基于RAPD改进的分子标记技术

随机扩增多态DNA(RAPD)由于经济、快速简便、不需预知模板DNA信息、对模板DNA要求较低,因此被大量应用于昆虫学的研究中,如昆虫的鉴定分类、构建连锁图谱、系统发育分析等。但RAPD也有许多缺点,主要是一种显性标记而不能区分杂合体和纯合体,结果的重复性易受多因素的影响等。针对这些缺点,人们通过将RAPD与其它检测技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳、单链构象多态(SSCP)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)等相结合,提高了其分析的灵敏度和稳定性;再者,还将RAPD标记发展成为其它更稳定的或共显性的标记,如SCAR、微卫星等,为RAPD进一步的应用开阔了前景。文章对这些检测和转化的改进技术进行综述。     

nrDNA ITS和cpDNA rpl16基因测序法对六种鼠尾草的检测

为从鼠尾草属植物中鉴别丹参品种,采用基因测序方法,用核糖体核酸内转录间隔区基因(nrDNA ITS),编码核蛋白体大亚基多肽L16的基因(rpl16)及叶绿体DNA上包含trnL以及trnL和trnF间隔区的区域基因(trnL-trnF)的序列,检测六种鼠尾草属新鲜植物.由于nrDNA ITS和rpl16突变率较高,可以做为6种鼠尾草的基源鉴定标记,依此设计了两对特异引物,从6种鼠尾草中鉴定出丹参(Salvia miltiorrhiza)和云南鼠尾草(S.yunnanensis).但trnL-trnF突变率太低,未能用于鉴别.商品干燥中药材因加工和储藏的方式致使DNA降解严重,基因测序法难于应用.     

离子辐照玉米花粉诱发DNA损伤的RAPD分析

利用 30Ｋｅｖ和 8种剂量的Ｎ+ 辐照玉米不同品种的花粉 ,通过ＲＡＰＤ(ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＤＮＡ)技术利用 10 4个 10碱基随机引物分析了花粉基因组ＤＮＡ的损伤效应 ,结果表明 :经Ｎ+ 辐照的花粉ＤＮＡ在 10 4个引物的扩增下 ,共产生了 4 70条带 ,表明了明显的多态性变化。在供试剂量下共发现 51条多态性带 ,其中 3× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、6× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、9× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、12× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、15× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 和 18× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 ＤＮＡ多态性的频率分别为 4 .3%、8.5%、1…     

热预处理菠菜叶绿体的能量转换特征

经热预处理（湿度为２５－４５℃,部分实验为２０－３６℃,时间为５－１０min)的菠菜（Ｓpinacia oleracea L.)叶绿体。严重影响其能量转换的各步反应。（１）循环光合磷酸化速率随处理温度而下降。（２）类囊体膜上腺三磷酶失活。（３）光照诱导叶绿体的质子吸收减小;叶绿体的９－氨基吖啶（９－ＡＡ）荧光猝灭减弱,但加二环己基磷二亚胺（ＤＣ－ＣＤ）可以部分恢复９－ＡＡ荧光猝死。（４）叶绿体的延迟发光和△Ａ５１５nm电色效应均出现明显变化。（５）免疫印迹反应结果表明,经４５℃预处理叶绿体的膜上腺三磷酶出现解离,其α亚单位的蛋白量明显减少。（６）预处理温度超过３３℃,叶绿体光系统Ⅰ介导的氧吸收速率也下降,在反应介质中加芥子碱可以部分恢复其氧吸收能力,就这些结果与膜透性变化、耦联因子复合物解离和自由基积累的关系进行了讨论。     

显示AgNOR的改良染色效应在实验动物肿瘤中的应用

本文报道的ＡｇＮＯＲ组化反应，是我们经过反复实验，得新建立的染色逍度，染色时间和温度的系列程序，其结果表明不所显示ＡｇＮＯＲ成分的对比清晰度较强，而适用于实验动物肿瘤组织的形态学观察，图象分析系统的定量研究和诊断的价值。     

浙西奥陶系三分贝科腕足动物化石的新材料

自1978年以来,笔者从浙江江山奥陶系黄泥岗组又搜集了一批三分贝科腕足动物化石,化石全部保存在硅质结核中,大多呈内模、外模状态,往往腹瓣与背瓣分散保存,完整的内核化石极为少见。分散保存的标本中,腹瓣与背瓣很难确定它们是否同一属种。完整的内核化石又很难看到假基面的情况,这就给研究工作带来一定的困难。鉴于上述情况,尚有一批标本未作研究。本文仅描述了6枚保存比较好的具有腹瓣内模的标本,它们分属2亚科,5属,其中2新属,全部为新种,名列于下:     

一种具有立体选择性新酯酶的菌种筛选和基因克隆

从土样分离到一株产生具有立体选择性酯水解酶的恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida NH33)。构建P.putida NH33的基因组文库,并在E.coli中进行酯酶活性筛选,得到一个含有4.7kb插入片段的阳性克隆。对这个克隆的DNA片段进行序列分析,表明它含有一个1142个碱基的开放阅读框,为编码381个氨基酸的酯酶。推测的酯酶氨基酸序列与其它丝氨酸酯水解酶具有共同的保守基序GXSXG。把该蛋白在E.coli BL21(DE3)中进行表达,并用金属亲和层析纯化至单一条带。利用纯化的酶水解2-芳基丙酸乙酯制备2-芳基丙酸的S型异构体,产物的光学纯度ee_p>99%,说明此酶可8用于手性药物的合成。该酯酶是一个新酶,其基因序列已递交GenBank,登记号为AY896293。     

微波处理对绿豆象的杀虫效果及对红小豆发芽率的影响

通过设置不同时间和功率的微波对裸露绿豆象Callosobruchus chinensis (L.)成虫、与红小豆混合的成虫、绿豆内幼虫及卵进行处理,以研究微波对绿豆象的杀虫作用及对绿豆象成虫产卵量、幼虫羽化率及卵孵化率等生物学特性的影响。试验结果表明：微波处理裸成虫的死亡率随处理时间及功率增加而升高。成虫在中高火和高火分别处理60 s和50 s以上时间时死亡率过半,为51.21%～99.92%。处理与红小豆混合的成虫死亡率随功率和时间变化趋势同相同处理的裸虫,但相同条件下与红小豆混合的成虫死亡率明显高于相同处理的裸虫。低火至中低火处理60 s、解冻50 s及中火至高火40 s以上时间时成虫死亡都过半,为55.75%～100%,而中火处理70 s、中高火至高火60～70 s可使成虫全部死亡。微波处理具一定后续效应,处理的成虫虽没立刻死亡但随后死亡率仍比对照高。成虫高火处理50 s后的第3天校正死亡率可达87.74%。微波处理还可降低绿豆象成虫产卵量、幼虫羽化率、卵孵化率及红小豆发芽率。成虫、卵和豆内幼虫对微波敏感性依次增高。红小豆在中低火处理60 s、解冻50 s、中火40 s、中高火至高火30 s以上时间时发芽率都低于一半,为0.21%～48.33%。微波对绿豆象杀虫效果显著,但使用时需考虑微波仪器、处理功率和时间、产品用途及含水量等诸多因素的影响并进行优化试验以取得最佳效果。     

胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究

为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能,通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列,序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ－ＮⅠ的绿色荧光蛋白的上游,在ＣＭＶ启动子控制下表达．通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明ＧＤＮＦｃＤＮＡ能在真核细胞ＨｅＬａ中很好表达．采用裸ＤＮＡ转染方法研究ＧＤＮＦ对损伤的坐骨神经的修复作用,在雏鸡出生后３ｈ切断其右侧坐骨神经,将ｐＥＧＦＰ－ＧＤＮＦ与Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内,５ｄ后追补一次．２０ｄ后进行实验检测,观察到ＧＤＮＦｃＤＮＡ的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内［Ｌ４－Ｌ６］运动神经元的大量死亡,并显著促进了切断坐骨神经的再生．