小鼠胶原诱导性关节炎模型的建立及其免疫学变化研究

目的 胶原诱导性关节炎模型（collagen induced arthritis,CIA）是研究类风湿性关节炎发病机制和治疗药物筛选的理想模型,也是目前国际上公认的关节炎模型.但是,目前鲜见Ⅱ型胶原诱导CIA模型的系统免疫学变化的报道.因此,本研究采用DBA/1小鼠诱导了CIA模型,并对其免疫学改变进行了系统研究.方法 将牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂混和并充分乳化,于DBA/1小鼠尾根部皮内注射进行初次免疫,20 d后同样方法进行再次免疫.应用千分尺测量CIA模型小鼠的左右两侧足掌厚度,并进行关节炎评分.酶联免疫吸附试验测定小鼠血清Ⅱ型胶原特异性抗体,Luminex技术和αLISA技术测定血清及培养上清中的细胞因子水平.结果CIA小鼠于造模后23 d开始,陆续出现前肢、后肢的红肿、功能障碍,发病率高达100％,且随着时间的延长其关节肿胀程度呈进行性加重,关节炎评分增高.CIA小鼠脾脏指数较正常组明显升高,且Ⅱ型胶原刺激的特异性T细胞增殖明显增强.细胞因子检测结果表明,脾细胞培养上清中IFN-γ和1L-4含量及IFN-γ/IL-4比值明显升高,TNF-α和IL-1β水平亦显著升高.此外,CIA小鼠血清中存在高水平的Ⅱ型胶原特异性抗体.结论 Ⅱ型胶原诱导CIA模型发病率高,免疫学改变以Th1细胞因子升高为主,兼有细胞免疫功能及体液免疫功能损伤.     

B族G蛋白偶联受体PAC1的N端基序HSDCIF对其二聚化和上膜运输的影响

B族G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors, GPCRs）PAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽（pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP）的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一. HSDCIF（His-Ser-Asp-Cys-Ile-Phe）为位于PAC1的N端胞外1区（extracellar domain 1, EC1）的一段短肽序列,与特定负责激活PAC1受体的激动域PACAP（1-6）具有极高的同源性.利用基因敲除技术构建出缺陷HSDCIF基序的PAC1突变体（简称D PAC1）|利用基因工程原理和技术构建系列真核表达重组载体,包括融合了增强型黄色荧光蛋白（enhanced yellow fluorescent protein, EYFP）的表达载体D-PAC1-EYFP|用于生物发光能量转移（bioluminescence resonance energy transfer, BRET）检测的D-PAC1-Rluc|以及用于双分子荧光互补（bimolecular fluorescence complementation, BiFC）实验的D-PAC1-EYFP/N和D-PAC1-EYFP/C.免疫荧光检测（immunofluorescence assay）测定D PAC1的表达|荧光共聚焦显微观察D-PAC1的细胞运输,然后通过 Western印迹、BRET与BiFC方法来检测D PAC1的二聚化情况,综合评价HSDCIF基序对PAC1二聚化和在细胞中定位的影响.检测结果显示,缺陷HSDCIF基序的突变体D PAC1不能发生二聚化,也不能正常的进行上膜运输,而是滞留在内质网中,同时外源化学合成的寡肽HSDCIF可以竞争性地抑制正常PAC1的二聚化.     

离子色谱法检测食品中硼酸及硼酸盐

通过优化试验对离子色谱法检测食品中硼酸及硼酸盐的工艺进行了研究,探讨了取样量、超声提取时间、滤膜的选择、OnGuard RP柱和Ag柱的活化条件为：分析柱的选择、淋洗液的选择、进样体积和流速的选择,确定了离子色谱法检测食品中硼酸及硼酸盐的最佳检测条件,淋洗液：甲基磺酸（3mmol/L）/甘露醇（60mmol/L）;再生液：四甲基氢氧化铵（25mmol/L）/甘露醇（15mmol/L）;色谱柱：IonPac-borate分析柱,250*9mm或等效柱。检测器：电导检测器。抑制器：AMMS-ICE300,4mm微膜抑制器;柱温：25℃;流速：0.8mL/min;进样量：300μL。     

利用商品猪群定位猪耳型QTL

由 19头杂种公猪 [皮特兰× (皮特兰×汉普夏 ) ]、5 2头杂种母猪 [Leicoma× (大约克×长白 ) ]及其 332头后代组成的商品群作为参考家系 ,选择 172个微卫星标记和 3个 1类标记 (RYR1、PRKAG3、PIT1)对参考家系的个体进行遗传标记分型 ,构建了猪的整个基因组微卫星连锁图谱。按照线性评分的方法 (竖耳 :1分 ;垂耳 :- 1分 ;半垂耳 :0分 )测定猪的耳型表型值。耳型测定值的平均值为 0 .2 3,标准差为 0 .82。应用最小二乘回归方法对耳型的QTL进行定位 ,结果仅在 6号染色体的末端 (Sw1881和Sw32 2 )之间以 1%基因组显著性水平检测出 1个耳型基因位点 ,而在其他染色体上即使 10 %染色体显著性水平上也没有发现QTL。     

转基因小鼠技术中获得原核期受精卵最适时间的研究

显微注射法是制备转基因动物的首选方法,而原核清晰受精卵的获得是影响显微注射成败的关键。本文对小鼠HCG超排注射后大最原核期受精卵获得的最佳时间进行了研究,以提高显微注射成功率。结果显示采集雄性原核清晰受精卵的最佳时间段为注射HCG后25～27h。     

血小板减小症模型制作及药效试验应用研究

[目的] 研究血小扳减少症模型复制的方法和皮下注射白细胞介索-6对小鼠血小板减少症治疗的效果。[方法] 采用12只BACB/C小鼠,雌雄各半,随机分为3组,皮下注射环磷酰胺;再将3个模型组随机设为阴性对照组、阳性对照组以及白细胞介索-6实验组,分别皮下注射稀释液、白细胞介素-11及白细胞介素-6,定时采血,分析血小板数目。[结果] ①与给药前相比,小鼠血小板减少极显著(P＜0．01);②阴性对照组与阳性对照组以及白细胞介素-6实验组之间差异极显著(P＜0．01）;③阳性对照组、白细胞介素-6实验组给药前相比差异极显著(P＜0．01)。[结论] 用环磷酰胺对BACB/C小鼠注射方法制造模型简单易行;白细胞介素-6在BACB/C小鼠以皮下注射给药途径方法,对治疗小鼠血小板减少症效果显著。     

增强UV-B辐射和SO2作用下植物光合响应及其相对抗性

 研究了20种野外生长的树种在增强UV-B、NaHSO3的作用下,它们的光合作用响应及其对这两种胁迫的抗性。研究结果表明,这些植物的抗性可分为抗性强、抗性中等和敏感3种类型。UV-B、NaHSO3以及UV-B+NaHSO3 3种处理与这些植物光合作用受抑制程度呈现良好的线性关系,说明这些植物在防御UV-B和NaHSO3伤害的能力方面有一致性,没有种的特异性。结果还表明,在这些植物中NaHSO3增强了UV-B对它们的抑制作用,敏感类型植物尤为明显。      

Harpin_(Xoo)及其功能域片段启动病原物诱导性启动子在转基因拟南芥中的活性(英文)

从烟草(Mcotiana tabacum L.)中克隆了3个病原物诱导性启动子PPP1、PPP2和PPP3,它们都含受细菌诱导的反应元件PPP1和PPP2,另外含有受生物激发子及水杨酸(SA)诱导的元件;PPP1内部还含串联重复的两段111bp的序列,而在PPP2中,这个重复序列中的一个111 bp的片段被定点删除。分别构建了含这三个启动子及花椰菜花叶病毒35S启动子的转化单元,用它们分别转化拟南芥(Arabidopsis thaliana L.),获得了转基因植株。PCR证明,几个启动子和所带的gus基因(uidA)已经整合到拟南芥基因组中。用青枯病菌接种转基因第二代植株,组织染色表明三个PPP启动子在拟南芥中都可以受青枯病菌诱导,说明克隆的PPP启动子是有活性的。随后分别用SA、来自水稻白叶枯病菌的蛋白质激发子halpinXoo以及hatpinXoo的3个具有不同功能的片段DEG(促进生长)、DIR(诱导抗虫)、DPR(诱导抗病)喷雾处理转基因植株,通过GUS的荧光定量分析,检测了启动子的活性。结果显示,青枯病菌诱导的PPP1、PPP2和PPP3活性分别为35S启动子活性的53、39和25倍。PPP1和PPP2可以受SA、harpinXoo、DEG、DIR和DPR的诱导,而PPP3则不能。这些结果说明了有关元件的可能作用。另外,PPP1的活性比PPP2高3倍,表明111bp的重复序列可以影响启动子活性水平。     

国人颅骨弧弦周长的测量及其性别的判别分析

本文对青岛地区出土、已知性别的成年颅骨249个(男142,女107)进行了弧、弦、周长的测量,计算了有关指数,对额、顶、枕骨的弧长作了比较和分型,并用判别分析方法鉴定颅骨性别。