家蝇Denfensin-1基因的克隆、诱导表达及启动子活性分析

【目的】鉴定一种新的家蝇Musca domestica防御素基因, 并分析其功能。【方法】从家蝇转录组数据库中鉴定了1条新的防御素基因cDNA序列, 并将其命名为家蝇防御素1 (Md-defensin-1)基因Mdde-1。利用生物信息学网站、 软件预测其结构等信息。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的表达模式, 并且利用基因步移技术获得了启动子序列, 同时采取细胞转染技术验证Mdde-1启动子活性。【结果】该序列包含一个276 bp的开放阅读框, 编码91个氨基酸残基。推导的氨基酸序列N端包括1个23个氨基酸残基的信号肽和1个28个氨基酸残基的前肽。成熟肽由40个氨基酸残基组成, 含有1个典型的CSαβ基序。实时荧光定量PCR结果显示, 家蝇2龄幼虫受金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus (G+)刺激后Mdde-1表达明显上调, 而大肠杆菌Escherichia coli (G^-)刺激后表达下调;Mdde-1在家蝇幼虫受到热激时呈上调表达。为进一步研究其调控机制, 克隆了Mdde-1启动子, 并证明了该启动子具有活性。【结论】据此认为Mdde-1是一种新的家蝇防御素, 并且在免疫革兰氏阳性菌方面发挥重要作用; 同时我们首先证明了Mdde-1的启动子具有活性。本研究为进一步研究家蝇防御素的作用机制奠定了基础。     

利用重组Pichia pastoris生产腺苷甲硫氨酸

为改造甲醇利用型酵母Pichia pastoris来生产腺苷甲硫氨酸（SAM,S-adenosylL-methionine）,我们将一个带有SAM合成酶基因的胞内表达质粒转化入Pichia pastoris菌株GS115,经过G418抗性筛选得到一株有两个基因拷贝的转化子。该菌在含有甲醇和甲硫氨酸的培养基中生长5d后,其细胞内的SAM的产量比原始菌株提高了30余倍。对该菌生产SAM的培养基中的碳源与氮源进行了优化,结果显示碳源的控制对该菌SAM产量的影响很大。在试管水平,该菌在含有0.75％的L-methionine并且碳源和有机氮源经过一定程度优化的培养基中,生长6d后SAM产量达到1.58g/L。     

黄芪毛状根GBSSI基因cDNA克隆及其结构分析

根据多种已发表的淀粉粒结构淀粉合成酶（ＧＢＳＳ）基因的比对分析,以它们保守区的核酸顺序为基础,设计一对简并引物。从膜荚黄芪（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ）Ｂｕｎｇｅ）毛状根提取ｍＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ的方法扩增出５６０ｂｐ的ｃＤＮＡ片段。序列测定表明,此片段与发表的豌豆和马铃薯ＧＢＳＳＩ基因相应序列同源性分别达８９．６％和７３．０％,通过５′／３′ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄ     

化感作用水稻对无芒稗及相关田间杂草的抑制作用评价

对从500份水稻种质资源中用差时播种共培法的改进方法初步筛选出10份水稻化感抑稗材料进行了田间化感抑草评价研究.结果表明,在直播条件下,化感材料谷梅2号、吓一跳、鸡早籼、赣早籼和商糯1号等对无芒稗的抑制作用显著优于水稻无化感作用材料秀水63和春江11.化感材料Milyang54对田间总量杂草的抑制作用最强.在移栽条件下,化感材料谷梅2号、青困2号、吓一跳和鸡早籼对无芒稗的抑制作用与无化感作用材料秀水63和春江11差异及显著性水平.水稻材料间部分农艺性状差异及显著性水平,化感材料吓一跳和鸡早籼的株高较高,分蘖力较强,但顶三叶叶面积较小.     

补肾解毒方抗脑老化机制的体外研究

摘要 目的：探讨补肾解毒方含药血清抗脑老化的体外分子机制。方法：采用过氧化氢诱导制备人脑胶质细胞衰老模型,使用补肾解毒方含药血清干预以期达到对人脑胶质细胞衰老模型的治疗效果,CCK-8法检测细胞活力,采用β-半乳糖苷酶染色法观察衰老阳性细胞比例,活性氧荧光探针法检测胞内活性氧水平,流式细胞术检测细胞凋亡比例,qPCR检测细胞中衰老相关基因CXCL1、FOXO1、P16、IL1A、IGFBP3、IL6的转录水平。结果：补肾解毒方含药血清可显著增强细胞活力（P＜0.05）,显著减少过氧化氢诱导的衰老阳性细胞比例（P＜0.05）,降低活性氧水平,显著减少凋亡细胞比例（P＜0.01）,下调IL1A、IL6、CXCL1、IGFBP3、FOXO1转录水平。结论：补肾解毒方含药血清可显著抑制过氧化氢诱导的人脑胶质细胞衰老,其可能与增强细胞活力、抗炎、抗凋亡、降低胞内活性氧水平等有关。     

广西野生砂仁调查

广西野生阳春砂仁资源丰富,分析其挥发油含油量和引种阳春砂仁接近,同时用薄层层析法比较其化学成份与引种阳春砂仁也一致。因此,值得进一步扩大开发和利用。     

湖北赛武当自然保护区野生珍稀植物优先保护定量研究

通过对湖北赛武当国家级自然保护区内的野生珍稀植物资源进行调查,运用濒危系数、遗传价值系数和物种价值系数,计算出物种优先保护值,以确定物种濒危等级和优先保护等级。结果显示：（1）该区内共有珍稀保护植物33种,隶属于26科33属,其中易危15种、近危11种、安全种7种;（2）该区珍稀植物优先保护值的范围为0.2631~0.6985,据此得出33种珍稀植物的优先保护等级为：Ⅰ级6种、Ⅱ级13种、Ⅲ级12种、Ⅳ级2种。（3）本研究结果与相关珍稀保护植物名录的濒危等级和优先保护级别存在较大差异,这可能是由于生境破碎化和人为干扰导致大部分植物在本区受威胁程度加重,因此应强化管理。     

硫氰酸生成酶样基因在家蝇高温和重金属镉应激中的作用

硫氰酸生成酶同源结构域普遍存在于古细菌、真细菌以及真核生物的多种蛋白分子内,这些蛋白构成一个功能多样的硫氰酸生成酶超家族。本研究根据家蝇转录组序列信息,分拣到一条硫氰酸生成酶样基因的EST序列,经分析发现其编码蛋白C末端含有典型的硫氰酸生成酶同源结构域,属于硫氰酸生成酶超家族,将其命名为家蝇硫氰酸生成酶样基因(Md-Rhodlike)。应用实时定量RT-PCR技术,分析了Md-Rhodlike在热激、镉胁迫条件下的表达量变化。Md-Rhodlike的mRNA水平在高温和镉处理后上调,提示该基因可能参与家蝇对高温及镉金属等环境胁迫因子的耐受,是一种新的家蝇应激相关蛋白。     

铜锈环棱螺对藻华水体理化指标的影响

采用池塘围隔对比试验的方法,研究了不同密度(392 ind·m^-2、196 ind·m^-2、98 ind·m^-2、0 ind·m^-2)铜锈环棱螺(Bellamyaaeruginosa)对藻华水体主要理化因子的影响.实验从2009年9月14日开始,持续60d.结果显示:环棱螺可以明显提高藻华水体的透明度(SD),实验中、后期,三个处理组围隔水体的SD均能保持在60cm以上,而对照组SD改变不明显,波动于29～40.3cm之间;多数时间内处理组水体的溶解氧(DO)含量都显著低于对照组,说明环棱螺的存在可直接或间接降低水体DO浓度.试验表明,单一投放螺类可有效降低藻华水体的叶绿素a(Chl-a)含量,但难以削减营养盐浓度.实验条件下,围隔水体总氮和正磷酸盐浓度的下降趋势均与螺的密度呈现负相关性(R=-0.9851,p<0.05;R=-0.9678,p<0.05);对SD、DO、pH、Chl-a、NH₄⁺-N、NO₃^--N、PO₄^3--P等7个主要理化指标数据进行了Duncan多重比较分析以及聚类分析,结果显示对照组和处理组在p<0.05水平上均存在显著差异,说明环棱螺的投放能在一定程度上调控水体质量.     

超声法提取山里红叶总黄酮及其抗氧化活性研究

采用超声辅助提取法从山里红叶中提取总黄酮。通过Box Behnken实验设计(BBD)结合响应面法(RSM)来优化超声提取的条件。影响山里红叶总黄酮提取效率的4个主要变量为液固比,温度,乙醇浓度和时间,得到的最佳值分别为15,40℃,40%,32 min。在此条件下,总黄酮的产率为15.50 mg·g^-1。体外抗氧化实验表明,山里红叶提取物的DPPH自由基清除能力为0.69 mg·mL^-1(以IC₅₀值表示) ,与传统的浸渍提取和热回流提取方法相比,超声提取的方法具有更好的抗氧化活性。实验结果表明超声提取法适用于提取山里红叶中的总黄酮,并且其提取物具有较好的抗氧化活性。