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141.
采用PCR技术 ,扩增了人转化生长因子β1 (hTGFβ1 )成熟肽基因 ,并对其进行了全序列测定 .采用DH5α/ pBV2 2 0表达系统 ,使TGFβ1在大肠杆菌胞内的表达达到 1 6 % .通过N端氨基酸序列测定和免疫印迹分析 ,证实重组蛋白为hTGFβ1单体蛋白 .采用谷胱甘肽法或CHAPS/DMSO法 ,使重组蛋白的复性率达到 30 % .通过纯化获得了银染一条带的重组蛋白 ,MTT法对Mv1Lu细胞的测活表明 ,重组蛋白具有较强的生物活性 相似文献
142.
143.
采用PCR技术从E.coli基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶(PhoA)的启动子和信号肽序列.在PhoA启动予5'端设计了EcoRⅠ酶切位点,在信号肽编码序列3'端设计了HindⅢ酶切位点.将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ位点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-1.之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在E.coli中获得分泌表达,另采用pINⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。 相似文献
144.
牛脑成纤维细胞生长因子的分离纯化与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
新鲜牛脑组织匀浆液经两步硫酸铵沉淀、CM-Sephadex C50 离子交换层析以及肝素-Sepharose 亲和层析,可得到纯化的酸性和碱性成纤维细胞生长因子(aFGF 和bFGF),分子量分别为13.2kD 和15.2—15.8kD.两种因子均可有效促进3T3细胞的 DNA 合成,ED50分别为15.8ng/ml 和 0.32ng/ml.进一步对 aFGF 的等电点及氨基酸组成做了分析. 相似文献
145.
本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电点在pH10以上,氨基酸组成分析结果也与文献值接近。这为进一步研究人脑髓鞘碱性蛋白的抗原性创造了条件。 相似文献
146.
从少量转染细胞中同时快速提取总RNA和基因组DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
采用4mol / L LiCl将DNA和RNA分相,建立了同时从少量转染细胞中快速提取细胞总RNA和大分子基因组DNA的方法.与以前的方法相比,本法快速、简便、经济,尤其适合应用在哺乳动物细胞基因表达与调控的研究中. 相似文献
147.
148.
猫儿山自然保护区3 种森林类型土壤养分垂直分布特征 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨不同森林类型对土壤养分的影响, 研究广西猫儿山自然保护区不同森林类型土壤养分垂直分布规律。结果表明: 3 种森林类型土壤pH 值毛竹>杉木>水青冈变化值在4.10-5.32 之间, 随着土层的加深升高; 3 种森林类型土壤有机质含量在10.69-149.39 g⋅kg–1 之间水青冈>杉木>毛竹, 随着土层的加深递减; 不同森林类型土壤全量N、全量P、速效N、速效K 的含量随着土层加深呈下降趋势, 且水青冈各层次土壤高于杉木和毛竹; 水青冈和毛竹土壤速效P 含量随着土层的加深而呈递减趋势, 杉木土壤速效P 随着土层的加深呈现不规律变化; 土壤全量K 平均含量杉木>毛竹>水青冈, 随着土层的加深而升高。3 种森林类型不同层次土壤有机质与土壤全N、速效N、速效K 呈显著线性正相关, 相关系数r≥0.901。 相似文献
149.
人肺癌细胞CPP32基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白酶尤其是ICE家族的蛋白酶是细胞死亡机制的核心成分.ICE蛋白酶家族中,CPP32(又称Yama,apopain)在不同形式的凋亡途径中起核心作用.为深入研究CPP32的结构与功能,克隆了CPP32基因,并在大肠杆菌中进行了表达.采用RT-PCR技术从人肺癌细胞株中获得了CPP32蛋白酶基因.DNA序列分析表明,该基因由已报道的编码CPP32αp20亚单位和CPP32βp10亚单位的核苷酸组成,提示ICE家族蛋白酶寡聚化可能受DNA水平调控.将获得的CPP32基因分别重组到pBV321和pEX31B载体上,并分别转化到大肠杆菌中,均获得了CPP32基因的较高表达,表达产物主要以包涵体形式存在. 相似文献
150.
目的在细胞学水平比较DJ、DJ-1M26 I、DJ-1L166 P基因对NIH 3T3细胞增殖速率与凋亡的关系,为建立转基因动物模型及帕金森疾病发病机制研究奠定基础。方法分别将pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166 P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26 I重组质粒脂质体方法转染NIH 3T3细胞,500μg/ml G418压力筛选稳定克隆,对3种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和Annexin V-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测。结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166 P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26 I重组质粒转染NIH 3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个、4个、3个阳性细胞克隆,RT-PCR及Western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,Caspase-3 RNA水平检测DJ-1L166 P和DJ-1M26 I组表达高于正常NIH 3T3细胞组,而DJ-1组caspase-3转录水平相对最低,MTT实验结果初步证明转染DJ-1L166 P和DJ-1M26 I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率均低于DJ-1组和正常NIH 3T3细胞组(P〈0.05),转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞增殖速率与正常NIH 3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测表明转染DJ-1L166 P和DJ-1M26 I基因的NIH3T3阳性细胞凋亡率均高于正常NIH 3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞凋亡率低于正常NIH 3T3细胞(P〈0.05)。结论 DJ-1L166 P和DJ-1M26 I基因突变均降低NIH3T3细胞增殖速率,DJ-1L166 P和DJ-1M26 I基因突变更易导致NIH 3T3细胞的凋亡,DJ-1L166 P和DJ-1M26 I基因突变对NIH3T3细胞增殖速率和细胞凋亡影响是相似的。 相似文献