苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究

已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4.0718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 20kbDNA。经NdeⅠ酶切消化后亚克隆构建文库 ,通过PCR-RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子。然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与pET30a连接 ,转化E .coliBL21(DE3) ,高效表达了14.1kD蛋白。表达蛋白占总蛋白量的50%以上 ,且 90 %以上以包涵体形式存在。利用穿梭载体pHT30.4构建表达质粒pHTX42 ,电转化Bt无晶体突变株XBU001,获得重组菌株HTX42 ,经SDS-PAGE分析 ,cry1Ac基因得到强表达 ,蛋白质定量分析显示目的蛋白量占总蛋白量的79.28% ,且其在细胞中累积达细胞干重的6.413% ,比文献报道的25%左右高了 1倍以上。原子力显微镜 (AtomicForceMicroscopy ,AFM)检测显示 ,目的基因在大肠杆菌(E.coli)中表达的包涵体呈不规则形状且较小,而在无晶体突变株中表达的晶体呈典型菱形晶体,大小约为1.2μm×2.0μm.生测结果显示,包涵体与晶体对小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫均有高效杀虫活性。本研究为构建高效杀虫工程菌及进一步阐明Bt伴孢晶体中20kb DNA分子的来源,结构和功能奠定了重要的基础。     

RNA干扰抗HIV-1的基本策略及其优化

艾滋病已成为严重威胁人类健康的疾病之一,而目前仍未找到行之有效的预防及治疗方法.RNA干扰是近年来发现的一种简单高效的基因干预方法,在病毒、肿瘤及功能基因组学等研究方面已显示出良好的应用前景.     

60Co辐射对网织红细胞微观流变学特性的影响

采用 ⁶⁰Co大剂量全身均匀急性辐射的方法,造成一种辐射贫血的动物模型.以便在几天内连续研究 ⁶⁰Co辐射对新生的网织红细胞及红细胞流变学特性的影响.采用一种在低粘切变流场中能将红细胞变形指数DI分解为取向指数（DI）_or和小变形指数（DI）_d的新型激光衍射法,对网织红细胞及红细胞的变形指数、取向指数、综合变形指数（IDI）等血液流变学特性参数进行测量,发现在 ⁶⁰Co大剂量辐射后,新生的网织红细胞及红细胞流变学特性存在明显异常.将这种 ⁶⁰Co辐射造成的贫血模型与文宗曜等提出的用抗体诱导的大量同步化的球形红细胞贫血模型相比较,后者更具有明显的优点.同时为研究辐射对血液流变特性的影响及正确地挑选红细胞衰老模型提供了理论与实验的基础.     

巨峰葡萄花芽分化的研究

以巨峰葡萄(Vitis vinifera L.×V.Labrusca L.cv.Kyoho)为材料,用摘叶、去穗法判定花芽的生理分化期,并用GMA半薄切片法观察花芽分化进程。结果表明:从新梢顶端到第9个展开叶之间的芽处于生理分化期,花芽生理分化期分为成花诱导期和花芽孕育期。葡萄的花序分化阶段可分为未分化期、花序原基分化期和花序第二穗轴分化期3个时期。第1年只进行花序分化,次年进行花器官分化。原分生组织衍生的组织中淀粉粒分布较多,蛋白质则在分裂旺盛的原基组织中含量高。     

暗罗属植物叶的比较解剖学研究

利用扫描电镜技术、叶片叶片离析方法和石蜡切片法对暗罗属12种植物叶和形态结构进行了比较研究。结果表明,叶表皮细胞形状、气孔器形态、表皮毛类型、表皮细胞中晶体类型、叶肉中油细胞分布位置、栅栏组织和海绵组织厚度的比值,以及主脉维管组织的结构特征等具有明显的种间差异。可以利用这些叶的解剖特征将暗罗属植物相互区别开来。     

菊芋在脱脂乳中对双歧杆菌生长的影响研究

以菊芋粉为材料,以长双歧杆菌(Blm)和两歧双歧杆菌(Bbm)为实验菌株,研究菊芋在脱脂乳中对双歧杆菌生长的影响,以期为进一步开发菊芋资源和研制双歧杆菌酸奶提供理论依据。结果表明在脱脂乳中加入3%的菊芋粉,凝乳时间有所缩短,在接种Blm的脱脂乳中缩短了0．9h,在接种Bbm的脱脂乳中缩短了1．1h。在脱脂乳中添加3%的菊芋粉后,明显促进了菌体产酸。     

小鼠常压急性缺氧模型装置及其应用

设计了一种建立小鼠常压急性缺氧模型的简易装置,并通过实验与常规缺氧模型装置进行了比较。结果表明：此装置避免了高浓度C02或低气压对实验的影响,而且造价低廉,制作简单,使用方便,为完善缺氧的研究提供了一种手段。     

水蕨性别决定研究进展

介绍了成精子囊素、赤霉素、培养密度等环境因素对水蕨性别决定的影响以及和水蕨性别决定有关的遗传学和分子生物学研究,概述了以水蕨为材料研究植物性别决定的优势及研究意义,明确了水蕨作为研究植物性别决定的模式植物的地位。     

应激性对动物免疫功能影响的研究进展

应激影响动物的生长、行为和多种生理活动。简要介绍应激对动物免疫功能的影响,并阐述其影响机理,为应激疾病的预防、治疗和药物的研制提供一些参考。     

紫外分光光度法测定肉碱转化液中巴豆甜菜碱的含量

通过对巴豆甜菜碱和L－肉碱在紫外188－215mm的光吸收的比较,建立了紫外分光光度法测定肉碱转化液中巴豆甜菜碱含量的方法,测定波长205mm,线性范围0－25ug/ml,该方法快速方便 ,重复性好,可用于L－肉碱生产过程中巴豆甜菜碱的跟踪检测。