黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建

以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8.该质粒通过E.coil ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接舍转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3.通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点.以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高迭1 000 μg/mL以上.     

岷江上游干旱河谷优势灌丛群落土壤生态酶化学计量特征

与碳(C)、氮(N)和磷(P)分解矿化相关的土壤生态酶的相对活性可以揭示微生物生长和代谢过程的能量限制。尽管干旱生态系统愈来愈受到生态学家的关注,但在土壤水分有效性限制和斑块状分布的植被背景下,探讨土壤酶活性化学计量特征,及其与土壤物理、化学因子和土壤微生物群落结构的关系的相关研究仍十分缺乏。通过调查岷江干旱河谷不同水分梯度4个研究样地(两河口、飞虹、撮箕和牟托)灌丛及其丛间空地的土壤物理化学性质、微生物群落组成和土壤生态酶活性,探讨不同水分梯度样地间及灌丛和空地间土壤酶活性计量的分布特征。结果显示,岷江干旱河谷土壤C∶N∶P酶活性化学计量表现出了与全球尺度上酶活性化学计量的相对特异性(C∶N∶P=3∶2∶2 vs.1∶1∶1)。整体上,岷江干旱河谷区域土壤微生物生长代谢存在一定程度的N限制。虽然酶活性化学计量特征在所有空地和灌丛土壤之间总体未表现出显著差异,但对各研究地的进一步分析表明,两个相对干旱的两河口和飞虹样地表现出更为明显的N限制,而两个相对湿润的撮箕和牟托样地则存在一定的P限制。这种样地间的差异性主要受土壤水分有效性的驱动。逐步回归分析表明,土壤含水量是不同样地间土壤C∶N酶活性比(ln(BG)∶ln(NAG+LAP))和N∶P酶活性比(ln(NAG+LAP)∶ln(AP))的决定性影响因子。而土壤含水量与C∶N酶活性比具有显著正相关关系,与N∶P酶活性比表现为显著负相关关系。此外,土壤真菌、菌根真菌和真菌∶细菌比对土壤酶活性化学计量的影响,说明了真菌和菌根真菌类群对干旱河谷养分循环的重要作用。     

唇腺活检、自身抗体在干燥综合征诊断中的意义

目的:探讨干燥综合征(ss)患者的唇腺活检病理表现、自身抗体及其在诊断中的意义。方法:收集85例干燥综合征患者的临床体征、唇腺活检以及其他相关辅助检查,对其唇腺活检病理标本及相关检查进行分析。结果:根据唇腺病理结果,单纯唇腺活检的阳性率为68.2%;单纯血清抗SSA/SSB抗体检出阳性率为78.8%;联合唇腺活检、抗SSA/SSB抗体疾病检出率达94.1%,与单纯唇腺活检或抗SSA/SSB抗体单项阳性的疾病检出率有统计学意义(P0.05);并且唇腺活检阳性患者较阴性患者口干或眼干持续时间长(P0.05);但腮腺ECT异常、关节肿痛、肺脏损害均较唇腺活检阴性组患者累及率高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:唇腺活检、自身抗体是诊断干燥综合征的必要检查,而其联合应用更具有举足轻重的意义。     

高压氧对透析用动静脉内瘘血液流量影响的观察

目的建立家兔颈动静脉内瘘(AVF)动物模型,观察高压氧(HBO)治疗对AVF血流量的影响。方法显微外科方法建立家兔颈总动静脉之间AVF模型32例,随机等分为实验组与对照组各16例,实验组给予HBO治疗,对照组不作任何治疗。于术后第2、8、15、22及29d采用彩色多普勒仪检测各组AVF血流情况。结果术后第15、22及29d,实验组的血流量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 HBO治疗可持续稳定AVF的血液流量,术后早期HBO治疗对AVF功能障碍有改善作用。     

“生物技术实践”教学研讨（7）“血红蛋白的提取和分离”的实验分析及教学组织

“血红蛋白的提取和分离”是人教版选修模块“生物技术实践”中的实验内容,其目的是使学生体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法,该实验虽然操作难度较大,但原理清晰,动手机会较多,因此,学生的学习兴趣很高。下面结合人教版教材对该实验进行分析并提出相应的教学建议。     

腺相关病毒载体介导的人内皮抑素的体外表达及对内皮细胞抑制作用的研究

抗血管生成基因治疗是一有希望的抑制肿瘤生长及转移的方法.在实验中构建了含有人内皮抑素(endostatin)基因的重组腺相关病毒载体rAAV-hE.所包装纯化的重组病毒滴度达0.5×1012v.g./ml.rAAV-hE能有效感染培养细胞,EIA法检测培养液上清中内皮抑素浓度达36.42ng/ml.rAAV介导所表达的内皮抑素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)和牛毛细血管内皮细胞(BCE)具有抗增殖抑制作用,抑制率分别为68.1%和41.6%.此结果为进一步的动物实验奠定了基础,表明重组腺相关病毒载体介导的抗血管生成有望应用于肿瘤基因治疗.     

用概率单位-平行线法和常规法统计分析几种疫苗效力检测结果的比较

本文采用概率转换-平行线法并应用微机程序对乙肝疫苗30批、狂犬疫苗34批双百日咳菌苗30批的效力试验结果进行了统计分析,并与现行常现统计法即Reed-Muench和Wilsonworcester法统计结果作了比较。 1.采用P-P法统计分析乙肝疫苗、狂犬病疫苗及百日咳菌苗效力试验结果,经对回归方程的线性及平行性检验成立的批数分别占83.3％、82.3％和83.3％,结果表明该法可以检查出由于动物差异及实验误差导致结果不成立的批数,应予复试。 2.P-P法与常规法(R-M法及W-W法)统计分析给果对三种制品评价一致的符合率分别为80％、79.4％和76.6％,两会判定结果一致,但前者更有科学性。 3.由P-P法统计分析结果,三种制品都有部分批的95％可信区间上下限值差距较大,该差距来源于动物差异及实验误差,说明在检测试验中,必需按规程要求严格筛选适宜动物和严格试验操作,以减少实验误差。对效力值可信区间应控制何种适宜范围,尚需作进一步探讨。     

孕中期超声联合无创产前基因筛查在检出染色体异常胎儿中的应用价值

摘要 目的：孕中期超声联合无创产前基因筛查（NIPT）在染色体异常胎儿检出中的应用价值。方法：选取2019年8月～2021年12月在石家庄市妇幼保健院产前检查的2000例孕中期孕妇,均接受超声检查和NIPT筛查。以羊水穿刺或引产后高通量测序结果为金标准,四格表法分析孕中期超声联合NIPT在染色体异常胎儿检出中的应用价值。结果：2000例孕中期孕妇中,超声检查共检出软指标异常37例,结构指标异常30例。NIPT筛查检出高风险孕妇17例,其中21-三体综合征11例、18-三体综合征6例。超声软指标和结构指标联合NIPT诊断胎儿染色体异常的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、漏诊率、误诊率、准确率分别为95.00%、99.95%、95.00%、99.95%、5.00%、0.05%、99.90%。结论：联合孕中期超声和NIPT可提高检出高风险染色体异常胎儿的灵敏度,降低漏诊率,对于早发现染色体异常胎儿具有重要价值,进而提高生育质量。