沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测*

根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带;最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol/L、40nmol/L、80nmol/L,Mg²⁺浓度2.4mmol/L,dNTP浓度200μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U,退火温度55.0℃~57.4℃之间;在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏     

用乳胶凝集滤膜小瓶法检查轮状病毒抗原

<正>一、引言 用乳胶凝集反应法(LA)检测冬季婴儿腹泻粪便中的轮状病毒,敏感度高、简便,可广泛使用。 以前用LA小盒,须预先在粪便材料中加入小盒附带的缓冲液,低速离心,用其上清液进行反应。现在用Orion公司研制的新滤膜瓶,不需离心分离,仅对粪便检样进行短时间处理即可。现将轮状病毒滤膜小瓶法与过去的轮状病毒离心分离法,以及标准的电镜法(EM)对患儿粪便中轮状病毒的检查结果作以比较。     

肝移植术后肝脏淋巴回流淤滞的影像学特征

目的:分析肝移植术后病人肝脏淋巴回流淤滞(intrahepatic lymphatic stasis,IHLS)的计算机断层扫描(Computed Tomography,CT)及磁共振(Magnetic Resonance Imaging,MRI)影像学特征。方法:回顾性收集我院自2004~2012年肝移植术后病人66例,分析其术后CT及MRI图像,对IHLS的阳性次数、持续时间及其影像学特征进行观察分析。结果:66病人中IHLS病人22例。肝移植术后IHLS的直接征象为血管周围项圈征(perivacular collar,PC),CT和MRI可清晰显示且可根据PC的部位分型。结论:肝移植术后IHLS的CT及MRI具有特定的影像学特征,对其识别具有一定的临床意义。     

原发性肾病综合征患儿尿蛋白转阴时间的影响因素分析

目的:探讨儿童原发性肾病综合征(primarynephrotic syndrome,PNS)经激素治疗后尿蛋白转阴时间的影响因素。方法:回顾性分析68例初发PNS患儿的临床资料,通过激素治疗后,按照尿蛋白转阴时间进行分组,对患儿特征、化验指标进行单因素分析和多因素非条件Logistic回归分析。结果:单因素分析显示水肿至口服激素时间、水肿程度、父母认知程度、有无合并感染、入院时血浆IgM水平、白蛋白水平、胶体渗透压等指标在不同预后组间有显著性差异(P0.05)。多因素分析显示水肿至口服激素时间长、父母认知程度差、血浆胶体渗透压低可视为尿蛋白转阴时间大于1周的危险因素。结论:水肿至口服激素时间长、父母认知程度差、血浆胶体渗透压低为PNS患儿尿蛋白转阴时间长于1周的危险因素,与患儿的不良预后相关,临床应予以高度重视。     

链霉菌属菌株AS4.693和AS4.702的分类学研究

链霉菌属“Setae”种群原为北里孢菌属Kitasatosporia (Omura,1982)。1992年,Wellington根据16S rRNA序列分析结果将其并入链霉菌属,并建立“Setae”种群。通过对保藏的链霉菌AS 4.693、AS 4.702进行的形态学、细胞化学、分子遗传分类研究结果表明,它们与链霉菌属“Setae”种群中的典型种——西唐链霉菌Streptomyces setae(JCM3304’)具有相似性。它们的rDNA相似性高达100％,证明它们应归属于同一种群。AS.4.693定名为西唐链霉菌不规则新亚种Streptomyces setae subsp.irregularis nov.,AS 4.702定名为西唐链霉菌波曲弗氏新亚种Streptomyces setae subsp.flexuofradiae nov.。     

幽门螺杆菌感染胃组织基因芯片生物信息学分析

为探讨幽门螺杆菌感染胃组织后差异基因变化,深入分析参与疾病发生、发展的分子机制。从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库下载幽门螺杆菌感染胃组织基因芯片数据(GSE5081),根据胃粘膜组织是否受损分组,分别比较幽门螺杆菌感染者与阴性对照组,获得差异基因并进行功能分析包括GO分析、信号通路分析,基因相互作用及基因共表达,得到重要核心基因,并通过实时定量PCR方法进行验证。结果表明:得到参与幽门螺杆菌感染后上调的44个主要基因,主要涉及的GO分析及信号通路包括免疫反应、炎症反应、抗原提呈、细胞因子通路、因子受体关联,细胞粘附分子等。研究发现核心基因CXCR4,CCL20,JAK3,TNFAIP2,PLEK,HLA-DMA,PTPRC,CXCL13,BCL2A1,并通过实时定量PCR的方法进行部分验证,CXCR4,CXCL5,CXCL2在幽门螺杆菌感染后的胃黏膜组织表达高于对照组。幽门螺杆菌感染后胃粘膜组织引起免疫反应,炎症反应,抗原提呈,因子受体关联,细胞粘附分子通路的激活。同时发现一些主要的趋化因子相关基因CXCR4,CXCL5,CXCL2,CCL20,CXCL1等,涉及增殖,炎症,免疫,凋亡基因JAK3,TNFAIP2,PLEK,HLA-DMA,PTPRC,BCL2A1等的表达上调,并实时定量PCR验证部分相关基因的表达。这些结果为从分子网络机制层面上认识幽门螺杆菌感染提供分析思路及基础。     

针对在世界蔓延的艾滋病毒具有新作用机理的新药登场

在由病毒感染引起的疾病中,情况特别严重并且仍在继续的,是艾滋病。 全世界的艾滋病患者已超过3000万人,抗艾滋病病毒药约占抗病毒药市场的一半。     

黄海沉积物柱状样中有孔虫古DNA的提取和PCR扩增的方法学初探

海洋沉积物柱状样有孔虫古DNA是近年来国际新兴的研究技术,对于解释海洋全球变化可以获取到传统形态学检获不到的遗传信息,并对其进行比较和补充。目前国际上有孔虫古DNA的研究主要开展于深海和极地等有利于DNA保存的环境,但对于近海陆架海域尚无相关有效的技术研究。为了探索适合提取和扩增陆架浅海环境沉积物柱状样中的有孔虫古DNA的方法,本实验以采自山东半岛附近的黄海沉积物柱状样为研究对象,通过改进DNA提取过程的涡旋震荡时间和洗脱液体积、比较不同的PCR扩增条件和引物对,对陆架浅海地区沉积物柱状样中有孔虫古DNA提取和PCR扩增的方法进行了探索。借助ImageJ软件对PCR产物的凝胶电泳图像进行了定量分析与比较。研究结果显示,延长涡旋震荡时间和减少洗脱液体积可以提高对海洋沉积物环境总古DNA的提取效能,使用引物对s14F0和s15以及优化后的PCR条件能成功扩增陆架浅海环境沉积物中的有孔虫古DNA。本文探索了适用于陆架浅海环境沉积物柱状样的有孔虫古DNA的研究技术,可为古海洋和古环境研究提供新的研究思路。     

bFGF/BMP/ 胶原膜加速颌骨骨折愈合的大体及X 线观察

目的:了解胶原膜作为生长因子缓释材料治疗颌骨骨折的应用前景。方法:将100μg的rhBMP-2用1ml的bFGF溶液完全溶解;用移液器移出40μl的该溶液,滴加到面积为0.5cm×1cm的胶原膜组织块中,冻干后制成生长因子缓释系统;在12只新西兰大白兔两侧制成人工下颌骨骨折模型,左侧置放bFGF/BMP/胶原膜;右侧均为空白对照;术后2、4、12周行临床大体观察及X线片观察。结果:实验组骨折愈合速度明显快于对照组。术后2周,X线结果显示bFGF/BMP/胶原膜组骨折断端边缘模糊。对照组骨折线明显。术后4周,X线结果显示bFGF/BMP/胶原膜骨折线基本不可见,骨折对位良好,断端边缘基本消失,骨折无错位。对照组骨折下缘可见纤维性骨痂形成,骨折线模糊。术后12周,各组X线结果无差异,骨折部位接近正常骨组织。结论:bFGF/BMP/胶原膜能加速骨折愈合,提高骨折愈合效果。