水体中诺瓦克病毒RT-PCR检测研究

诺瓦克病毒是公认的食源性或水源性非细菌性胃肠炎的主要致病因子之一。建立诺瓦克病毒的RT-PCR检测方法,验证其特异性及灵敏度,并在实验室人工污染水样,进行模拟水样的检测,验证RT-PCR检测方法的实用性。所用引物为RNA多聚酶区的JV12/JV13,多次反复实验,均可产生327bp预期大小的特异条带,并通过杂交进一步证实了其特异性和正确性;在临床粪样中,可达到的最高检测限为50pg/mL。在共42份模拟样品的检测中,经过播毒、富集和浓缩,38份均可检出诺瓦克病毒。其中4份池塘水未检出。在模拟水样中的检测灵敏度为200pg/mL。实验中所建立的试验条件和体系可用于实际水样中诺瓦克病毒的筛选,对水质控制起到了很好的监控作用。     

单管半套式RT-PCR法检测贝类中轮状病毒的研究

轮状病毒(Rotavirus)是一种以贝类为载体的重要食源性病毒,目前来说,RT_PCR是贝类中轮状病毒最有效的检测方法,但通常由于病毒含量较低以及贝类中存在大量的PCR抑制物,致使将其运用于实际样本的检测时灵敏度仍较低。在实验室模拟自然环境,以人工播毒的方式使贝类富集轮状病毒,运用单管半套式RT_PCR法进行检测,并将单管半套式RT_PCR与ELISA、RT_PCR的检测灵敏度做了比较,表明单管半套式RT_PCR比ELISA的灵敏度高10 0 0倍,是传统RT_PCR的10倍,有时甚至10 0倍。另外,单管半套式RT_PCR法降低了实验过程中的内源性和外源性污染,使检测所需时间从6h缩短至4 5h ,大大改进和完善了食源性病毒检测方法。并同时以整只贝和仅以贝的消化道为样检测表明,以消化道为样时的病毒检出率和检测灵敏度较高。     

枸骨益生菌的筛选及其抑菌作用

采用涂布平板法分离药用植物枸骨可培养内生细菌,采用对峙法和发酵滤液培养法筛选对植物病原菌具高抑制作用的菌株,通过镜检和显微摄影观察处理组菌丝的变化,对16SrDNA PCR产物进行测序和同源性分析菌株的系统发育关系,通过形态、生理生化特征和16SrDNA序列比对确定菌株的分类地位.从枸骨健康植株的根、茎、叶及果实中分离得到85株内生细菌,筛选出对烟草赤星病菌、稻瘟病菌、棉花枯萎病菌等有较强抑菌作用的10株菌,初步鉴定为4属7种.其中,抑菌效果最强的GG78(60.3％)、GG31 (48.1％)、GG3(61.0％)分别属于阴沟肠杆菌、路德维希肠杆菌和蜡样芽孢杆菌.受抑制病原菌菌丝均发生畸形、扭曲,局部膨大形成原生质浓缩球、菌丝基部出现毛发状细分支等现象,可能与内生菌分泌到胞外具有一定抑菌或杀菌作用的代谢物质如抗生素、水解酶类、生物碱等有关.     

小叶锦鸡儿人工固沙区植被恢复生态过程的研究

主要研究了流动沙兵采用草方格固沙结合播种小叶锦鸡儿后,上锦鸡儿人工群落形成和发展过程,尤其对群落中物种侵入过程和群落组织结构在３５年间的变化情况做了详细分析。结果表明,人工小叶锦鸡儿群落不同发育阶段植物丰富度发生降有大的变化,从５种增加到２３种;在生活型组成结构上,一年生植物占约对优势,但所占比例随着时间的变化有８逐渐减少的趋势,地面芽植物和地下芽植物的种类数 和个体数所占比例均逐渐增加;物种多样     

启动子优化提高重组大肠杆菌PHA产量

聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类由微生物合成的高分子聚酯的统称,具有生物可降解性、生物可再生性和良好的生物相容性,应用前景广阔。PHA具有类似塑料的材料学性能,倍受到科学界和工业界的关注,但是生产成本较高等原因极大地限制了其大规模应用。本研究通过筛选优化在微氧条件下能够高效调控基因表达的启动子,能有效提高生产菌株在微氧条件下积累PHA的能力,减少生产能耗,降低成本。首先,在大肠杆菌基因表达库中筛选出5个在微氧条件下高效调控基因表达的启动子,与编码红色荧光蛋白的RFP报告基因相连,通过酶标仪检测RFP的荧光信号值,对5个不同的微氧启动子的表达强度进行评估,比较得到其中最高效的启动子Pslp。为进一步提高生产PHA的效率,将2个Pslp序列采用串联的方式构建得到一个新启动子P2slp,利用其调控PHA代谢合成途径中3个关键基因phbC、phbA和phbB的表达。通过发酵扩大生产,在启动子P2slp的调控下,重组大肠杆菌的细胞干重由22 g/L提高至29 g/L,PHA的产量由49.1%提高至81.3%。本研究通过筛选优化启动子提高了重组大肠杆菌生产PHA的产量,为PHA的产业化应用提供了一种有效的提高PHA产量的方法,具有实际价值。     

一种葡萄球菌分离培养基的研制和应用

研制一种葡萄球菌分离用培养基对培养检查葡萄球菌具有选择性和一定的鉴别能力。在分离培养的同时,可利用同一平板的生长菌落观察耐盐性、色素产生、甘露醇发酵和明胶液化的试验结果。该培养基配制简单,成本低廉,可替代血液琼脂平板供临床、商检和卫生检验工作中葡萄球菌培养检查。     

酶法合成羟头孢霉素

本文报道具有青霉素酰化酶的大肠杆菌(E. coli PN-66)细胞酶促合成羟头孢霉素的研究结果。酶反应的最适温度为20℃,最适pH为6．0。羟头孢霉素的合成率随着母核7一氨基脱乙酰氧基头孢烷酸的浓度的增加而提高,随侧链对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐在与7一氨基脱乙酰氧基头孢烷酸的配比中的增加而提高。苯乙酸和苯氧乙酸对羟头孢霉素的合成有着强烈的抑制作用。在合适的条件下,羟头孢霉素的合成率可达90％以上。     

秦岭种子植物数据库信息系统的结构和功能简介

秦岭种子植物数据库已经建成,本文简介了建库目标,系统结构和功能,本库对秦岭种子植物１６９科１０１０属３０２８种按基本信息,名称,分布和用途等设计了方便的检索查询系统,对它在秦岭植物资源开发,利用和保护以及生物多样性,区系研究等方面的应用也做了讨论。     

观察原生质运动的理想材料──葱

在过去观察原生质运动的实验中,常用水生植物黑藻和鸭路草作实验材料。但这两种材料取材都比较困难,为了满足教学需要,我们选用了一些其他植物材料进行试验,结果证明,十字花科的大白菜叶中脉的表皮、百合科葱的鳞茎内表皮等观察原生质运动是较为理想的材料。尤其以葱鳞茎的内表皮观察效果更好。取大葱鳞茎内表皮,制成临时装片,在显微镜下观察,可清晰地看到细胞内的原生质做旋转式运动,速度较快。无须机械刺激及任何光照射处理,效果很明显。另外,在观察原生质运动的同时,还能观察到细胞壁上的纹孔,效果也较好。所以取这两种材料…     

观察细胞结构的好材料──菜椒

在最近的一次教学实践中,我发现一种观察植物细胞结构的好材料,值得向大家推荐,它不仅经济,制作简单,而且效果非常好,尤其适合在光学显微镜下观察。它就是我们日常生活中食用的莱椒,具体做法是：选取新鲜的红菜椒果实,取下果皮,再切成约一平方厘米见方的小块。按徒手切片的制作方法,沿与果皮表面平行方向切取薄片,只选近表皮的切片做成临时装片就可以了。在显微镜下观察,不仅可以很容易看到大量的橙红色的有色体、无色的白色体和原生质运动,调节光强度,在60X或45X物镜下观察,还可清楚看到细胞壁上连接相邻细胞的纹孔。既清…