利用非经典分泌蛋白质实现脂肪酶A的分泌表达

【目的】以枯草芽孢杆菌脂肪酶A(Lipase A)为报告蛋白,尝试利用4种非经典分泌蛋白质及其前50个氨基酸作为分泌信号以实现其分泌表达。【方法】我们扩增了脂肪酶A的编码基因和非经典分泌蛋白质的编码序列,构建了8种针对脂肪酶A的分泌表达载体,并转化至枯草芽孢杆菌WB800菌株,通过测定重组菌株的酶活、利用蛋白质电泳和免疫印迹等技术检测脂肪酶A的分泌情况【结果】以Pdh A的氨基酸序列和Sod A、Eno的前50氨基酸序列作为分泌信号的重组菌株较好的实现了脂肪酶A的分泌表达。【结论】部分非经分泌蛋白质的编码基因或其前50个氨基酸序列能够引导脂肪酶A分泌至细胞外。     

不同施氮水平下加工番茄植株生长和氮素积累与利用率的动态模拟

通过3年的大田试验,设置不同的氮素水平(0、75、150、300、450、600 kg·hm^-2)对不同施氮量下加工番茄地上部生物量、氮素累积及利用率的动态变化进行模拟.结果表明: 加工番茄地上部生物量、氮素累积量和氮素利用率随出苗后累积生理发育时间(PDT)的动态变化符合Logistic模型,氮素快速累积起始时间较地上部生物量快速累积起始时间早4～6 d(PDT);瞬时氮利用率随出苗后累积生理发育时间的动态变化呈先增加后降低的单峰曲线.不同施氮水平下,300 kg·hm^-2处理的氮累积量和地上部生物量最多,产量最高.根据Quadratic模型得出,北疆地区加工番茄滴灌栽培的理论适宜施氮量为349～382 kg·hm^-2.     

叶绿素的快速提取与精密测定

Arnon法是叶绿素提取和测定最经典、最常用的方法, 此法虽经多次改进, 但仍存在着检测波长误差大、计算公式有误、提取速度慢、测定结果不够准确以及操作步骤繁琐等缺陷。该文提出了二甲基亚砜(DMSO)高温提取、80%丙酮稀释的两步快速浸提法, 使叶绿素提取和测定过程缩短至3小时以内。通过对提取温度、提取时间、稀释比例及吸收光谱等进行系统分析, 筛选出了叶绿素的最佳提取条件和叶绿素含量的准确计算公式, 并用多种类型的植物材料验证了改进后的提取方法, 证明该方法具优越性和可靠性。具体测定方法是将植物材料切成1 mm宽的细丝或细段, 取50-100 mg材料于10 mL具塞试管中; 加入2 mL DMSO, 使植物材料浸没其中, 65°C高温避光提取至植物材料变白或透明; 冷却后加入8 mL 80%丙酮, 混匀, 测定663.6和646.6 nm处的吸光度。用公式计算叶绿素浓度: C_a (mg∙L^-1)=12.27A_663.6-2.52A_646.6; C_b (mg∙L^-1)=20.10A_646.6-4.92A_663.6; C_T (mg∙L^-1)=C_a+C_b=7.35A_663.6+17.58A_646.6。     

MicroRNA122真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达与检测

为进一步研究microRNA的功能及作用靶标提供技术平台,构建microRNA真核表达载体。从HepG2215细胞基因组DNA扩增microRNA122前体,克隆到pEGFP-C1的载体上,经测序鉴定后转染至HepG2细胞中,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况并提取基因组总RNA,RT-PCR检测microRNA122表达,TA克隆鉴定。结果表明,成功构建microRNA122真核表达载体,并证实其在真核细胞HepG2中表达。此方法成功构建microRNA表达,并为后续研究提供良好的技术平台。     

非参数连锁分析

非参数连锁分析是进行复杂疾病连锁分析的有效手段,本文通过拟合的数据资料,对目前广泛使用的非参数型连锁分析方法进行了探讨,为今后有针对性的选择连锁分析方法提供依据。 Abstract:We present here four non- parametric statistics for linkage analysis (APM,SIBPAL,MAPMAKER-SIB and GENEHUNTER-NPL).Using the simulated pedigrees,we introduced the usage of these methods.     

新疆特克斯县柯尔克孜族体质特征

本文调查了新疆特克斯县柯尔克孜族农牧民和部分干部共215人(男110人、女105人),年龄在20—60岁。观察25项,测量65项。总的来看,柯尔克孜族的体征属蒙古人种中的东亚类型,与我国北部地区的居民较相似。     

灯盏生脉胶囊治疗糖尿病足临床观察

目的：探讨灯盏生脉胶囊治疗糖尿病足患者的临床效果。方法：选取76例糖尿病足患者,随机分为照组和试验组,各38例,对照组给予基础治疗与局部治疗,试验组在对照组基础上采用灯盏生脉胶囊口服治疗（每次0．36,3次／d）,共30天。比较两组患者的治疗效果、下肢血管彩超评分,以及治疗前后的溃疡面积、腓神经运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）和2型糖尿病生活质量评分（DMQLS）的改变。结果：试验组治疗的总有效率明显高于对照组（P〈0．05）,下肢血管彩超评分疗效优于对照组（P〈0．05）;溃疡面积、MNCV、SNCV的改善优于对照组（P〈0．05）;DMQLS评分升高,与对照组比较,差异显著（P〈0．05）。结论：灯盏生脉胶囊治疗糖尿病足疗效确切,并能提高患者生活质量。     

复合生物杀菌剂F6-11的安全性毒理学研究

目的：为研究复合生物杀菌剂F6．11毒性,采用动物实验法进行毒理学评价。方法：对复合生物杀菌剂F6-11进行小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、亚急性毒性试验、家兔多次完整皮肤刺激试验、急性眼刺激试验、豚鼠皮肤变态反应试验、鱼类延长毒性14天试验。结果：复合生物杀菌剂F6—11对小鼠急性毒性LD50〉5000mg／kg．bw,属于实际无毒级物质;小鼠微核试验该杀菌剂各剂量组与阴性对照组比较,微核率无显著性差异（P〉0．05）;亚急性毒性试验动物血常规、生化指标及各脏器均未发现异常;对家兔多次完整皮肤及眼刺激反应积分均为0,均属无刺激性;对豚鼠皮肤变态反应试验组动物与阴性对照组无可见不同．试验组动物皮肤致敏反应积分为0,无致敏作用;鱼类延长毒性14天试验无异常。结论：毒理学研究表明,复合生物杀菌剂F6．11具有良好的使用安全性。     

I型单纯疱疹病毒胸苷激酶真核表达载体的构建及其表达鉴定

为构建单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1TK)的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK,鉴定其在真核细胞中的表达和功能.以pORF-HSV1TK为模板,PCR扩增的目的基因HSV1TK片段与pMD18-T载体相连接构建重组克隆pMD18-T/HSV1TK.再双酶切出HSV1TK片段,插入pcDNA3.1-EGFP多克隆位点,构建pcDNA3.1-EGFP/ HSV1TK真核表达载体并进行酶切、测序鉴定[1].分别用荧光显微镜观察和RT-PCR方法检测脂质体介导pcDNA3.1-EGFP/ HSV1TK在卵巢癌细胞SKOV3的表达;分别用MTT法和光镜检测胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1TK/GCV)系统对SKOV3体外杀伤作用及旁观者效应.结果表明,重组载体酶切鉴定结果与预期结果一致,基因序列与GenBank上报道的HSV1TK基因序列完全一致.荧光显微镜观察转染后的细胞发出绿色荧光;RT-PCR结果表明HSV1TK基因能在SKOV3内有效表达.MTT和光镜结果显示转染HSV1TK基因的SKOV3细胞,加入前体药物丙氧鸟苷(GCV)处理后对其有明显的杀伤作用和旁观者效应.成功构建的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/ HSV1TK能在SKOV3细胞中稳定表达,且HSV1TK对卵巢癌细胞株SKOV3体外有强大的杀伤作用和旁观者效应.     

非参数连锁分析

非参数连锁分析是进行复杂疾病连锁分析的有效手段,本通过拟合的数据资料,对目前广泛使用的非参数连锁分析方法进行了探讨,为今后有针对性的选择性连锁分析方法提供依据。