失,类胡萝卜素相对含量升高;其叶绿体发育停滞,类囊体结构异常,是金叶连翘叶片呈现不同颜色的主要因素,与其叶片解剖显微结构无关。     

免疫检测信号放大抗体偶联物的制备及应用*

目的: 以聚赖氨酸(polylysine,PL)为骨架提高辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)与羊抗兔IgG的连接数量,比较几种化学偶联剂的偶联效果,通过免疫检测技术对其灵敏度进行检测和比较。方法: 对HRP与PL、聚合物HRP-PL与N-琥珀酰-S-乙酰乙酸(N-succinimidyl-S-acetylthioacetate,SATA)和2-亚氨基硫烷(Traut’s)两种试剂、羊抗兔IgG与琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯[succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate,Sulfo-SMCC]、活化后羊抗兔IgG及HRP-PL进行摩尔比的优化;对偶联物IgG-PL-HRP及商品化二抗分别进行斑点免疫印迹、ELISA和免疫组化,并计算偶联物IgG-PL-HRP的检测放大倍数。结果: 当PL与HRP摩尔比为1∶5,HRP-PL与Traut’s摩尔比为1∶15,羊抗兔IgG与Sulfo-SMCC摩尔比为1∶30,羊抗兔IgG与HRP-PL摩尔比为1∶10时,反应效率较高;商品化二抗及偶联物IgG-PL-HRP在斑点免疫印迹实验中的最低检测限分别为2.5 μg和312.5 ng,最大稀释倍数分别为50和100倍;在ELISA实验中的最大稀释倍数分别为5 000和20 000倍;在免疫组化实验中偶联物IgG-PL-HRP的检测特异性及强度均大于商品化二抗。结论: 成功合成抗体偶联物IgG-PL-HRP,且免疫检测信号放大倍数为商品化二抗的3~7倍,这对后续免疫诊断及生物学的研究具有重要意义。     

哺乳动物细胞杂交中降低聚乙二醇毒性的简易方法

聚乙二醇(PEG)对某些细胞系具有高度毒性。作者将两个仓鼠细胞的温度敏感突变株 AF8和 K12细胞接种于平皿内,在贴壁、伸展后,加入50%的 PEG 溶液诱导细胞融合。所用的 PEG 有二种:1.Baker PEG,2 Koch-Light PEG,分子量均为1000。PEG 作用30秒钟后冼去,加入生长培养液,置于温度敏感突变株的许可温度34℃下培养16～24小时,再移至非许可温度40.6℃下培养二周。其间每隔3—4天更液一次。上述部分材料在34℃培养后,以胰酶消化,用生长培养液1:20稀释居再接种于平皿内,于40.6℃培养.12～15天后染色,计算集落数。同时在缺钙的培养液内用 PEG 诱导细胞