一种高效表达碱性蛋白酶的新型启动子的筛选及研究

碱性蛋白酶广泛的应用价值及市场供不应求的现状,旨在构建碱性蛋白酶高效表达系统。通过蛋白电泳和质谱检测的方法,由地衣芽孢杆菌中筛选获得一种新型启动子p Chi,以两种已知强组成型启动子p Shuttle-09和pyxi E为对照,研究其对克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶与地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达活性。成功构建了6种重组表达载体及重组菌,结果表明,p Chi的启动强度是p Shuttle-09的1.25倍,pyxi E的2倍,从而为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源基因的表达奠定基础。     

蛋白质组学样品消化条件的优化

随着质谱的飞速发展,基于质谱的"鸟枪法"技术广泛的应用于大规模的蛋白质组学分析。化学反应保护效率过低或者酶切效率过低则会降低鉴定效率,并且在现有的计算方式下会丢失很多肽段信息。因此,蛋白质样品的前处理在现有的蛋白质组学研究中发挥重要作用。本研究对蛋白质的烷基化试剂的反应条件进行优化以提高烷基化效率,同时优化酶解Buffer提高酶切效率以及增加酶量和引入多种酶以提高酶切效率等,最终确定了蛋白质前处理的最优条件,最终使用1μg样品在一次质谱分析鉴定到(2 425±7)个蛋白质,较未优化的方法提高了31%。优化后的蛋白质前处理方法可有效提高现有蛋白质组学的研究效率,可进一步应用于蛋白质的定量及动态分析研究。     

番茄红素对血管内皮细胞氧化应激损伤的作用及机制研究

目的:观察番茄红素(lycopene,LYC)对于血管内皮细胞功能的作用,探讨其作用机制。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVECs)处理实验分组:对照组,H2O2组,H2O2+LYC组(1、2、4、8μmolL-1)。MTT法检测HUVECs存活率;免疫印迹法(Western blot)检测p38MAPK蛋白磷酸化水平、抗凋亡蛋白B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)及线粒体凋亡通路相关蛋白bax的表达;细胞黏附能力测定和伤口愈合实验检测HUVECs粘附率和迁移率;TUNEL法检测HUVECs凋亡率;ELASA法测定HUVECs内活性氧(ROS),超氧化物歧化酶(SOD),乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量和caspase-3的活性。结果:H2O2损伤后HUVECs存活率显著降低(P0.01),凋亡率显著增加(P0.01),黏附和迁移能力显著降低(P0.01),bax和p-p38MAPK的表达上调,bcl-2的表达下调,并且ROS、LDH的释放和caspase-3的活性增加(P0.01),SOD的释放减少。而LYC的预处理可以明显逆转H2O2以上作用。结论:H2O2氧化应激损伤中,LYC保护内皮细胞可能与其抗过氧化损伤细胞凋亡,抑制异常的p38MAPK信号通路有关。     

新型喜树碱类抗癌药物的研究进展

喜树碱是1966年由喜树中分离而来的一种五环结构的生物碱,早期对其抗肿瘤活性的发现更是引发了科学家们对此类化合物极大的研究兴趣,现在已经证实喜树碱类化合物主要是通过抑制在DNA代谢过程中发挥重要作用的I型拓扑异构酶。但其自身因水溶性差、毒副作用强,在临床应用上易出现不良反应。半个世纪以来,国内外研究者在对其作用机制及构效关系的研究基础上,开发出了数以百计的喜树碱类衍生物,很多已经进入临床或临床前研究。但目前仅有两种喜树碱类的化合物拓扑替康和依立替康被美国FDA批准应用于临床上肿瘤的治疗。本文就已上市的喜树碱类化合物以及喜树碱类抗肿瘤药物开发的挑战进行了综述。     

辽宁浑河源自然保护区寄蝇科昆虫区系资源

调查我国辽宁东北部清原浑河源自然保护区双翅目寄蝇科昆虫资源。网捕法采集寄蝇标本2553件,形态分类和动物地理研究法鉴定寄蝇4亚科23族83属158种,分别占中国已知族、属和种类的23.54%,29.47%和12.62%;给出该森林生态系统的寄蝇优势种15种和每种成虫发生期。该地区寄蝇区系主要组成有61古北界种,86古北、东洋两界共有种,合计147种,占本地区总种数93.04%。发现4中国新纪录种:乌苏等鬃寄蝇Peribaea ussuriensis(Mesnil,1963),弯叶芙寄蝇Phryno tenuiforceps(Tachi,2013),花截尾寄蝇Nemorilla floralis(Meigen,1824),巨角锥腹寄蝇Smidtia magnicornis Mesnil,1967,给出其主要鉴别特征和外形照片;辽宁新分布纪录28种。     

姜产品乙醇提取物抗氧化及抑菌活性研究

对鲜姜、干姜、姜糖的乙醇提取物进行了抗氧化及抑菌活性研究。通过DPPH、ABTS自由基清除及还原力的测定,比较3者的抗氧化活性;通过体外抗菌实验,比较3者对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌及枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明,3种姜产品乙醇提取物均具有一定的抗氧化活性,清除能力与浓度呈较明显的量效关系;3种姜产品对4种常见菌表现出不同的抑制作用,其抑制作用由强到弱依次为干姜、鲜姜、姜糖。本实验结果为进一步研究姜产品的抗菌药效和开发安全的食品添加剂提供了科学依据。     

三种不同漱口液对牙龈炎患者牙周指数的影响

目的观察三种不同漱口液对牙龈炎患者牙周指数的影响。方法选取温州市人民医院2013年至2014年收治的单纯性牙龈炎患者60例,随机分成3组,分别使用0.3%双氧水漱口液、0.1%西吡氯铵漱口液及复方氯己定漱口液漱口,检测并记录使用漱口液后2周的牙周指数,观察临床疗效。结果治疗后各组PLI及BI数值均降低,复方氯己定组、西吡氯铵组与双氧水组相比,PLI、BI数值明显偏低(P0.01),但复方氯己定组与西吡氯铵组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论三种漱口液均可用作治疗牙龈炎的辅助药物,临床上宜针对性选用避免导致口腔菌群失调。     

红树植物内生真菌Penicillium sp.中两个甾体化合物的研究

从红树植物内生真菌Penicillium sp.的发酵液中分离纯化了两个甾体类化合物,通过各种波谱实验(1D-NMR,2D-NMR,ESI-MS)确定为:麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(1)和麦角甾-5,7,22-三烯-3-醇(2),1对于3α-HSD脱氢酶在250μm浓度下有较弱的活性。     

红树植物内生真菌Penicillium sp.中新木质素的分离及结构鉴定

应用各种层析手段,从红树植物内生真菌的发酵液中分离纯化了一个新的木质素类化合物,结合多种波谱方法确定其结构为4,4′-二(1-丙烯酸甲酯)-3′-甲氧基-二苯醚(1)。     

RP-HPLC分离制备桔梗皂苷

在对桔梗总皂苷粗分的基础上,利用制备高效液相色谱分离制备桔梗单体皂苷,共分离得到四个化合物,经波谱法分别鉴定为platycodinD（1）,platycoside E（2）,deapio-platycoside E（3）,未知化合物（4,鉴定中）,经HPLC分析,纯度均大于98％．对比以前的分离手段,该方法分离制备桔梗单体皂苷工艺简单,效率高,为在桔梗中寻找新的天然活性物质提供了新方法。