人CNTF突变体(CNTFM)基因的克隆、表达和产物纯化及活性鉴定

采用PCR的方法对睫状神经营养因子(CNTF)基因进行改造,获得CNTF突变体基因(CNTFM) ,将CNTFM基因克隆入表达载体pBV2 2 0 ,在大肠杆菌BL 2 1(Gold)中进行了表达.目的蛋白占细胞总蛋白5 5 %左右,以包涵体形式存在,经Superdex 75凝胶过滤柱一步纯化和复性,获得纯度达90 %目的蛋白.纯化的重组CNTFM蛋白能促进培养的鸡胚背根神经节长出神经突起,能明显减轻实验小鼠的体重,表明CNTFM具有良好的体内、体外生物学活性,为开发新型高效的减肥药奠定了基础.     

绿色糖单孢菌产木聚糖酶规律及其耐碱耐热性的初步研究

采用绿色糖单孢菌为实验材料,在不同诱导产酶培养基上经过192h的振荡培养,探索其产酶时程规律．结果表明,不同的诱导底物诱导产生的木聚糖酶活性差异不显著,但诱导产纤维素酶活性差异显著．其中松木粉加棉纱培养基诱导产纤维素酶活性为0．08IU／ml,与空白对照(5．40IU／ml)相比显著下降(P≤0．05)．为了适应纸浆漂白实际应用中纤维素酶越少越好的要求,选择该培养基为最佳诱导产酶培养基．绿色糖单孢菌在上述培养基中培养156h后达到木聚糖酶产酶高峰。粗酶液酶活可达到9．03IU／ml．通过对该酶进行高温及碱性处理。实验结果表明绿色糖单孢菌分泌的木聚糖酶在pH7．0下反应表现最高活性,同时在90℃下保温3h后酶活为原来的63．55％,具有较好的耐碱耐热性．     

细胞质雄性不育辣椒育性恢复基因特异分子标记的筛选

利用集团分离分析法(Bulked segregant analysis BSA),以辣椒细胞质雄性不育系BU-12、恢复系RF-12为材料共筛选了336条RAPD引物,其中引物S418在恢复系中呈现特异性扩增,得到一条约3000bp的特异片段。回扩得到两条片段,测序表明大小为1515bp,1162bp。荧光原位杂交证实1515bp片段为恢复系特有,命名为S4181515。序列分析表明S4181515为一新发现的序列,Blastn序列比对同源性小于40％,tBlastx比对发现该序列与水稻2、4、7、10号染色体的几个BAC克隆上的序列高度同源。推测可能与其具有相似的编码功能,为进一步从分子水平研究辣椒育性恢复打下了坚实的基础。根据测序结果设计特异引物,将S4181515转化成特异PCR标记,证明能用于候选材料的初筛。     

外源ble基因在杜氏盐藻中的瞬时表达

利用电击法将带有ble基因的pSP124S转入杜氏盐藻细胞内进行瞬时表达．研究了外源基因在盐藻内的存留及表达情况,确定了合适的电击转化条件,发现利用电击法可以使大量的质粒导入盐藻细胞,质粒在细胞中逐渐降解但至少96h内可以检测得到。外源启动子能够使ble基因有效转录,转录至少可以持续72h,ble基因能够在盐藻细胞中正确翻译,可以作为盐藻遗传转化研究的筛选标记。     

转NAS基因冷季型草坪草的生长及抗旱性研究

采用盆栽法,在干旱胁迫下,测定转基因草坪草与对照株在不同水分胁迫下的根系活力、脯胺酸含量、叶绿素含量和SOD酶活性等抗旱生理指标.以期综合评价该转基因草坪草的抗旱性能和所选指标作为筛选抗旱性指标的可行性.结果表明,转基因草坪草在抗旱性能上普遍优于对照株.同时,SOD酶活性和脯胺酸含量可以作为转基因草坪草抗旱性鉴定指标;根系活力和叶绿素含量为参考指标.     

苍耳等48种植物提取物的杀虫活性

采用浸虫法测定了48种植物的丙酮提取物对小菜蛾（Plutella xylostella L．）的杀虫活性,并研究了苍耳（Xanthium sibiricum Patrin．）不同溶剂提取物对小菜蛾和棉蚜（Aphis gossypii Glover）的触杀作用以及苍耳丙酮提取物不同溶剂萃取物对小菜蛾的触杀作用。结果表明,在供试的48种植物中,500g·L^-1黄花蒿（Artemisia annua L）、泽漆（Euphorbia helioscopia L．）、夏至草[Lagopsis supina（Steph．ex Willd．）Ik．-Gal．ex Knorr．]、苍耳及律草[Humulus scandens（Lour．）Merr．]的丙酮提取物对小菜蛾的杀虫活性较强。在苍耳的不同溶剂提取物中,苍耳丙酮提取物的杀虫活性最强,乙醇和乙酸乙酯提取物的杀虫活性次之。另外,50g·L^-1苍耳丙酮提取物的氯仿萃取物对小菜蛾的杀虫活性最强,24h和48h的校正死亡率分别为88．33％和91．67％。     

细胞膜的形貌结构及其功能信息

利用原子力显微镜（atomic force microscopy,AFM）比较观察了从冬小麦（Triticum aestivum）叶肉细胞中分离的生活原生质体和失水死亡的原生质体质膜的表面特性．其结果表明,生活原生质体质膜显示极性化状态,不同的细胞及区域质膜脂质分子层的活性状态不同,质膜表面凸凹不平,具有明显的区域化结构．有的细胞质膜表面呈现规则的网格状结构,似脂质与蛋白质结合的复合体,经测定这种结构的直径为（15．8±0．09）nm,高度为（1．9±0．3）nm．通过二维和三维角度观察,在分离的生活原生质体质膜表面上分布着许多颗粒状物．经蛋白酶的处理和作用后,这种质膜表面的颗粒状物普遍发生了构象变化,大的颗粒状物变得松散,宽度增加,高度明显降低．显示这些颗粒状物可能为膜表面的嵌镶蛋白．这些质膜蛋白块大小不等,分布不规则,大的蛋白块直径约在200～440nm之间,高度为28～50nm;中等大小的蛋白块直径在40～60nm之间,高度在1．8～5nm;而小蛋白质颗粒直径为12～40nm,高度在0．7～2．2nm．大的蛋白质块上有微孔．此外,分离的生活原生质体质膜表面存在着许多由内吞作用形成的“内陷穴”,一般在15gm。的质膜上有16个大小不等的穴．较大的穴口平均直径为139nm,深度为7．2nm,较小的穴口直径平均是96nm,深度为2．3nm．原生质体失水死亡后,质膜表面极性化状态降低,质膜出现皱褶,脂质分子层结构信息显示扁平状态,嵌镶的蛋白质颗粒少．在这种脱水死亡的原生质体质膜表面上仍能观察到内吞作用形成的内陷穴,但由于原生质体脱水形成皱褶,穴的口径缩小,深度增加．一般大的穴口平均直径为47．4nm,深度为31．9nm;小口径直径为26．5nm,深度为43nm．经测量冬小麦细胞质膜厚度为6．6～9．8nm,有蛋白质的区域较厚．     

麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素链霉菌F21中酰化特性

螺旋霉素(SP)与麦迪霉素(MD)均为16元环大环内酯类抗生素, 并且结构非常相似。螺旋霉素含有3个组分,其结构差异表现在16元内酯环C3上的一个取代基的差异, SP I组分为羟基、SP II组分羟基乙酰化、SP III组分羟基丙酰化; 麦迪霉素是以麦迪霉素A1为主要组分的多组分抗生素, 麦迪霉素16元内酯环C3上连接的均为丙酰化羟基。已知这类抗生素16元内酯环C3羟基酰化是由一种称为3-O-酰基转移酶的蛋白催化完成。本研究将螺旋霉素产生菌—Streptomyces spiramyceticus F21中的螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因用Streptomyces mycarofaciens ATCC 21454中的麦迪霉素3-O-酰基转移酶基因原位替换后, 发现所产生的螺旋霉素仍然含有3个组分, 并且螺旋霉素III组分也不是主要组分, 说明麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素产生菌—S. spiramyceticus F21中不具有16元内酯环C3羟基丙酰化特异性以及酰化高效性, 也提示其在麦迪霉素产生菌中的丙酰化特异性和高效性可能与该菌株(种)的特性有关。     

渗透压敏感和耐高渗酵母菌在海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊中的生长和代谢

为了研究微囊微环境中渗透压对微囊内不同渗透压敏感性细胞生长、代谢的影响, 分别以渗透压敏感型酿酒酵母Y02724与耐高渗酵母Hansel为细胞模型, 考察了有氧条件下这两种细胞在海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸(Alginate-chitosan-alginate, ACA)微胶囊中的生长、代谢状态。主要检测了细胞比生长速率、最大产物生成量以及代谢物乙醇、甘油分泌量等的变化。实验结果分析表明, 渗透压胁迫可能是导致不同渗透压敏感性细胞在微囊微环境中生长代谢特征变化的因素之一, 即微囊微环境内可能存在渗透压胁迫。     

原儿茶酸促进人脂肪干细胞体外增殖的研究

为了寻找能够促进干细胞增殖的药物,观察了中药益智仁（Alpinia oxyphylln）中提取的原儿茶酸对人脂肪干细胞体外增殖的影响,并对其作用机制进行了初步的探讨．人脂肪干细胞能在体外分化为神经元样细胞,并对凋亡的PC-12细胞起到保护作用．原儿茶酸能够促进人脂肪干细胞的增殖,且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性．流式细胞术检测细胞DNA含量的结果显示,原儿茶酸处理组细胞S期所占比例明显增加,其中,1．5mmol／L原儿茶酸处理组细胞S期所占比例与对照组相比增加2倍以上．同时,该组细胞G2／M期所占比例明显增加,G0／G1期所占比例明显下降．蛋白质免疫印迹结果显示,1．5mmol／L原儿茶酸处理组细胞周期素D1（cyclinD1）的表达明显升高．cyclin D1-siRNA转染显著抑制了原儿茶酸对人脂肪干细胞体外增殖的促进作用．流式细胞术检测细胞表面标志物,成骨诱导和脂肪诱导的结果显示,原儿茶酸处理后,人脂肪干细胞仍保持间充质干细胞多分化潜能的特性．上述结果提示,原儿茶酸有可能在人脂肪干细胞介导的干细胞移植治疗中发挥作用．