pEGFP—HPV16E7重组融合蛋白质粒的构建及其表达

应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)的重组融合表达质粒,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析后,用基因转染技术将其导入小鼠肝癌细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入目的基因片段的大小、方向和插入位点均正确,在转染的小鼠肝癌细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。构建的pEGFP-HPV16E7融合表达质粒能直观地反映转染细胞中EGFP-HPV16E7融合蛋白的表达。由于转化率与表达率融为一体,故有利于对转染细胞的筛选,缩短转染细胞在体外的筛选的时间适用于对：HPV16E7分子生物学特性．致瘤机理及APC提呈等的研究。为建立表达HPV16E7的实体瘤动物模型奠定了基础。     

M1毒蕈碱乙酰胆碱受体同源建模模板的选取及验证

目的:探讨不同同源模板所获得M1毒蕈碱乙酰胆碱受体模型的合理性及可靠性。方法:以牛视紫红素受体、人源β2-肾上腺素受体、M2胆碱受体和M3胆碱受体为模板,分别对M1胆碱受体进行同源建模;采用分子对接获得各M1胆碱受体同源模板与配体的互作模式,并与已报道的M胆碱受体晶体结构进行静态比对,得到最佳M1胆碱受体同源模板;采用分子动力学模拟分析配体与关键残基距离的变化,对M1胆碱受体同源模板进行动态验证。结果:M2胆碱受体与M1胆碱受体的序列相似度较高,为67.9%;以Inactive M2胆碱受体为模板构建的M1胆碱受体(M1R_(inactive-M2R))与其他晶体结构间RMSD值的均值最低,为1.39;M1R_(inactive-M2R)别构位点K392及E397残基侧链与结合口袋距离更近,与配体结合构象更匹配;分子对接结果显示,双位点别构激动剂VU0184670与M1R_(inactive-M2R)别构结合位点Y85、Y381的距离分别为4.8、6.8,优于其他模型;分子动力学模拟后,配体与Q177残基的距离由7.4降至2.9,提示配体VU0184670向Q177方向偏转,与文献结果一致。结论:以Inactive M2受体结构为模板构建的M1胆碱受体模型最为合理,更接近M1胆碱受体的晶体结构。本研究为M1胆碱受体药物开发提供重要工具,为其他GPCRs受体同源建模提供创新范式。     

红花菜豆凝集素与莫寡糖部分分子间的聚合

红花菜豆凝集素与莫寡糖部分分子间的聚合施炜星,孙册（中国科学院上海生物化学研究所,上海,２０００３１）关键词红花菜豆凝集素;寡糖;分子间聚合凝集素是一类与糖结合并凝集细胞或沉淀含糖大分子的蛋白质或糖蛋白。凝集素均由亚基组成,通常一个亚基具有一个结合糖...     

两种保暖方式对早产儿住院期间生命体征及体重的影响

目的:探讨两种保暖方式对早产儿住院期间生命体征及体重的影响。方法:选择2011年5月至2012年12月在我院住院治疗的150例早产儿作为研究对象,采用随机抽取序号的方式分为观察组和对照组各75例。观察组采用婴儿培养箱对其进行保暖,对照组采用远红外辐射保暖台对其进行保暖,分别对两组早产儿在住院期间的生命体征及体重进行监测、记录、统计、分析和比较。结果:观察组早产儿第一周及第二周体重增长情况均明显优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:对早产儿及时采用婴儿培养箱的方式进行保暖,能稳定早产儿的生命体征,降低伤残率,有利于早产儿的生长发育。     

红花菜豆凝集素的糖结合专一性

经肼解、Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－２柱层析、ＮａＢ＾３Ｈ４和ＮａＢＨ４还原,制备各种来源的、氚标记在还原末端的、还原末端为Ｎ－乙酰氨基葡萄糖醇的混合寡糖,经Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－４凝胶柱分离,以及用糖苷酶酶解,制备了各种不同类型的氚标记的寡糖。这些寡糖在固定化的ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上亲和层析,根据各种类型寡糖在ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上的层析行为,确定红花菜豆（矮生红花变种）凝集素（ＰＣＬ）的     

绒毛膜促性腺激素对草鱼排卵和卵球成熟的作用再报

在草鱼的人工繁殖中,应用绒毛膜促性腺激素(HCG)催产的作用效果尚未得到统一认识,是一个急待查明解决的问题。早些年的试验已表明,一定效价和剂量的绒毛膜促性腺激素(激素Ⅱ)具有良好的激发草鱼卵巢排卵和卵球成熟的作用。并在浙江省杭州地区五个鱼场(试验场)进行了推广试验,也同样获得了很好的效果。这证明草鱼和鲢、鳙鱼一样,对于绒毛膜     

中国虎：回首野放十二月

2003年9月1日，对“国泰”和“希望”这两只不满周岁的华南虎幼崽而言是值得回忆的一天，这两只世界上最古老老虎亚种的后代在北京起飞，开始了它们意义非凡的旅行。此行的目的地是南非，在那里，它们将接受世界首创的老虎野化训练，即学习狩猎。     

基于高光谱的苹果花磷素含量监测模型

在室内条件下,利用ASD FieldSpec 3地物光谱仪,测定了盛花期苹果花的高光谱反射率,在分析苹果花原始光谱反射率及其一阶导数特征的基础上,分析了高光谱反射率与磷素含量间的相关关系,确定其敏感波段,构建了特征光谱参数,并建立了苹果花磷素含量的监测模型.结果表明：苹果花磷素含量与350～370 nm、670～1385 nm、1620～1760 nm波段的原始光谱反射率以及波段500～520 nm光谱反射率的一阶导数呈极显著正相关,与波段670～730 nm一阶导数呈极显著负相关;光谱参数DVI(936,676)、DVI(977,676)、NDVI(936,676)、NDVI(977,676)与苹果花磷素含量的相关性较好,其相关系数均达到0.77以上,由此建立了以4种光谱参数为自变量的磷素含量监测模型,其中,以NDVI(936,676)为自变量构建的监测模型具有最大的决定系数（R²=0.9385）、最小的均方根误差（RMSE=0.6883）和最小的相对误差（RE=7.6%）,预测精度达到92.4%,为最佳监测模型.     

重金属污染土壤原位化学固定修复研究进展

重金属污染土壤原位化学固定修复是通过添加不同外源物质固定土壤中重金属元素,达到降低重金属迁移性和生物有效性的一种重要方法.由于操作方便和效果快速,使其在污染土壤治理过程中有着不可代替的作用,尤其对于耕作土壤中的面源污染.许多具有俘获土壤中重金属离子能力的自然物质和工业副产品如磷矿石、泥炭土、石灰和有机肥等都可用在实地的固定修复中.采用实验室评价和实地应用评价,一方面可以评估这些固定物质在土壤中对重金属离子的固定效率;另一方面可以评估重金属的溶出、释放和生物毒性等生态风险.本文对原位修复过程中采用的不同固定物质的来源和分类进行了概述,对化学固定过程的机理进行了探讨,同时阐述了重金属污染土壤化学固定修复应用过程中的实验室评价和实地应用评价方法,分析了化学固定修复的局限性并提出了今后的发展方向.     

人乳头瘤病毒16型E7变异株免疫原性研究

采用分子克隆技术,构建E7变异株重组质粒[pcDNA3.1-(by)E7]和E7标准株重组质粒[pcDNA3.1-(ys)-E7],并将两种质粒分别皮下免疫Balb/c小鼠,免疫后于不同时间提取小鼠血清和制备脾淋巴细胞悬液,分别用ELISA法和MTT比色法检测特异性抗体和特异性淋巴细胞增殖反应.基因免疫后,ELISA法显示,HPV16 E7变异株和标准株均能诱导特异性抗E7抗体;MTT比色法显示,E7标准株免疫组脾淋巴细胞在体外受到变异株E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应,变异株E7免疫组脾淋巴细胞经过同样处理后,出现非特异性淋巴细胞增殖反应.结果表明HPV16E7变异株能诱导特异性体液免疫应答而不能诱导特异性细胞免疫应答,HPV16 E7变异株无论在结构还是免疫原性上均与标准株有差异.由此推测,HPV16E7变异可能导致其逃逸机体自然感染或疫苗诱导的免疫应答.用基因免疫方法研究E7变异株免疫原性也为其它不能或难以进行体外培养的病毒变异研究提供借鉴.