灰色链霉菌RX-17溶菌酶R2的纯化及其酶学鉴定

从灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 1 7的发酵液中 ,通过硫酸铵分级沉淀 ,CM SephadexC 5 0和CM SepharoseFastFlow离子交换层析 ,纯化得到了溶菌酶R2 .该酶分子量约为 2 4 8kD ,等电点约为 9 7,N端 1 5个氨基酸的顺序为DTSGVQGIDVSHWQG .R2酶溶解变链球菌Ingbritt(StreptococcusmutansIngbritt)的最适作用温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 .5 0℃处理 1h ,R2酶残存酶活74 % ,碱性条件 (pH >9)下该酶保持稳定 .Zn2 + 、Cu2 + 、Fe2 + 、Cd2 + 、Pb2 + 可使酶完全失活 ,螯合剂、盐酸羟胺、溴替丁二酰亚胺及离子型去垢剂SDS抑制R2酶的溶菌作用 ,而非离子型去垢剂TritonX 1 0 0等则能促进溶菌 .R2酶溶菌谱广泛 ,能够溶解多种鸡卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 .从对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)的高活性来看 ,该酶应分类为 β 1 ,4 N ,6 O 二乙酰胞壁质酶 (β 1 ,4 N ,6 O diacetylmuramidase) .     

在大肠杆菌中利用SCLM系统进行高效率λ-Red基因敲除/整合的新策略

【目的】传统采用的λ-Red体系在大肠杆菌染色体上进行基因敲除/整合操作时存在操作繁琐、假阳性率高、多基因连续敲除/整合不稳定等问题。本研究基于上述问题建立一种便于基因构建、高筛选效率(100%)、具有统一技术步骤的λ-Red敲除/整合系统,为提高基因功能研究和代谢工程改造工作效率奠定基础。【方法】采用新的p SC101衍生复制起始位点消除假阳性;利用高拷贝数质粒和多克隆位点实现快速遗传构建操作;采用Cre/Lox P抗性消除位点便于多基因连续整合。选择一系列初级代谢重要基因靶点进行敲除/整合。【结果】构建了一套新型λ-Red质粒系统(SC101-Cre-Lox P-MCS,SCLM系统)。打靶片段经电转化受体细胞后在双抗性平板上筛选阳性克隆,基因敲除/整合的效率均可以达到100%。【结论】新建立的基因敲除与整合方法提高了基因重组效率,大幅度减少了相关操作的步骤,缩短了研究周期。该方法的建立为基因功能研究和构建新遗传特性的工程菌株提供了有力的工具。     

广西北部湾茅尾海浮游真菌群落结构及其影响因子

浮游真菌在海洋食物网和生物地球化学循环中发挥着关键作用。【目的】为解析广西北部湾茅尾海不同季节浮游真菌群落结构及其关键环境影响因子,于2017年7月(夏季)、9月(秋季)、12月(冬季)和2018年3月(春季)期间在该海域设置7个站点,采集表层海水样品。【方法】利用内部转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)基因高通量测序技术,分析茅尾海浮游真菌群落结构与多样性。【结果】茅尾海海域浮游真菌隶属6个门、26个纲、71个目、167个科、282个属和374个种。主要浮游真菌类群为子囊菌门(Ascomycota, 82.14%)和担子菌门(Basidiomycota, 10.74%),共占浮游真菌总丰度的92.88%。茅尾海浮游真菌群落Shannon指数和Simpson指数在春季最高,Chao1指数和丰富度(richness)指数在冬季最高。主坐标分析(principal coordinates analysis, PCoA)和相似性分析(analysis of similarities, ANOSIM)结果显示,不同季节浮游真菌群落的β多样性具有极显著差异(R=0.591 2, P<0.001)。通过随机森林模型分析(random forest modeling analysis, RF),发现黄曲霉(Aspergillus flavus)、二色胶孔菌(Gloeoporus dichrous)、杂色曲霉(Aspergillus subversicolor)和微扁沃利雅炭皮菌(Whalleya microplaca)、翹鱗香菇(Lentinus squarrosulus)等20种海洋浮游真菌对环境变化敏感,可用于评估茅尾海富营养化状况。Spearman相关性分析表明,浮游真菌α多样性与海水pH、盐度和溶解氧(dissolved oxygen, DO)呈显著正相关关系(P<0.05),与温度、叶绿素-a (chlorophyll a, Chl-a)以及总有机碳(total organic carbon, TOC)呈显著负相关关系(P<0.05)。方差分解分析(variance partitioning analysis, VPA)发现营养因子是浮游真菌群落结构的主要驱动因子。【结论】本研究可为揭示北部湾海洋浮游真菌多样性提供理论参考,并为茅尾海生态环境监测与资源利用提供科学依据。     

人正常软骨和软骨肉瘤蛋白多糖的比较研究

取三例一般型一级的软骨肉瘤及不同年令正常人股骨头关节软骨,经4mol/L盐酸胍提取和氯化铯平衡等密度梯度离心,分析蛋白多糖组份的化学组成,并用Sepharose CL-2B层析分析蛋白多糖分子大小。初步结果,两例软骨肉瘤蛋白多糖的化学组成和分子大小与新生儿接近,另一例软骨肉瘤蛋白多糖的化学组成和分子大小与成年人相似。此结果说明软骨肉瘤生物学行为的多变性及其蛋白多糖的异质性。     

野猪与人冲突防控对策研究的系统评价

在中国,野猪(Sus scrofa)与人冲突问题亟需采取有效、科学的对策进行防控。通过了解野猪与人冲突防控对策的文献数量、研究范围、防控对策的种类及有效性等方面,对国内外野猪与人冲突防控对策进行系统分析与评价,以期为我国防控野猪与人冲突提供理论依据。检索中英文数据库建库至2021年5月31日的文献,提取文献的研究起始年份、研究所在地理单元、使用的防控措施种类、措施是否有效、措施的具体内容评价等。共搜集文献446篇,最终纳入77篇,分别来自欧洲、亚洲、北美洲、大洋洲、南美洲五大洲,研究时间主要在1981年后。防控对策类型主要分为致死性防控(药物、猎捕)及非致死性防控(干扰技术、设置障碍物、补充喂养、生育控制、生物防控)两大类;致死性防控对策的有效性(81.5%)高于非致死性防控对策的有效性(68.4%)。相比于非致死性防控对策,致死性防控对策是目前有效性较高的防控策略,而猎捕是现阶段调控野猪种群可行性较高的主要致死性防控对策。国外在猎捕方面的经验可为我国开展野猪防控工作提供参考。     

刺壳椒化学成分研究

刺壳椒又名三百棒 ,系芸香科花椒属植物。其根、茎、果实均可供药用〔1,2〕。刺壳椒化学成分的研究尚未见报道。我们曾对数种原产于中国的花椒属植物进行过化学成分的研究 〔3～ 12〕,并讨论了花椒属中Zanthoxylum和 Fagara2个亚属合并为广义的 Zanthoxylum的合理性〔13〕。为了寻找新的生物活性成分 ,并给花椒属的化学系统学提供一定依据 ,我们初步研究了刺壳椒的化学成分 ,从其茎的乙醇提取物中分得 9个化合物 ,其中 6个分别鉴定为白藓碱 ( ) ,γ-花椒碱 ( ) ,6,7,8-三甲氧基香豆素 ( ) ,β-谷甾醇 ( ) ,胡箩卜甙 ( )和一长链混合脂肪酸…     

淀粉样前体蛋白裂解片段sAPPβ、Aβ和AICD对SH-SY5Y细胞氧化损伤和线粒体膜电位的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的一个主要的病理特征表现为神经细胞表面大量地呈现β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein, Aβ)。淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)是与AD病理密切相关的膜蛋白,它经β-裂解途径剪切后生成s APPβ、Aβ和AICD片段。Aβ能引发细胞内质网氧化应激、线粒体功能障碍等,但s APPβ和AICD片段对细胞的影响还有待进一步的研究。本实验采用慢病毒介导质粒转染技术,分别构建了稳定过表达s APPβ、Aβ和AICD片段的SH-SY5Y细胞系,并分析了其细胞活力、细胞膜损伤、胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和线粒体膜电位去极化程度。结果表明, Aβ或AICD片段可在一定程度上导致细胞活力下降、细胞膜受损、胞内ROS水平升高和线粒体膜电位发生去极化,从而对细胞产生氧化损伤作用。     

刺异叶花椒的化学成分研究

从芸香科花椒属植物刺异叶花椒(Zanthoxylum dimorphophyllum var. spinifolium)中分得五个已知的化合物,其中四个为生物碱:氧化勒(木党)碱(oxyavicine)(Ⅰ);铁屎米酮(canthin-6-one)(Ⅱ);乙氧基白屈菜红碱(ethoxychelerythrine)(Ⅲ);勒(木党)碱(avicine)(Ⅳ);另一化合物为β-谷甾醇(β-sitosterol)(Ⅴ)。     

多年宿根甘蔗的转录组分析及差异基因挖掘

甘蔗(Saccharum hybirds)宿根性直接关系到甘蔗生产成本和种植效益,品种、环境和栽培措施均会影响甘蔗宿根能力,但品种的种性是影响宿根性最关键因素。国内外从分子生物学层面解释甘蔗宿根性差异的文献鲜见报道,从转录水平分析不同宿根年限GR2号和ROC22号基因表达的差异。结果表明：转录组测序共得到100 558条转录本和25 582条Unigene。获得53 790条Unigene的注释结果,分别在NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、GO和Pfam数据库进行比对。GO功能注释共分成三大类,51小类,6年宿根蔗注释到1 029个差异基因,3年宿根蔗注释到3 391个差异基因。主要KEGG代谢通路有8条,分别涉及植物激素信号转导,淀粉和蔗糖代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,苯丙素生物合成,同源重组,DNA复制,错配修复及植物病原体相互作用。筛选出脱落酸(ABA)相关差异基因6个,分别为脱落酸不敏感蛋白2基因(ABI2)、bZIP转录因子超家族蛋白、碱性亮氨酸拉链型转录因子基因(ABI5)、aba响应元件结合因子1基因(ABF1)、G-box结合因子基因(GBFs)...     

缬沙坦联合吡格列酮治疗早期糖尿病肾病的疗效观察

目的:观察缬沙坦联合吡格列酮治疗早期糖尿病肾病的疗效及其对肾功能和氧化应激水平的影响。方法:选取2010年1月~2012年6月在我院就诊的早期糖尿病肾病患者90例,随机分为观察组和对照组,每组各45例。对照组予以吡格列酮治疗,观察组在对照组的基础上予以缬沙坦治疗。观察两组治疗前后的尿白蛋白排泄率(UAER)、β2微球蛋白(β2-MG)、血肌酐(SCr)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性水平的变化。结果:观察组和对照组的治疗总有效率分别为93.33%、75.56%,观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(X2=4.145,P=0.042)。治疗后,两组患者的UAER、β2-MG、SCr和MDA水平均较治疗前明显降低(P0.01),且观察组以上指标的水平显著低于对照组(P0.01);而两组SOD和GSH水平均较治疗前明显升高(P0.01),且观察组以上指标的水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:缬沙坦联合吡格列酮治疗早期糖尿病肾病的疗效较单用吡格列酮更好,并可显著改善患者的肾功能和降低氧化应激水平。