丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK／ERK信号通路促进肝癌细胞增殖

目的研究丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b;将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞,测定感染滴度,通过RT—PCR方法在转录水平鉴定HCVE1、E2、NS3、NS5a、NSSb的表达,用Western印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达。腺病毒感染SMMC-7721细胞后,通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白。将筛选到的Ad—E1感染SMMC-7721细胞,用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响;Western印迹检测p-ERK、ERK的表达;RT—PCR检测c—Myc、cyclinD1、c—Jun、c．Fos基因的表达。结果成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的高滴度腺病毒Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b,并且通过RT—PCR方法在转录水平鉴定了目的基因的表达,Western印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蚩白的表达。通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad—E1感染组细胞较对照组增殖速度加快,细胞周期显示Ad-E1感染组细胞34．38％处于S期,明显高于Ad—GFP（27．32％）（P〈0．05）对照组;Ad-E1感染绢p-ERK蛋白表达量增高,同时与细胞增殖相关的MAPK／ERK下游基因转录水平上凋。结论体外过表达HCVE1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖,其促增殖作用可能与MAPK／ERK信号通路的活化相关。     

凝血酶对荧光标记的人单个血小板游离[Ca^2＋]和膜电位的动态影响

本文将ｆｌｕｏ－３和ｄ_ｉ－ＢＡ－Ｃ４（３）荧光标记的血小板固定于纤维蛋白原表面,以５７０型粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）动态观察了凝血酶激活的人单个血小板细胞内游离［Ｃａ~（２＋）］（钙离子浓度）和膜电位的变化。静息状态时细胞游离［Ｃａ~（２＋）］和膜电位荧光较低,波动不明显。当加入０．１Ｕ／ｍｌ凝血酶激活时,［Ｃａ~（２＋）］（细胞内游离钙离子浓度）与膜电位迅速升高,随后［Ｃａ~（２＋）］出现反复振荡,幅度达约５００荧光单位,而膜电位基本上保持峰值水平。［Ｃａ~（２＋）］_ｉ升高与膜电位变化在时间和程度上不一致。本文结果提示,凝血酶引起血小板［Ｃａ~（２＋）］振荡和膜去极化,后者不是Ｃａ~（２＋）内流引起的。     

长白山阔叶红松林细根周转的研究

系统研究了长白山阔叶红松林细根生物量、生产力、年周转率及其在净生产力分配中的作用,生物量调查结果表明,阔叶红松林活细根的生物量为5049kg.ha~(-1),死细根生物量的平均值为1883kg.ha~(-1),细根的年周转率为0.96,年生产量为4860kg.ha~(-1),约占总净初级生产力的19.40％,年死亡量为2343kg.ha~(-1),相当于阔叶红松林枯枝落叶年凋落量的60％,由此提出了森林凋落物应包括枯枝落叶和根系凋落物的论点。     

反义c—fos和c—jun抑制IL—1诱导阿片肽分泌

白细胞介素（ＩＬ－１）及阿片肽作为神经调质参与了神经细胞兴奋性毒性作用,以大鼠大脑皮层神经细胞为研究对象,探讨了ＩＬ－１、阿片肽和ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达产物之间的关系,结果表明,ＩＬ－１β能诱导大脑皮层神经细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍＲＮＡ瞬时短暂表达,１５ｍｉｎ增高,３０ｍｉｎ达高峰,ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ ２ｈ回至基线水平,ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ ８ｈ回至基线水平;联合应用ｃ－ｆｏｓ,ｃ－     

植物植酸酶及其在饲料中的应用前景

植物植酸酶不但能分解内源植酸磷 ,对外源植酸磷同样有明显的降解作用。在饲粮中添加植酸酶活性高的植物性饲料 ,可提高猪和家禽对植酸磷的利用率 ,降低粪便中磷的排泄量 ,提高生产性能。麦类籽实中具有较高的天然植酸酶活性 ,发芽能显著提高种子中植酸酶的活性 ,因而有希望通过发芽提高麦类籽实中的植酸酶活性 ,经提纯浓缩后可达到在实际生产中应用的水平 ,从而减少在饲料中添加无机磷或价格昂贵的微生物植酸酶。     

乳酸乳球菌表达系统的发展现状与前景展望

乳酸乳球菌作为全球公认安全的微生物,具有多种益生作用,常被用作基因工程宿主菌.在过去的二十年中,乳酸乳球菌作为载体在递呈病毒、细菌抗原等方面得到了广泛的应用,并且在不同领域发挥着重要作用.本文以乳链菌肽控制的表达(nisin-controlled expression,NICE)系统为例,介绍了基于乳酸乳球菌的表达系统...     

天然雌核发育银鲫卵子控制异源精核发育的受精学机制

作者对两性融合生殖鱼和雌核发育银鲫脱膜卵受精的精核发育进行了观察,并采用鱼类卵子无细胞系对以上两类卵质提取物体外诱导经Ｔｒｉｔｏｎ—Ｘ１００处理的精子及其发育进行了初步研究,结果表明在两性融合生殖型脱膜鱼卵中精核通过解凝最终形成原核,而在雌核发育的银鲫脱膜卵子中部分精核体积虽有一定程度的增加,但始终没有观察到原核的发育;在体外诱导实验中,经Ｔｒｉｔｏｎ—Ｘ１００处理的精子在两类卵质提取物中充分发育,都出现了类似体内原核的状态。该现象提示在银鲫卵质中存在有促使精核形成原核的因子,但在正常受精状态下,由于银鲫卵质促使精核核膜解体的功能的异常,使覆盖精子头部的核膜不能象在两性融合生殖受精卵子中进行崩解,精核进一步的原核发育受到抑制。另外,建立体外诱导系统的重要意义,在于它为研究雌核发育调控的分子学机制提供了一条有效途径。     

抗菌肽Lactoferricin生物学功能及其应用研究进展

概述了乳铁蛋白活性多肽(lactofericin)所具有的广谱抗菌、抗寄生虫、抗病毒、抗癌、抗氧化等多种生物学活性,讨论了lactnferricin的制备方法,并对lactnferricin作为饲料添加剂的应用前景作了初步探讨。     

人血清中膦酸单酯酶性质的研究

本文采用4-甲基伞形酮苯基磷酸酯为底物检测人血清中酶活性情况,发现在人血清中存在一种能够选择性水解苯基膦酸单酯键的酶活性成份。该酶具有最适pH8.8—9.1,在60℃(反应30分钟)条件下具有最大活性。Km=1.72×10~(-4)mol/L,Na_3PO_4、EDTA和半胱氨酸可抑制其活性,而CuSO_4、腺苷、胸苷、NaN_3、E600、PCMB、DFP和毒扁豆碱等对其活性没有影响。Mg~(++)可激活酶活性,并能解除EDTA的抑制作用。 此酶不能水解5′-NPDase和APase的底物,有关性质也与5′-NPDase和APasc有区别。本文将此酶暂定名为“膦酸单酯酶”。