用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系

肌肉生长抑制素 (myostatin,Mstn)基因失活可引起哺乳动物的肌肉增生,但其调控机制尚不清楚,且缺乏可靠的试验材料验证Mstn相关分子通路的变化。本研究所用PK3108细胞系是在野生型PK15细胞系的基础上成功靶向敲除一条等位基因,在其靶位点敲入标记基因,敲除了204 bp的外显子3序列, LoxP锚定在其标记基因两侧。利用Cre/LoxP重组酶删除系统删除插入PK3108Mstn靶位点的标记,借助流式细胞仪和荧光蛋白甄别得到无标记的过渡型细胞系PK3108-2。将Cas9/sgRNA表达载体和供体DNA共转染PK3108-2,借助G418抗性筛选和倒置荧光显微镜挑选出仅带阳性标记的克隆L18,对其基因组进行PCR产物凝胶电泳与PCR产物测序,证明克隆L18在预设位点发生同源重组;对其蛋白质进行Western 印迹实验表明,Mstn被成功地敲除失活。综上结果证明,本研究实现了双等位基因的精准敲除,构建了Mstn双敲除梯度回复表达细胞系。本研究为揭示Mstn的作用机制提供理想的实验材料,也为双等位基因的敲除提供了可借鉴的技术路线。     

西南鼠耳蝠广东新纪录及其核型

<正>西南鼠耳蝠(Myotis altarium Thomas,1911),因峨眉山为其模式产地,又称峨眉鼠耳蝠或者四川鼠耳蝠。隶属于翼手目(Chiroptera)蝙蝠科(Vespertilionidae)鼠耳蝠属(Myotis),主要分布     

基于调解过程的医疗纠纷第三方调解公信力分析

第三方调解作为一种非诉讼纠纷解决方式,在医疗纠纷解决中具有很大的比较优势。调解过程中存在着许多因素影响医疗纠纷第三方调解的公信力,需要从规范调解程序、改善调解沟通、构建调保结合、遵循调解自愿、建立调解制度等方面入手,提高医疗纠纷第三方调解的公信力。     

大漠孤烟——甘肃考察散记

正在历史上,甘肃以河西走廊而著称,万里长城第一关——嘉峪关就位于河西走廊的西端,历史上中原王朝的将士少不了在这里与匈奴、突厥或是其他强敌厮杀对战。如今,金戈铁马的时代早已过去,而人们却发现,在亿万年前,这里也曾是恐龙的家园。巨大如大夏巨龙,娇小如黎明角龙,都曾是这片土地上的鲜活一员。今年夏天,     

中东太平洋金枪鱼延绳钓中心渔场的时空变化

根据2009年6月—2012年1月上海金优远洋渔业有限公司在中东太平洋作业的5艘金枪鱼延绳钓渔船的渔捞日志资料,结合卫星遥感反演的海表温度数据,分析了中东太平洋金枪鱼延绳钓渔场的年际和季节变化规律以及渔获量与海表温度的关系。结果表明:在厄尔尼诺年(2009年),金枪鱼延绳钓渔场作业重心会向偏东方向移动,且金枪鱼钓获率较高;而拉尼娜年(2010、2011年)则向偏西方向移动,且钓获率下降;研究海域作业渔场的最适宜海表温度范围为25~30℃;2009年最适海表温度略高于2010年和2011年;平均月渔获量与月平均海表温度呈显著正相关(P0.05)。     

采用三次样条拟合胎儿体格发育指标百分位数参考值

目的:生长发育评价标准的最佳形式是年龄别百分位数,然而,目前我国缺乏胎儿的孕周别体格发育指标百分位数评价标准,影响了胎儿宫内生长发育水平的准确评价,本研究拟建立陕西省正常单胎妊娠孕妇胎儿体格发育指标百分位数参考标准。方法:以陕西省西安、汉中、延安5所大型综合医院超声科或妇产科超声室为数据采集点,选择2010-01-01到2010-12-31间进行常规孕期检查的正常单胎妊娠胎儿的超声测量数据,随机抽取一次测量结果,共收集到6832个单胎正常妊娠胎儿的超声测量数据。采用三次样条法对陕西省孕16-41周正常单胎妊娠胎儿的双顶径、腹围、股骨长百分位数进行拟合。结果:三次样条拟合胎儿的双顶径、腹围、股骨长百分位数,各百分位数的决定系数均在0.95以上,均方差均在各指标重复测量的容许误差内,拟合结果满意。计算出了胎儿的孕周别双顶径、腹围、股骨长的P3、P10、P25、P50、P75、P90、P97百分位数。结论:三次样条兼顾了曲线拟合中的拟合优度和光滑度,能更好的实现曲线拟合的目的。所建立的孕周别胎儿体格发育指标百分位数符合胎儿宫内生长发育规律,为胎儿宫内生长发育的准确评价提供了科学、准确的评价工具,可用于产科临床和研究工作中。     

前臂屈指肌腱修复术后功能恢复的影响因素分析

目的:探讨影响前臂屈指肌腱修复术后功能恢复效果的因素,以利于制定合理的手术及康复方案。方法:对2011年1月~2012年10月解放军第401医院手外科收治的58例(其中男性41例,女性17例,年龄13-62岁,平均33.8岁)屈指肌腱在前臂损伤患者的伤因及手术方式进行回顾、分析总结并进行随访,分析其受伤严重程度、手术方式、术后功能锻炼情况。结果:术后随访54例,失访4例,随访时间为术后3~6个月。根据中华医学会手外科学会手功能评定试用标准评定54例前臂屈指肌腱损伤修复术后的患手的恢复情况,其中优31例,良16例,中5例,差2例。指浅、深屈肌腱同时损伤较单纯指浅屈肌腱损伤修复术后粘连发生率较高,手功能的优良率较低(P0.05),合理应用防粘连技术和术后进行系统功能锻炼的患者术后手功能的优良率分别较未合理应用防粘连技术和术后未进行系统功能锻炼的患者显著升高(P0.05)。结论:手术切口是否合理的延长,术中操作是否重视无创操作,是否合理的应用防粘连技术以及缺乏系统的功能锻炼以及肌腱断端吻合质量是影响前臂屈指肌腱修复术后功能恢复的重要因素。     

CEA mRNA在大肠癌患者微转移早期预测中的意义

目的:大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,血行转移是大肠癌根治性手术失败的原因之一,在根治性切除肿瘤患者中,有大部分患者死于肿瘤的复发和转移,因此早期发现大肠癌微转移,对于延长患者预后指导下一步治疗具有重要意义。本研究已检测大肠癌患者外周血和引流静脉血中CEA mRNA的表达,以探索手术操作和微转移的关系,以及引流静脉血中微转移的发生与临床病理因素的关系,探讨早期发现大肠癌血循环微转移的意义。方法:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测大肠癌患者手术前,手术后外周血及引流静脉血液中的CEA mRNA水平。结果:(1)大肠癌患者术前外周血CEA mRNA阳性率26.7%(16/60),引流静脉血阳性率48.3%(29/60),引流静脉血明显高于外周静脉血(P0.05)。(2)大肠癌引流静脉血中CEA mRNA在肿瘤大于5厘米者、Dukes C期、中低分化程度、有淋巴转移者、浸及浆膜者比外周静脉血更有统计学上的意义。(3)手术前后引流静脉血CEAm RNA阳性率具有显著差异(P0.05),外周血CEA mRNA阳性率无显著差异。结论:大肠癌引流静脉血微转移是大肠癌肝转移的发生的早期阶段,引流静脉血CEA mRNA的表达能更早期反映出大肠癌患者微转移的发生,引流静脉微转移发生率与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移相关,是反映大肠癌生物学行为的指标之一,手术对大肠癌血循环微转移有促进作用。     

匹伐他汀临床应用的最新进展

匹伐他汀(pitavastatin)是新一代人工合成的降血脂类药物。该药是新一代HMG-COA还原酶抑制剂,用于治疗原发型高脂血症和混合型血脂障碍,能够显著降低LDL、TC、TG、及升高HDL-C。药物动力学性质优良,具有肝细胞选择性,并且毒性低,安全性好,具有抗动脉粥样硬化、促进血管生成和抗炎作用。本文就匹伐他汀的临床研究进展进行综述。     

紫杉醇合成中甲基茉莉酮酸作用位点与配伍特性研究

以简化的紫杉醇事成途径基础上,提出了一种拟稳态转移模型。模型从诱导子作用在力改变的角度,成功地解释了诱导了作用下紫杉烷含量的变化,并给出了不同位为酶活力的提高与各代谢产物浓度转移模式间的关系,提供了一种从中间代谢产物稳态的转移模式确定诱导子的作用位点的方法。在适宜浓度甲基茉莉酮酸（ＭＪ）诱导下１０去乙酰基巴卡享Ⅲ（１０－ＤＡＢ）与巴卡Ⅲ（ＢａｃｃａｔｉｎⅢ）含量下降而紫梆醇含量上升,确定ＭＪ在紫杉