2,5-DKG还原酶Ⅱ基因的克隆和在大肠杆菌中的表达

参照文献上的2,5-二酮基-D-葡萄糖酸（简称2,5-DKG）还原酶II基因序列,合成两个引物序列并在两端加上EcoRI和BamHI两个酶切位点,抽提棒状杆菌SCB3058菌株的染色体为模板进行PCR反应,克隆得到2,5-DKG还原酶II基因,酶切验证与预期的结果相符合。将此片段克隆到pGEM-T载体上保存．将2,5-DKG还原酶II基因用EcoRI和BamHI内切酶切下,连接到pBV220载体上,构建成表达载体。42℃诱导不能得到稳定的蛋白表达条带和酶活力,测序发现基因的3’末端的原PCR引物外少合了一个碱基,终止密码子发生移码突变而消失。此外在5’端的启始密码子ATG前有三个碱基与pBV220载体上的SD序列发生配对。据此,重新设计和合成了PCR引物,并用pBV220和pBL4载体构建了两个表达载体。42℃诱导表达均得到了稳定的表达条带和较高的酶活力．     

N~ 离子注入热带假丝酵母对长链二元酸产量的影响

用热带假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＳＣＢ４１２作为出发菌株,经能量５０ＫｅＶ、剂量１× １０~１１～５ ×１０~１５ ｉｏｎｓ／ｃｍ~２的Ｎ~＋离子注入诱变处理,以产生可遗传的诱变。 Ｎ~＋离子注入后,存活率与剂量呈指数衰减关系：ｌｏｇ（存活率％）＝ ８．２３－ ０．６０４ × ｌｏｇ（剂量）,在培养过程中可观察到酵母菌菌落和细胞形态均发生了变化。经筛选,获得了一株能够利用正十二烷烃发酵产生长链二元酸的高产菌热带假丝酵母ＳＣＢ６０９。在初始正十二烷烃浓度为１５％（ｖ／ｖ）下产酸量由４３．５ｇ／Ｌ上升到７３．２ｇ／Ｌ。比较两株菌发酵生长特性的差异,产酸过程有一定的变化。     

从葡萄糖一步发酵生产维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸研究进展

维生素Ｃ作为人体必需的一种维生素和抗氧化剂,在医药和食品工业上有相当大的市场,它的生物合成近十几年来一直受到广泛的重视。2酮基Ｌ古龙酸(简称2ＫＬＧ)是维生素Ｃ合成的重要前体,工业上目前大多采用“莱氏法”或者改良的“二步发酵法”[1]生产。近年来,构建重组菌株实现从山梨醇直接发酵产生2ＫＬＧ研究又取得很大进展[2,3]。不过还必须以葡萄糖通过高压加氢制备的山梨醇为原料,各国的生物学家同时探....     

2,5-DKG还原酶I的分离纯化与性质研究*

欧文氏菌ER97高效表达了从棒状杆菌SCB3058克隆的2,5-二酮基-D-葡萄糖酸(2,5-DKG)还原酶I基因,5 L罐发酵后,收集菌体破碎,将胞内可溶性的蛋白通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水柱层析后分离纯化到了2,5-DKG还原酶I,纯化了5倍,得率27%,比活力为3,418 U/mg。测定了该酶的一些特性参数:分子量为34 kD,等电点为6.0,它以NADPH为辅酶,将2,5-DKG还原为2-酮基-L-古龙     

L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｉｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分得到了Ｌ－册梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－册梨糖脱氢氧化为Ｌ－册梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测     

食品抗氧剂-D-异抗坏血酸的研究——Ⅱ.产酮产碱菌E54产生2-酮基-D-葡萄糖酸的发酵条件

2-酮基-D-葡萄糖酸是合成D-异抗坏血酸(简称异维生素C)的前体。而D-异抗坏血酸及其钠盐是广泛应用于食品工业中的优良抗氧剂。本文通过新种产酮产碱菌使葡萄糖发酵产生2-酮基-D-葡萄糖酸,并对该菌发酵的碳源、氮源、通气量、温度、金属离子等影响作了探讨,通过正交试验确定了产生2-酮基-D-葡萄糖酸最佳种子培养基和发酵培养基。并对该菌的发酵代谢作了初步的观察。     

三孢布拉氏霉生产合成β—胡萝卜素的研究：Ⅰ.三孢布拉氏霉负菌优？…

采用紫外照射、亚硝基胍（ＮＴＧ）和离子束综合诱变处理,获得汪株三孢布拉氏霉菌负菌优良菌株ＳＣＢ２０１。在优化了的培养条件下,它与三孢布拉氏霉菌正菌ＳＣＢ２００接合培养产β－胡萝卜素达到２ｇ／１,较其亲株０．２ｇ／１的水平提高１０倍。     

L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分离得到了Ｌ－山梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－山梨糖脱氢氧化为Ｌ－山梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得分子量约为６０ＫＤ。动力学性研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对Ｌ－山     

氧化葡萄糖酸杆菌SCB329基因组结构的研究进展

自 1 995年Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ等人完成流感嗜血杆菌全基因组序列以来 ,国内外微生物基因组的研究迅猛发展 ,已成为一大热点。微生物基因组的研究目前多集中在与疾病相关的微生物以及极端微生物 ,但对工业微生物的相关研究报道很少。选择有重大应用价值的若干个工业微生物的基因组进行研究 ,必将促进今后基因组功能研究的开展。生产维生素Ｃ的“二步发酵法”是我国尹光琳研究员等人发明的一项先进工艺。其第二步 ,即Ｌ 山梨糖到 2 ＫＬＧ的转化是由两株菌共同参与完成的 ,一株是氧化葡萄糖酸杆菌(Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒｏｘｙｄａ…     

构建从葡萄糖直接发酵产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的基因工程菌研究进展

构建从葡萄糖直接发酵产生维生素Ｃ前体２┐酮基┐Ｌ┐古龙酸的基因工程菌研究进展维生素Ｃ作为人体不可缺少的维生素和抗氧化剂在医药和食品工业上有重要用途,２－酮基－Ｌ－古龙酸（２－ＫＬＧ）是合成维生素Ｃ的重要前体,工业上大多采用“莱氏法”或“两步发酵法”生...