大蒜素及其前药对食管癌细胞生长的影响

通过大蒜素及大蒜素前药处理食管癌Eca9706细胞,观察细胞形态,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和DNA降解。结果表明,癌细胞变圆、变小,活细胞数目减少,脱壁细胞和细胞碎片增多。DNA-Ladder试验结果显示,出现了DNA梯状条带,表明DNA分子发生降解。大蒜素及其前药处理的Eca9706细胞LDH活性显著高于对照组,随处理浓度增加和时间延长,LDH活性依次升高,表现出时间和剂量的依赖性。大蒜素前药处理Eca9706细胞的LDH活性明显高于大蒜素,表明大蒜素前药对细胞膜的损伤程度较大。     

Microdystrophin基因重组腺病毒的构建及转染mdx骨髓间充质干细胞的表达

构建含有人microdystrophin基因的重组腺病毒,来感染dystrophin基因敲除小鼠mdx的骨髓间充质干细胞(ＭＳＣ)进行基因修饰,为同种异体基因修饰的干细胞移植治疗ＤＭＤ疾病奠定基础。用NotⅠ酶切含microdystrophin基因的pBSK-MICRO质粒,获得microdystrophin基因。片段回收后定向插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pShuttle-CMV-MICRO。PmeⅠ线性化重组质粒pShuttle-CMV-MICRO,去磷酸化后回收后与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共电转化BJ5183感受态细胞。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察293细胞病变及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。然后将病毒上清转染DMD模型鼠mdx小鼠的骨髓间充质干细胞,通过RT-PCR以及间接免疫荧光检测microdystrophin的转录及蛋白表达。成功构建了含有microdystrophin基因的重组腺病毒,病毒滴度为5.58×10¹²vp/mL。间接免疫荧光检测可见microdystrophin蛋白在mdx小鼠MSCs中高效表达。该重组腺病毒载体的构建及成功转染到mdx MSCs内表达为下一步用microdystrophin基因修饰的mdx MSCs进行同种异体移植治疗ＤＭＤ疾病奠定了基础。     

便携式上肢运动协调性检测系统设计与实现

目的:研究人体上肢协调性运动的相关指标,以此来检测儿童先天性发育不良以及预防老年人的协调性相关疾病等问题。方法:本文设计了一种上肢协调性运动检测系统,检测被试的上肢运动状态,研究其协调性运动指标。本系统由运动感知单元、PC机端的控制台以及协调性运动指标数据分析组成。结果:利用该系统检测被试的运动协调性,给出了被试的准确性运动指标0.23以及协同性运动指标0.18。结论:经试验该系统对检测上肢的运动协调性有帮助,且方便携带与操作。     

基于蓝牙4.0的便携式睡眠监测仪的研制

目的:实时监测睡眠状况,从而帮助人们特别是老人找到影响睡眠的原因。方法:设计了一个低功耗便携式睡眠监测仪,它是通过加速度传感器采集腕动信号、蓝牙4.0低功耗无线传输、Micro-SD卡存储、上位机显示等实现对睡眠状态的检测。为了验证睡眠监测仪的准确性,本文采用了视频分析方法,并且对不同人群进行监测。结果:研制的睡眠监测仪具有便携低功耗等特点,能够准确监测睡眠状态。结论:睡眠监测仪的研制对使用者特别是老人帮助很大,能够帮助使用者方便适时了解自己的睡眠状况,找到影响睡眠原因和改善睡眠质量方法。     

EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用

目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白EGFP及荧光素酶luciferase的真核表达载体p CMVLuciferase-IRES2-EGFP,对肝癌细胞系Hepa1-6转染后进行稳定筛选,并将表达该载体的细胞系应用于小鼠原位肝癌模型构建,以对小鼠肝癌细胞进行稳定标记与活体示踪。方法:对p GL3-Basic质粒进行Xba I酶切、Klenow片段补平黏端、Xho I酶切获得luciferase小片段,与Xho I/Sma I酶切p IRES2-EGFP质粒获得的载体大片段连接,获得重组质粒p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鉴定、测序比对确认序列完全正确后,以重组载体转染Hepa1-6细胞进行稳定筛选,以荧光显微镜观察EGFP表达,报告基因实验与LuminaⅡ成像系统检测荧光素酶活性。确认该细胞系中的质粒得到表达后,以该细胞系进行C57BL/6小鼠肝脏原位接种构建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系统连续活体监测肝癌的生长,取离体的肝癌组织制备石蜡切片(HE染色)和冰冻切片(免疫荧光染色)分别观察离体肿瘤组织病理学特征及其中肝癌细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建表达p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP载体的Hepa1-6细胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以该细胞系成功构建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,实现小鼠肝癌细胞的活体示踪与体外标记。结论:成功构建EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系,且以此细胞系构建的小鼠原位肝癌模型可以同时实现小鼠肝癌生长的连续活体监测与离体组织检测。     

微波法提取菱角中甾醇类化合物的研究

本文研究了微波法提取菱角中甾醇类化合物的新方法。通过正交实验确定了甾醇的最佳提取条件为：95％乙醇作提取剂,微波功率420W,料液比1：5,提取时间60s,提取2次。以紫外分光光度法测定了样品中植物总甾醇的含量,其中菱角皮中含总甾醇0．624mg,／g,菱角仁中含总甾醇0．640mg／g。该方法的平均回收率为91．6％。与超声波法及索氏回流法相比,微波法提取菱角中甾醇类化合物的提取时间极短,由3～6h减少为60s,而提取效率却提高了1／3左右。从节能、技术经济和资源综合利用的角度来看,微波法将有广阔的应用前景。     

丹桂和籽银桂花芽分化的研究

采用石蜡切片技术,对不育的丹桂（Osmanthus fragrans ‘Dangui’）和可育的籽银桂（Osmanthus fragrans ‘Ziyingui’）花芽分化的过程进行了研究。结果表明,桂花（Osmanthus fragrans Lour.）花芽形态分化可分为花芽分化初始期、总苞分化期、花原基分化期、顶花花被分化期、雄蕊分化期和雌蕊分化期6个阶段。雄蕊的发育在丹桂和籽银桂之间基本没有区别,都能形成完整的花粉囊和成熟的花粉粒。但是,雌蕊的发育在可育的籽银桂与不育的丹桂之间存在明显差异。根据花芽分化的过程证明,丹桂的不育是由于雌蕊发育不正常导致的。     

一株白囊耙齿菌对刚果红染料的脱色研究及其毒力测试

菌株2-1-1于贵州大学校园樱花树干子实体中分离,通过形态学结构、ITS序列及系统发育树分析,鉴定其为白囊耙齿菌Irpex lacteus,对菌株2-1-1产生的3种木质素降解酶进行测定,发现菌株可分泌漆酶(laccase,Lac)、木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)和锰过氧化物酶(manganese peroxidase, MnP)。利用菌株2-1-1对固体培养基条件下7种染料的脱色能力进行检测,筛选出较易脱色的刚果红染料,同时采用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectroscopy,GC-MS)分析确定经白囊耙齿菌降解的刚果红染料代谢产物,并对其进行脱色条件优化和毒力测验,试验分析表明：菌株2-1-1对7种染料均有脱色,对刚果红脱色效果较佳。GC-MS分析刚果红染料降解产物主要为联苯胺、联苯、苯乙烯、十六烷和3-硝基苯酚。单因素和综合优化脱色条件：染料浓度50mg/L,碳源为果糖、金属离子为锌离子、pH7,该条件下刚果红染料脱色效果最优。优化条件下菌株2-1-1对刚果红染料脱色率达91.03%,相比对照组脱色率提高...     

青海野生黄色类群羊肚菌群体遗传结构分析

为明确青海野生黄色类群羊肚菌群体的遗传结构和遗传多样性,本研究利用SSR分子标记对来自青海省3个地理单元7个地区的35株野生黄色类群羊肚菌进行分析.结果 显示,12对引物共扩增出54条清晰可识别条带,其中多态性条带有48条,占比88.8％.居群水平的Nei's遗传多样性指数和Shannon's多样性指数分别为0.371...     

D-核糖生产菌的选育

将枯草芽胞杆菌通过紫外线诱变得到了莽草酸缺陷突变株,在２８株突变株中有１０株积累Ｄ－核糖。这些菌株均属戊糖磷酸途径的非氧化支路缺失突变株。对这些菌株的产核糖能力进行了验证、培养基中芳香族氨基酸的浓度影响Ｄ－核糖的积累