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甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶 总被引:2,自引:0,他引:2
表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP)不仅可以深入揭示HRP结构与功能及其生理作用规律,而且为HRP的广泛需要提供新的来源.为了在甲醇酵母P.pastoris中成功表达,将编码HRP-C成熟肽的cDNA构建到pPIC9上,再转化到P.pastoris中,筛选到了分泌表达非糖基化HRP和高糖基化HRP(分子质量超过100 ku)两种主要产物的重组细胞株.优化表达条件,目标产物在摇瓶发酵液中高效表达,可达4~6 g/L.并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP,每毫升发酵液中酶活力约有2 U,经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm. 相似文献
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目的:克隆β2-肾上腺素能受体(β2-AR)全长基因片段.方法:根据GenBank中收录的猪β2-AR cDNA序列设计一对引物,以猪肝脏组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的基因,将其与pUC18载体体外连接,转化感受态大肠杆菌E.coil DH5α,筛选阳性克隆.结果:扩增出一条1257 bp的目的基因片段,该片段编码418个氨基酸.与CenBank中收录的猪β2-AR序列比对,其同源性为99.52%,编码的氨基酸有99.04%相同.结论:成功获得了β2-AR全长基因片段,为该基因的表达和受体筛药模型的建立奠定基础. 相似文献
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辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
无论从应用还是从理论研究角度,辣根过氧化物酶(HRP)是一种非常重要的酶.HRP基因克隆与表达将有利于更深入研究HRP的结构与功能.利用反转录PCR从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶C(HRP-C)一个cDNA,并测定其序列.结果发现,从基因推导出的氨基酸序列与Welinder报道的辣根过氧化物酶序列有90.6%的同源性.将该基因连接到表达载体pET-24b上,利用抗HRP多克隆抗体进行Westernblot,检测有少量目标产物表达.在诱导表达过程中,没有发现细菌生长受抑制或受明显的毒害 相似文献
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甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是一种在胎儿发育时期高表达的蛋白质,它又是一种穿梭蛋白质,能够将营养物质输送给胚胎细胞.相似的是,在肝癌等恶性肿瘤发展时期,肿瘤细胞也高表达AFP及其受体,它们通过AFP受体摄取AFP及其运载的物质.因此,可以将AFP与抗癌药物结合,选择性攻击肿瘤细胞.AFP与药物... 相似文献
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甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶 总被引:1,自引:0,他引:1
表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP) 不仅可以深入揭示HRP 结构与功能及其生理作用规律, 而且为HRP的广泛需要提供新的来源. 为了在甲醇酵母P. pastoris 中成功表达, 将编码HRPC成熟肽的cDNA 构建到pPIC9 上, 再转化到P. pastoris 中, 筛选到了分泌表达非糖基化HRP 和高糖基化HRP( 分子质量超过100 ku) 两种主要产物的重组细胞株. 优化表达条件, 目标产物在摇瓶发酵液中高效表达, 可达4~6 g/L. 并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP, 每毫升发酵液中酶活力约有2 U, 经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm . 相似文献
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利用四苯硼酸钠与氯化胆碱作用,生成的四苯硼酸胆碱为电活性物质。利用此电活性物质配制成四氢呋喃聚氯乙烯的溶液,将它涂积于半导体场效应管绝缘栅铂丝引线上,即制成了胆碱半导体传感器。经测定器件的性能,获得了满意的结果。 相似文献
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在自然环境中存在着大量的微生物。这些微生物种群,尤其是许多新发性病毒,会对人和动物体的健康产生重大影响,而它们大多数都是不可培养的微生物。宏基因组学(metagenomics)的研究对象主要是非培养微生物。在特定环境中,它可有效地获取微生物种群的遗传组成、群落结构及生态作用等信息。随着高通量测序技术的快速发展,宏基因组学分析方法也已经应用到病毒学领域中,出现了病毒宏基因组学(viral metagenomics)。这一技术在新病毒鉴定等方面都取得了很多重要的研究成果。该综述主要对宏基因组学的发展历史、应用前景、生物信息学分析流程,及其在病毒鉴定中的应用进行简要介绍。 相似文献
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流感传播速度快,病原变异频繁,影响范围广,对其快速反应与防范对全球来说仍然是一个严重的挑战。医疗卫生和高通量测序技术的组合产生了非常复杂可变的海量的异质异构数据集,对其实现整合挖掘分析是个重要任务。现有逐级上报方式的流感监测体系存在分析结果滞后(1~2周)的问题,与流感病毒变异和传播速度快形成尖锐矛盾。因此,实时而全面的了解其流行动态非常必要。基于以上原因,建立统一的大数据平台,整合不同来源、不同结构的监测数据和特定算法及模型,对信息加以分析利用,并对病毒的流行、发展、变异、控制和反馈进行全生命周期的监控,通过时间、地域、环境和病毒之间的关联性等综合分析,形成一个高效安全、快速稳定,且准确及时的流感地理信息图谱预测预警系统,成为提升流感中心信息管理水平的必由之路。 相似文献
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肌肽对奥尼罗非鱼生长性能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究探讨了饲料中肌肽的添加对奥尼罗非鱼生长、血清激素水平及肌肉组织抗氧化能力的影响。选取罗非鱼360尾,随机分为A、B、C、D 4个组,每组3个重复,每个重复30尾。在A、B、C、D组的饲料中分别添加0、50、100、200mg/kg剂量的肌肽。常规饲养管理,试验周期60d。结果发现:在试验期间,B、C、D组鱼体的体重和体长均大于A组,特别是试验结束时,B组鱼体的体重、体重生长率(RSGR)和相对体长生长率(RLGR)均显著大于A组(p〈0.05)。在试验全期,B、C、D组鱼体血清生长激素(GH)、类胰岛素生长因子-1(IGF-1)和三碘甲状腺原氨酸(T3)水平均高于A组,但差异不显著。在第20天,B、C组鱼体肌肉组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力显著高于A组(p〈0.05),D组过氧化氢酶(CAT)活力显著低于A组(p〈0.05);第40天,B、C、D组的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力均显著高于A组(p〈0.05)。试验结果表明:在饲料中添加适宜剂量(50mg/kg)的肌肽,能改善鱼体肌肉组织的抗氧化能力,提高血清中相关的激素水平,促进鱼体内物质代谢,对鱼体生长性能产生积极影响。 相似文献