粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白的增效作用

采用时间 剂量 死亡率模型 ,分析了粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)颗粒体病毒重组增效蛋白P96对棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)核型多角体病毒 (HaNPV)感染棉铃虫幼虫的增效作用。结果显示 :感染后 11d ,HaNPV P96组的LC50 值为 3.4 7× 10 3 多角体 /mL ,比HaNPV组 ( 3.89× 10 4 多角体 /mL)降低了 91.0 8% ;在 1.6× 10 4 ～ 1.6× 10 6多角体 /mL浓度范围内 ,HaNPV P96组的LT50 值较HaNPV组缩短 0 .3～ 1.8d。P96显著提高了HaNPV对棉铃虫幼虫的毒力     

油桐尺蠖核型多角体病毒结构多肽的分析

本文采用不连续系统的垂直板SDS—PAGE对油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressaria Guenee Nuclear Polyhedrosis Virus简称BsNPV)的多角体蛋白、病毒粒子的结构多肽进行了分析。结果表明,经EDTA和热处理的多角体蛋白仅有一条主带,其分子量为31×10~3±1000d;病毒粒子至少有23种结构多肽,其分子量的范围在13—107×10~3d之间。用PAS染色测定多角体蛋白、病毒粒子中的糖蛋白,结果呈阴性反应。     

一种简便快速提取和透析昆虫杆状病毒DNA的方法

经几次蔗糖梯度离心纯化的多角体病毒或颗粒体病毒,在0.05MNa_2CO_3-0.01M EDTA-0.17M NaCl(pHl0.9)的碱解液中碱解之后,直接用苯酚抽提,乙醇沉淀DNA,DNA在照有透析膜的Enpendorf离心管内以TE缓冲液透析,这样提取的DNA用凝胶电胶检查仅为单一DNA带,其2600D/2800D的比值为1.82。     

棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.6kb片段的表达

以棉铃虫颗粒体病毒(Helicoverpa armigera granulosis virus,简称HaGV)基因组的DNA为模板设计引物,PCR扩增病毒增效蛋白(Enhanicn)基因,然后经BamHI/Pst I双酶切消化,得到近乎全长的约2.6kb的增效蛋白基因片段,再与pQE32质粒连接,构建了重组表达载体pQE2/En,转化大肠杆菌M15(pREP4),在IPTG诱导下表达出分子量约为102kD的融合蛋白并命名为P102,纯化的P102包涵体显示了明显的增效活性,在感染后168h时统计可提高HaNPV对棉铃虫幼虫的感染死亡率6.25%～27.09%,缩短LT5012.3h以上;在感染后72h时统计可提高Bt对棉铃虫幼虫的感染死亡率28.18%,缩短LT5o12.33h.     

替代宿主增殖松毛虫质型多角体病毒的比较研究

银纹夜蛾幼虫(Argyrogramma agnata)对松毛虫CPV(DpCPV)十分敏感,本文对两种不同的宿主增殖松毛虫CPV作了比较,电镜证实用替代宿主增殖的DpCPV与原毒株多角体(CPB)和病毒粒子的形态完全一致。3%PAGE分析二者的RNA图谱基本一致,有大小相同的2.98×10     

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp 19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/Hind Ⅲ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中.用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origami(DE3)pLysS,在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-VP19以可溶性的形式得到表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测显示其分子量与预期的大小相符合.目的蛋白经Ni2+柱纯化并定量后分别直接注射鳌虾和包被饲料投喂鳌虾.实验结果表明注射Trx-VP19可以提高鳌虾个体抗WSSV感染力的作用.     

重组hIL—12病毒在Sf9细胞传代中遗传稳定性的研究

将含重组白细胞介素12(hIL—12)的杆状病毒(Ac—hIL12)经空斑纯化后,在草地贪夜蛾Sf9细胞中进行连续无稀释传代到P55代,收集被P15、P25、P35、P45、P55代重组病毒感染的细胞,抽提胞内病毒(ICV)DNA。根据重组病毒构建的原理,在P35cDNA和P40 cDNA的3′末段设计一对引物进行PCR,扩增出了包括P35cDNA、Polyhedrin启动子、P10启动子和P40 cDNA序列在内的全长约2．0kb片段,克隆至T Vector进行序列测定后发现,在第PmP25和P35代所扩增出的序列没有发生任何突变。但在P45代,P35 cDNA中就有3个碱基发生了点突变(461T→C,517A→G以及630C→T),Polyhedrin启动子的 1位后插入了一个碱基T,P40 cDNA与P10启动子区(230bp)没有变化;而第P55代除了以上碱基突变以外,P10启动子区—168位的G替换突变为T,—136与—135位之间插入一个碱基T,以及—122位缺失一个碱基T。以上结果表明杆状病毒在体外细胞连续传代过程中可导致外源基因本身的突变。     

卵磷脂促进小菜蛾颗粒体病毒感染的研究

采用有机溶剂从鸡蛋中提取卵磷脂,与小菜蛾颗粒体病毒混合添食感染2—3龄小菜蛾幼虫,所得数据经统计学方法处理,得到三组死亡率与时间的回归直线方程为y=18.1x-59.8(GV对照)、y=27.23x-99.85(GV+30mg卵磷脂/ml)、y=13.6x-18(GV+70mg卵磷脂/ml)。GV+70mg卵磷脂/ml与GV对照组比较,感染性提高了17％,LT_(50)提前了1.066天。结果表明,卵磷脂对小菜蛾颗粒体病毒感染具有促进作用。