单分子荧光原位杂交（smFISH）技术及应用

单分子荧光原位杂交（single-molecule fluorescence in situ hybridization,smFISH）技术是一种通过用偶联荧光基团的寡核苷酸探针,对固定细胞或组织中单个mRNA分子进行成像的方法。smFISH可对RNA进行定位、定量,以此对目标转录本进行实时研究。smFISH适用于细胞、组织切片等多种类型生物样本。近年来,多种基于基础smFISH的改进技术被发明,进一步促进了该技术的实际应用。smFISH良好的RNA单分子可视化能力,使得其在发育生物学、神经生物学及肿瘤生物学等基础生物学科中得到了广泛的应用。本文综述了smFISH技术基本原理、smFISH技术的局限性、smFISH衍生技术方法、smFISH在不同生物学科中的应用进展,并对smFISH技术的发展前景做出展望。     

灰树花深层发酵培养基的研究

灰树花具有较宽广的碳源谱和氮源谱,其最佳碳源为马铃薯汁加葡萄糖,最佳氮源为麸皮。在有生长促进剂一板栗壳煮汁作用下,菌丝的增产率达１４０％。培养基的氮源种类和生长促进剂对菌丝生长具显著的影响,两者交互作用明显。培养基中碳源浓度过高不利于菌丝的生长。灰树花深层发酵的较佳培养基为ＱＦ培养基：葡萄糖６０９,ＫＨ_２ＰＯ_４ ｌｇ,ＭｇＳＯ_４ ０．５ｇ,ＣａＣｌ_２ ０．１ｇ板栗壳煮汁 １５０ｇ,水１Ｌ。     

解烃细菌处理油田污水的研究

从油田污水中分离到一组可高效降解石油烃的混合菌群F6。室内模拟实验证明,该菌群适于油田含油污水的净化处理。采用粒状活性炭为载体的生物流化床系统处理辽河油田“兴一联”（辽河油田兴隆台第一联合站）污水,可使含油量由45mg/L降至4.1mg/L、CODcr由 470mg/L降至42mg/L。处理后的石油污水达到国家石油污水一级排放标准。     

经柞蚕蛹连续继代的柞蚕核型多角体病毒酶解图谱分析

本研究对五株不同地域分离的柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)在柞蚕蛹体内继代后的产物进行EcoRI和SaII酶解图谱比较分析。观祭到经柞蚕蛹继代一次的五株病毒的EcoRI酶解图谱均相同;而SaII酶解图谱各有明显不同之处。其中二株病毒(ApNPV-3和Ap NPV-9)经柞蚕蛹继代1次与连续继代26次后的酶解图谱分析中,观察到,各样品的EcoRI酶解图谱仍相同,第1次与第26次的ApNPV-9的SaII酶解图谱也无明显差异。但第1次与第26次的ApNPV-3的SaII酶解图谱却有明显差异。结果提示:ApN     

上皮肿瘤始于干细胞

人类肿瘤大约90％以上源自于上皮。上皮干细胞是唯一长期存在于上皮组织的细胞,可积累多次突变生成肿瘤。所以,人们认为肿瘤多起源于正常干细胞。然而,目前研究中关于上皮肿瘤干细胞及其与正常上皮干细胞的关系了解甚少。现综述近年来有关上皮干细胞和肿瘤发生的关系及其调控机制方面的研究进展。     

改良环介导等温扩增技术快速检测肉类中的大肠杆菌O157: H7

针对大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7,E.coli O157:H7)传统检测方法检测周期长的问题,建立了肉类中的E.coli O157:H7的改良环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。以E.coli O157:H7的O157特异性抗原rfbE基因、鞭毛H7特异性抗原fliC基因序列作为靶序列,分别设计2套增加了环引物的改良LAMP引物序列,单管同时检测,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果。采用36株细菌验证了该改良LAMP引物的特异性。热裂解法提取的DNA经改良LAMP体系扩增20 min,检测E.coli O157:H7的灵敏度为1.4 CFU/mL,人工污染肉中的E.coli O157:H7检出限为1.8 CFU/g。137份实样中,检测出1份E.coli O157:H7假阳性,与行业标准SNT0973-2000符合率达到99.3%。     

高效降解棉酚菌株的分离鉴定及诱变选育

作为一种蛋白资源, 棉籽粕因其含有毒素——游离棉酚限制了其在饲料工业中的应用。为获得能高效降解棉籽粕中棉酚的菌株, 以醋酸棉酚为唯一碳源培养基从16份样品中筛选出一株高效降解棉酚菌株(Y-2), 经生理生化及18S rDNA鉴定为Pichia guilliermondii, 此菌种为非致病酵母, 且首次报道用于棉酚的降解, 在工业生产中具有潜在的应用前景。通过紫外诱变获得一株棉酚降解率更高的突变株YUV-51。通过对突变株YUV-51发酵温度、时间及接种量的初步优化, 获得其固态发酵优化条件: 30 °C培养48 h, 接种量0.025 g湿菌体/g棉籽粕, 初始水分含量50%。为避免游离棉酚在前处理中大量降解棉籽粕, 不进行湿热处理, 经接种发酵后脱毒率可达到58%。这使微生物脱毒在实际生产中应用成为可能。     

褪黑激素体外对脂肪间充质干细胞增殖及向施万样细胞分化的影响

该文探究了褪黑激素(melatonin,MT)对脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal?stem cells,ADSCs)向施万细胞(Schwann cells,SCs)分化的影响。从小鼠腹股沟脂肪垫分离ADSCs,培养至第3代,进行成脂和成骨分化,流式细胞术鉴定细胞表面抗原;第3代ADSCs分别与不同浓度的MT孵育24 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,确定MT合适浓度。实验分为对照组、50 nmol/L MT组、神经诱导液组和50 nmol/L MT+神经诱导液组,孵育11天后,采用qPCR和Western blot检测SCs表面标志GFAP和S-100的表达情况。结果显示,50和100 nmol/L MT对ADSCs的增殖活性显著高于其他组,且50 nmol/L MT促增殖效果更好。神经诱导液组和50 nmol/L MT+神经诱导液组GFAP、S-100的mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组,而与神经诱导液组相比,50 nmol/L MT+神经诱导液组GFAP、S-100的mRNA和蛋白表达水平显著升高。综上所述,50 nmol/L MT可以在体外显著促进...     

马尾松毛虫质多角体病毒NS5蛋白的表达和功能初步分析

马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株第9个片段编码非结构蛋白NS5,利用pET-32a(+)载体带有组氨酸标记的重组蛋白进行表达,获得纯化的重组蛋白.利用凝胶电泳阻滞检测试验(EMSA)检测蛋白和核酸的结合作用,结果表明NS5蛋白能与病毒基因组dsRNA结合.     

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒上海株SH95基因组B片段的克隆与分子系统进化树分析

分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)上海株(SH95)的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板一步扩增出全长基因组B片段,将其克隆入pGEM—T载体,并进行序列分析。克隆的B片段全长2827个核苷酸,其编码的氨基酸与超强毒株HK46的同源性达98．18％(863／879)。分子系统进化树分析表明,SH95超强毒株与美国变异株E的亲缘关系最近,但与基于基因组A片段的系统进化分析完全不同,表明该毒株在发生过程中基因重配比基因重组发挥了更重要的作用。通过对14株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测B片段上11个独特的氨基酸位点可能与毒力相关。