基于small RNA组学分析揭示意大利蜜蜂响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的免疫应答机制

【目的】通过深度测序和组学分析在small RNA组学层面揭示意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)响应东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)的免疫应答机制。【方法】利用small RNA-seq技术对正常及N. ceranae胁迫7 d和10 d的意蜂工蜂中肠(Am7CK、Am7T、Am10CK和Am10T)进行深度测序。利用相关生物信息学软件对测序数据进行质控、已知micro RNA (mi RNA)鉴定、新mi RNA预测及mi RNA的结构特征分析。通过Stem-loop RT-PCR验证新mi RNA的表达。按照|log2(Fold change)|≥1和P≤0.05的标准筛选出Am7CKvs.Am7T和Am10CKvs.Am10T比较组的差异表达mi RNA(differentially expressed mi RNA,DEmi RNA)。利用软件预测DEmi RNA靶向结合的m RNA并进行GO和KEGG数据库注释,根据注释信息对细胞和体液免疫相关通路及富集靶m RNA进行统计和分析。根据靶向结合关系构建DEmi RNA和免疫通路相关差异表达m RNA (differentially expressed m RNA,DEm RNA)的调控网络。采用RT-q PCR对数据的可靠性和DEmi RNA的差异表达进行验证。【结果】共获得165895574条原始读段和132028990条有效序列标签,各组的组内Pearson相关性平均在87.92%及以上。共鉴定到928个已知mi RNA和56个新mi RNA。这些mi RNA的长度介于18–28nt,多数的长度为18nt和22nt且首位碱基主要偏向U。验证了12个新mi RNA的真实表达。Am7CKvs.Am7T比较组包含48个上调mi RNA和36个下调mi RNA;Am10CK vs. Am10T比较组包含56个上调mi RNA和51个下调mi RNA。两个比较组的DEmi RNA可分别靶向结合9827个和10720个m RNA。这些靶m RNA可分别注释到50和47条功能条目,以及138和135条KEGG通路。DEmi RNA与免疫通路相关靶m RNA的调控网络分析结果显示,Am7CK vs. Am7T中有26个DEmi RNA靶向与内吞作用等免疫通路相关的10个DEm RNA;Am10CK vs. Am10T中有15个DEmi RNA靶向与MAPK信号通路等免疫通路相关的10个DEm RNA。验证了测序数据和4个DEmi RNA差异表达的可靠性。【结论】研究结果揭示了宿主DEmi RNA可能通过调控物质和能量代谢、细胞和体液免疫对N. ceranae产生应答,但DEmi RNA不参与抗菌肽基因的表达调控;mi R-1-z可能参与宿主的细胞增殖、细胞凋亡和免疫进程;氧化磷酸化通路可能在宿主免疫应答及宿主-病原互作中发挥特殊作用。     

巴马香猪Toll样受体4基因cDNA的克隆及生物信息学分析

目的研究TLR4在猪自然免疫中的作用及机制,为抗病育种及免疫佐剂的开发提供依据。方法利用NCBI公布的TLR4基因序列设计引物,RT-PCR技术克隆巴马香猪TLR4基因。结果所得基因序列提交GenBank,登录号：GQ304754。经序列分析,发现巴马香猪TLR4基因开放阅读框长2526 bp,编码785个氨基酸,该蛋白等电点为6.58,分子量为96.4×103;与普通猪比对发现巴马香猪TLR4基因有5个碱基发生突变;与小鼠、狗、鸡、牛、羊和人的同源性分别为71.9%、81.5%、54.2%、86.4%、85.5%和81.9%;TLR4膜外区蛋白为背侧多个α螺旋和内侧多个β折叠平行交替排列构成一个弯曲状螺旋结构;N末端存在信号肽,且可能在23～24位氨基酸处存在裂解位点;胞外区有13个明显的LRR,分别位于第53～74、77～100、101～124、149～173、174～192、201～225、372～393、398～429、446～469、470～494、495～518、519～541、543～566位氨基酸区;膜外区含8个N连接的糖基化位点。结论本研究成功克隆巴马香猪TLR4基因,为进一步研究该基因的功能和蛋白质的特性奠定了基础。     

慢性扁桃体炎、咽炎与细菌L型的关系及慢性咽炎发生原因的探讨

应用病原微生物培养、组织切片革兰氏染色Ｌ型检查和Ｌ型抗体免疫组化染色的方法,对１７５例标本（慢性扁桃体炎１１１例、慢性咽炎６４例）进行细菌Ｌ型检测。结果显示,培养的１１４例标本中有８６例培养出细菌Ｌ型,其阳性率为７５．４％;组织切片革兰氏染色有１４６例（８３．４％）查见细菌Ｌ型,两者阳性率之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）;免疫组化染色金葡菌ＣｏｗａｎⅠ株Ｌ型抗休标记阳性率为５８．３％。提示,细菌Ｌ型感染与慢性扁桃体炎、慢性咽炎关系密切。并认为,细菌Ｌ型感染是扁桃体切除后发生慢性咽炎的原因之一。     

荷兰鸢尾(Iris xiphium L. var. hybridum)的组织培养

取荷兰鸢尾（ＩｒｉｓｘｉｐｈｉｕｍＬ．ｖａｒ．ｈｙｂｒｉｄｕｍ）鳞茎片不同部位外植体块,接种于附加不同激素配比的基本培养基上,其中取自鳞茎片基部外植体块２ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍ,培养基为ＭＳ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的不定芽诱导率为最高（７０％）;最理想的增殖培养基为ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。不定芽直径４～５ｍｍ,培养基为ＭＳ＋ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ有利于不定根的发生,诱导生根率达８３３％。试管苗不经练苗可直接出瓶,移栽于泥炭∶田土∶河沙＝１∶１∶１（Ｖ／Ｖ）的基质中。     

食药用真菌多糖对肿瘤免疫逃逸调节作用机制研究进展

食药用真菌多糖是食药用真菌的主要天然生物活性成分,可以从多层次、多靶点调节机体的免疫功能,被认为是一种天然免疫调节剂.此前食药用真菌多糖抗肿瘤机制研究集中在提升机体的免疫力达到抑制肿瘤的目的 ,但近年的研究表明它可以调节肿瘤微环境,恢复机体对肿瘤以及肿瘤微环境的监视能力,提升机体对肿瘤微环境的特异性免疫应答能力,进而达...     

新时期我国国土空间生态修复理念与模式探讨

国土空间生态修复以地理学、景观生态学理论为基础,是推进生态文明、建设美丽中国的重要举措.我国国土空间生态修复呈现理论体系多学科化、工作模式多元化、技术方法融合化、实践探索多样化的特征,工作总体成效显著与任务艰巨并存.本文基于国土空间生态修复的新挑战,对国土空间生态修复研究的总体框架和技术路径、区域国土空间生态修复的工作...     

贵州南部铝土矿的孢粉组合特征及沉积时代讨论*

铝土矿是一种重要的工业矿产资源。目前中国大部分的铝土矿依赖进口。因此, 研究铝土矿的沉积模式对我国的资源安全和矿产开发具有重要意义。铝土矿的成矿受多种因素影响, 包括大地构造背景、古气候、侵蚀速率、母岩、时间、古植被和古地形地貌等。要研究这些成矿因素对铝土矿的影响, 并为下一步的找矿勘察工作提供理论支撑, 首先需要准确评估铝土矿的沉积时代。然而, 由于铝土矿的沉积过程涉及复杂的土壤化作用和再沉积过程, 其中保存的植物根系化石或遗迹化石数量很少, 因此很难确定铝土矿的最终沉积时间。目前, 综合分析铝土矿中保存的孢粉化石组合是确定铝土矿沉积时代更有效的方法。在中国, 已经确定的铝土矿沉积时代主要集中在晚古生代。华南产出的晚古生代铝土矿主要以贵州铝土矿为代表, 然而长期以来对贵州铝土矿的形成时代存在较多争议。为了解决这些争议, 本研究在贵州龙里县龙山镇和花溪区高坡苗族乡的两个铝土矿地层剖面上进行了孢粉地层研究。研究结果显示, 贵州龙里县龙山镇SPM095和花溪区高坡苗族乡SPM097剖面的革老河组、汤耙沟组、丰源层铝土岩和祥摆组底部产出的孢粉组合与西欧密西西比亚纪标准Lycospora pussila (Pu)孢粉组合带基本相当, 表明丰源铝土矿的沉积时代不晚于密西西比亚纪维宪早中期, 这是目前已知贵州地区最早的具有明确化石证据的喀斯特型铝土矿。通过与贵州中部清镇至贵州北部遵义等地铝土矿中发现的孢粉组合进行对比, 发现丰源铝土矿中的孢粉组合比上述地区铝土矿中的孢粉组合大致低一个孢粉组合带 (Perotriletes tessellatus—Schulzosopra camplylotera组合带)或一个牙形刺带(Gnathodus bilineatus带), 时代大概相差420万年。这一发现进一步表明晚古生代大冰期(LPIA)引起的频繁海平面变化导致贵州“南海北陆”的古地理格局由南向北逐次被海水淹没, 并接受沉积, 这是导致贵州不同地区铝土矿呈现由南向北时代梯度递减的主要原因。     

西伯利亚鲟卵黄脂磷蛋白的分离纯化及性质

卵黄是鱼类胚胎发生期的主要营养物质,卵黄的含量和质量对于早期幼体维持生命和生长发育至关重要.本研究采用Sephacryl S-300凝胶过滤层析法和蛋白质电泳技术分离纯化西伯利亚鲟(Acipenser baerii)卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv),层析洗脱共得到7个蛋白峰.对每个峰进行SDS-PAGE电泳及油红O、甲基绿和Schiff试剂特异染色,峰b蛋白均呈阳性,表明峰b蛋白为西伯利亚鲟卵中的一种卵黄脂磷蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,其由3个亚基构成,相对分子质量分别为30.6 ku、40.8 ku和76.7 ku.对西伯利亚鲟Lv氨基酸组成进行分析,证明是一种含有相对较多天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、丝氨酸、缬氨酸和亮氨酸的蛋白,并且所含鲜味氨基酸含量比其他鱼偏高.     

口服利尿药的研究——Ⅰ.氯噻嗪和双氢氯噻嗪体內代謝的比較

自口服利尿-降压药氯噻嗪(chlorothiazide,簡称CT)问世以来,国內外研究者都对本药产生很大的兴趣,相继合成大量苯駢-硫二嗪类化合物,并研究其药理作用。其中第三位及第四位碳原子經过氫化的衍生物,如双氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide,簡称HCT),双氫三氟甲基噻嗪及苯甲基双氫三氟甲基噻嗪的利尿及利盐作用都比氯噻嗪大好几倍。这类利尿药的特点是:作用強(几与有机汞剂相当),能口服,毒性低,在治疗剂量     

口服利尿药的研究 Ⅳ.大鼠肾切片对几种口服利尿药的摄聚

前交报告了磺胺类利尿剂的利尿作用与在大鼠体内的代谢特点。本研究系继这个工作之后进行的离体大鼠腎切片的实验,目的在于观察体外腎組織轉运这类化合物的某些特点,及其与化合物利尿作用间的联系。实驗按Cross和Taggart研究兔腎切片摄聚对氨基马尿酸(PAH)的方法进行,用Warburg组織呼吸器温孵,同时观察腎切片耗氧量(Qo_2)。以s/M值(温孵后药物在切片与介液中浓度之比)表示腎切片摄聚药物的能力。测得的s/M值双氫氯噻嗪(HCT)平均为9.34±0.28,PAH为7.17±1.23。二者的s/M值在25℃时均此37℃时的高。其最适pH分別为7.8及8.0。乏氧环境抑制HCT及氯噻嗪(CT)的s/M值;醋酸刺激HCT在腎的积聚;半胱氨酸則无作用。DNP(2.5××10~(-5)M)和氰化钠(50—100×10~(-5)M)均抑制PAH、CT及HCT的s/M值。加入15倍于底物浓度的碘呲啦啥或青霉素亦能抑制HCT的s/M值(此时組織耗氧量不变)。这些結果提示HCT类化合物的腎脏轉运机制与PAH、青霉素及碘呲啦啥等可能相同。此外,还比較了8个磺胺类化合物的s/M值,其中HCT-55(5-氯双氫氯噻嗪)、HCT、HFT(三氟甲基双氫噻嗪)及CT-S(Benzthiazide)等利尿作用較强者,s/M值亦較高。DSA、CT及HCT-18等利尿作用较弱(或没有利尿作用),s/M值亦较低。大鼠肝及腎切片摄聚CT-S的能力相同,但肝切片摄聚HCT的能力远不及腎切片。