外源基因pheA,aroG和tyrB在苯丙氨酸合成途径中的共表达

利用基因工程技术提高了短杆菌的苯丙氨酸合成途径中关键酶活性,大幅度地增加了生物合成苯丙氨酸的产量。首先采用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌的氟代苯丙氨酸抗性变异菌株基因组中扩增到与苯丙氨酸合成相关的aroG,pheA和tyrB 3个基因。其中aroG编码3-脱氧-2-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(DS),pheA编码双功能酶蛋白-分枝酸变位酶(CM)和预苯酸脱水酶(PD),tyrB编码转氨酶(AT)。设计不同的酶切位点,利用质粒pUC118的多克隆位点,将3个基因按不同的顺序组合串联,然后插入穿梭质粒pCZ.10,导入短杆菌中表达。结果表明3个大肠杆菌基因在短杆菌中能够表达。其中以aroG-pheA-tyrB顺序串联而构建的黄色短杆菌工程菌株1311-GAB中的DS酶活力提高4.5倍,CM提高4.2倍,PD提高2.7倍,AT提高3.2倍;它的苯丙氨酸合成量提高2.35倍。     

S100蛋白功能和结构研究进展

S100蛋白作为Ca2+调节蛋白广泛存在于各种脊椎动物中.它们参与调控蛋白磷酸化、酶活性、细胞增殖分化、细胞骨架组成的动力学、膜结构组成、维持细胞间Ca2+浓度的恒定、参与炎症反应,以及保护细胞免受氧化损伤等.对S100蛋白的一般特征、细胞内外的功能及结构的研究进展等方面做了比较全面的阐述.部分S100蛋白三维结构的解析为进一步探讨其功能提供了直观的信息.     

外源基因pheA、aroG和tyrB在苯丙氨酸合成途径中的共表达

利用基因工程技术提高了短杆菌的苯丙氨酸合成途径中关键酶活性,大幅度地增加了生物合成苯丙氨酸的产时。首先采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从大肠杆菌的氟代苯丙氨酸抗性变异菌株基因组中扩增到与苯丙氨酸合成相关的ａｒｏＧ,ｐｈｅＡ和ｔｙｒＢ３个基因。ａｒｏＧ编码３－脱氧－２－阿拉伯庚酮糖－７－磷酸合成酶（ＤＳ）,ｐｈｅＡ编码双功能酶蛋白－分枝酸变位酶（ＣＭ）和预苯酸脱水酶（ＰＤ）,ｔｙｒＢ编码转氨酶（ＡＴ）。设     

宁国县竹林大型土壤动物群落结构与竹笋夜蛾危害程度的关系

许多农林害虫在发育过程中的某个阶段需要在土壤中度过 ,成为土壤动物的组成部分。有关土壤动物群落与害虫关系的研究 ,迄今报道甚少 ,近年来 ,我们对马尾松林土壤动物与荔蒲吉松叶蜂 (Ｇｉｌｐｉｎｉａｌｉｐｕｅｎｓｉｓ)害虫[1] 及水稻土壤动物与稻象虫 (Ｅｃｈｉｎｏｃｎｅｍｕｓｓｑｕａｍｅｕｓ)害虫关系[2 ]等进行初步报道。本文将对淡竹林大型土壤动物与竹笋夜蛾 (Ｏｌｉｇｉａｖｕｌｇａｘｉｓ)危害程度的关系进行研究 ,目的在于探明不同危害程度的竹林内 ,土壤动物群落结构各项重要指标的变化规律 ,以及竹笋夜蛾在土壤中的分布、…     

大肠杆菌aroG基因的克隆表达及与pheA、tyrB基因的串联表达

３－脱氧－２－阿拉伯庚酮糖－７－磷酸合成酶（ＤＡＨＰ）是苯丙氨酸合成途径中关键酶之一,在大肠杆菌中由ａｒｏＧ基因编码。本文用ＮＴＧ诱变得到对苯丙氨酸类似物间氟苯丙氨酸（ｍＦＰ）和对氟苯丙氨酸（ｐＦＰ）有抗性的大肠杆菌突变株,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到了ａｒｏＧ基因,在大肠杆菌中进行了表达。结果表明,该基因能在λ噬菌体的ｐＲ启动子驱动下得到表达,在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳图上出现清晰的条带,酶的比活提高了１．７倍。在ｐｈｅＡ（编码分枝酸变位酶ＣＭ和预苯酸脱水酶ＰＤ）、ｔｙｒＢ（编码苯丙氨酸转氨酶ＰＡＴ）基因克隆、串联克隆和表达完成的基础上,将ａｒｏＧ基因和ｐｈｅＡ、ｔｙｒＢ基因以ａｒｏＧ－ｐｈｅＡ－ｔｙｒＢ的顺序三基因串联到表达载体进行表达,酶活测定结果表明,三个基因都能在λ噬菌体的ｐＲ启动子驱动下表达,与对照菌株相比,酶比活分别提高了１．７倍、１３．９／７．８倍和２．３倍。     

盐胁迫下外生菌根真菌与根际有益细菌互作对杨树光合特性的影响

以美洲黑杨幼苗为对象,利用盆栽试验,在100 mmol/L NaCl胁迫条件下研究单接种和双接种外生菌根真菌红绒盖牛肝菌(Xerocamus chrysenteron,简称Xc)、溶磷细菌恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida,简称JW-SX1)和菌根辅助细菌蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus,简称HB59)对杨树幼苗的气体交换参数、叶绿素荧光和光响应曲线参数的影响。结果表明:盐胁迫下,接种Xc、JW-SX1及HB59的杨树幼苗净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)显著增强,且均显著高于对照,而单接JW-SX1和双接Xc+JW-SX1处理的胞间CO2浓度(Ci)低于对照,但与对照相比差异不显著;各接种处理显著增强了杨树的最大光化学效率(Fv/Fm),但处理之间差异不显著性;不同接种处理杨树的实际光化学效率(ΦPSⅡ)与对照(CK)差异不明显,其中接种HB59和Xc+JW-SX1处理分别高于对照14.36%和19.33%;同时接种处理还明显提高了宿主的最大光合速率(Pmax)、光饱和点(LSP)、表观有效利用效率(YAQ),降低了光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(RD),且双接种菌根真菌Xc和JW-SX1处理效果更为明显。研究发现,外生菌根真菌、溶磷细菌和菌根辅助细菌可通过改善叶片叶绿素荧光和光合参数、光响应参数来减轻盐胁迫对宿主造成的伤害,从而提高杨树的耐盐性能力。     

不同适应条件对细鳞鲑幼鱼游泳能力的影响

为了研究适应条件对鲑科鱼类幼鱼续航游泳能力的影响,在(16.0±0.2)℃和8 mg/L溶解氧条件下,以续航时间作为评定游泳能力的关键指标,通过适应时间、适应流速、加速时间以及测试流速对细鳞鲑幼鱼的续航游泳时间的影响进行了研究,试验采用4因素8水平的均匀设计方案。结果表明,最大适应流速应控制在1—1.5 BL/s为宜,相应的最佳适应时间应为1 h,在合理条件下适应流速和适应时间对续航游泳能力的影响可忽略不计;加速时间只在大流速条件下(0.5 m/s)对续航时间有极显著影响,其他情况的影响可以忽略不计;尽管长时间适应环境更有利于鱼类身体机能的充分调整,但适应时间仍建议控制在1—2 h以内,且受试鱼类要经过试验前的适应能力筛选;测试流速建议控制在3—4 BL/s以内,以避免超过鱼类的最大游泳耐受范围。测试流速对细鳞鲑幼鱼的续航时间有极为显著的影响,其续航时间随测试流速的增加呈幂函数规律衰减。     

右美托咪定预先给药对高血压冠心病患者诱导插管时血流动力学及应激反应的影响

目的:探讨右美托咪定预先给药对高血压冠心病患者诱导插管时血流动力学及应激反应的影响。方法:将我院2012年7月-2013年3月择期行腹部手术且合并高血压冠心病患者50例随机均分为实验组(麻醉诱导前15 min静脉泵入剂量为1.0μg/kg的右美托咪定稀释液15 m L)和对照组(麻醉诱导前15 min静脉泵入15 m L生理盐水),监测并记录两组患者在不同时刻的BP、HR、RPP,抽取静脉血测定血浆NE和E的浓度。结果:(1)与T0时刻相比,对照组患者的心率、血压、RPP在T1-T5各时刻是先有所下降后又上升的(P0.05),其中对照组RPP在T3时明显上升(P0.01),然而实验组内在各时刻变化不明显(P0.05),两组间比较差异具有统计学意义(P0.05);(2)与T0时刻进行比较,对照组患者血浆NE和E的含量水平在T3、T4时刻明显上升(P0.05),而实验组则变化不明显,组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:右美托咪定预先给药用于缓解高血压冠心病患者诱导插管时心血管反应效果显著,值得临床推广应用。     

C57BL/6 J小鼠黑色素瘤肺转移模型的构建

目的探讨建立C57BL/6 J小鼠黑色素瘤肺转移模型的影响因素,包括肿瘤的接种方式、细胞接种数量和成瘤周期。方法体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10。1)取6~8周龄,雄性小鼠18只,随机分三组,每组6只,分别采取尾静脉注射、腹腔注射和皮下注射方式,每只小鼠注射100μL(3×10~6个细胞)B16F10细胞悬液,2周后,解剖小鼠并观察黑色素瘤的生长和转移情况;2)分3组,同上,经尾静脉分别注射3×10~6个细胞、1×10~6个细胞、3×10~5个细胞,2周后,解剖小鼠并观察黑色素瘤的生长和转移情况;3)分3组,同上,尾静脉注射1×10~6个细胞,分别于1周、2周、3周解剖小鼠,观察黑色素瘤的生长和转移情况。结果 1)尾静脉注射小鼠黑色素瘤细胞,小鼠发生肺转移的成功率为100%,而腹腔注射和皮下注射未发生肺转移。2)接种小鼠黑色素瘤细胞数量为1×10~6时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量适中;接种细胞数量为3×10~6时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量过多;接种细胞数量为3×10~5时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量较少。3)尾静脉注射1×10~6个小鼠黑色素瘤细胞,饲养2周后,可以观察到黑色素瘤细胞明显的肺部转移,且不会导致小鼠死亡;饲养3周,黑色素瘤细胞肺部转移数量过多,且小鼠死亡过半;饲养1周,黑色素瘤细胞肺部转移数量较少。结论经尾静脉注射1×10~6个小鼠黑色素瘤细胞,生长2周时间,为构建C57BL/6 J小鼠黑色素瘤肺转移模型的推荐方法。     

长江上游圆口铜鱼的食性分析

2010年春季(4—5月)、夏季(8月)和秋季(10月)在长江上游合江江段采用三层流刺网以3h为间隔昼夜24h连续采集圆口铜鱼样本,对其食物组成、昼夜摄食节律及季节摄食节律等进行分析和研究。结果显示圆口铜鱼的食谱较广,其食物种类包括软体动物、甲壳动物、鱼类、水生昆虫、寡毛类和植物碎片等,其中以淡水壳菜的相对优势度最高,说明圆口铜鱼是以肉食性为主的杂食性鱼类;平均饱满指数和平均充塞度的昼夜变化显示其昼夜摄食节律在春季表现为白昼型,而在夏季和秋季为晨昏型。摄食率随季节变化逐渐降低,春季摄食率最高,达93.33%;秋季摄食率最低,仅为78.21%;充塞度和饱满指数均表现出相似的季节变化,即春季摄食强度明显高于夏季和秋季,而夏秋两季之间差异不显著。