在大肠杆菌中拓展合成途径合成异胡椒醇北大核心

天然异胡椒醇作为一种植物来源香料,具有很高的经济价值。目前国内外还未见利用大肠杆菌工程菌株转化生产异胡椒醇的报道。【目的】构建工程菌,采用生物合成方法获得天然香料异胡椒醇。【方法】对来自胡椒薄荷的细胞色素P450家族的柠檬烯-3-羟化酶(LIM3H)基因PM2进行改造,截短LIM3H的N端疏水区,分别添加17α短肽或2B1短肽增加其亲水性,采用CO差示光谱法检测LIM3H活性;将N端疏水区截短后的来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的NADPH-细胞色素P450还原酶基因(trATR)和修饰后LIM3H基因(Modi-LIM3H)融合后表达,最终以柠檬烯为底物进行全细胞转化。【结果】3种N端修饰LIM3H基因均检测到LIM3H表达和异胡椒醇生成,其中17α短肽修饰后的蛋白表达量最高,异胡椒醇产量达到1.94 mg/L。【结论】本研究在大肠杆菌中增加外源LIM3H与ATR,成功催化柠檬烯生成异胡椒醇,为天然异胡椒醇的生产提供了新的方法。     

饲喂复合乳酸菌制剂对犊牛粪便微生物多样性及其功能的影响

目的 本试验利用高通量测序技术探究复合乳酸菌制剂对犊牛粪便微生物多样性、组成结构的影响并进行功能预测。方法 选取3头体重为（150±10） kg的安格斯犊牛散栏饲养，犊牛自由采食基础日粮。试验开始后，在基础日粮上灌喂15 mL复合乳酸菌制剂，每日两次，连续7 d。分别于试验期第0 d、第3 d和第7 d肛门采集基础牛粪便（第0 d:D0；第3 d:D3；第7 d:D7），采用16S rRNA测序对微生物进行多样性分析和功能预测。结果 从犊牛粪便样品中共获得优化序列258 156条，OTU聚类共获得1 409个OTU。通过α-多样性分析发现，与D0组相比，D3组犊牛粪便微生物Ace指数（F=6.541,P=0.031）和Chao1指数（F=10.898, P=0.010）显著升高，Shannon指数（F=0.277,P=0.767）和Simpson指数（F=0.097,P=0.909）无显著性变化。PCA分析发现，未饲喂复合乳酸菌制剂与饲喂乳酸菌制剂的犊牛粪便微生物组成存在显著差异（R=0.366,P=0.049）。在门水平上，粪便中的厚壁菌门和拟杆菌门为优势菌门。与D0组相比，D7组髌...