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头状轮生链霉菌谷氨酰胺合成酶的研究 Ⅰ.酶的生成和纯化 总被引:1,自引:1,他引:0
以氨为氮源培养头状轮生链霉菌(Streptoverticillium caespitosus)时粗抽提液中谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)对热稳定,以硝酸盐为氮源时GS对热不稳定。以硫酸链霉素沉淀、热处理、聚乙烯亚胺(PEI)沉淀和Affini-gel Blue柱纯化了前者,以DE-52柱和Affini-gel Blue柱纯化了后者,纯化后两个酶分子量同为550000,亚基分子量同为56000,热稳定性相同,转谷氨酰基酶活力的最适pH均在6.4~6.7之间,对谷氨酰胺的K_m值同为11.1mmol/L,寸羟胺的K_m值同为1.6mmol/L,所以认为此菌中总是同一GS表现出活力。 相似文献
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以氨为氮源培养头状轮生链霉菌(Streptoverticillium caespitosus)时粗抽提液中谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)对热稳定,以硝酸盐为氮源时GS对热不稳定。以硫酸链霉素沉淀、热处理、聚乙烯亚胺(PEI)沉淀和Affini-gel Blue柱纯化了前者,以DE-52柱和Affini-gel Blue柱纯化了后者,纯化后两个酶分子量同为550000,亚基分子量同为56000,热稳定性相同,转谷氨酰基酶活力的最适pH均在6.4~6.7之间,对谷氨酰胺的K_m值同为11.1mmol/L,寸羟胺的K_m值同为1.6mmol/L,所以认为此菌中总是同一GS表现出活力。 相似文献
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地中海诺卡氏菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质 总被引:1,自引:1,他引:0
采用硫酸铵分部沉淀、DEAE纤维素-52柱层析和亲和蓝柱层析的方法,分离纯化了地中海诺卡氏菌(Nocardia mediterranei)U-32丙氨酸脱氢酶(ADH),用聚丙烯酰胺凝肢电泳鉴定为单一组份。以聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳测得丙氨酸脱氢酶的分子量为228000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为38000,表明地中海诺卡氏菌U-32丙氢脱氢酶由六个相同的亚基组成。ADH加氨反应最适pH为8.5,脱氨反应最适pH为11.5,ADH的pH稳定范围在pH 7.5-11.5。脱氨反应的最适温度为50℃。ADH的米氏常数KM为:丙酮酸4.88×10-4mol/L;NH+44.03×10-3Mol/L;NADH 6.02×10-5Mol/L;L—Ala7.45×10-3mol/L;NAD+6.67×10-5mol/L。 Hill作图法求得ADH的Hill系数n为:ADH对丙酮酸、NADH和NAD+的Hill系数都为1;对L—Ala和NH4+的Hill系数n值分别为0.52和0.51,ADH对L—Ala和NH+4有负协同效应,由此初步推测ADH是一个调节酶。 相似文献
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本文探讨了球形芽孢杆菌Bacillus sphaericus Ts-1原生质体电诱导质粒pHV 33转化的最佳条件:3个连续的间隔为1秒,时程为10μs,强度为21Kv/cm的脉冲,使其转化频率为2.44×102转化子/μgDNA,转化效率为3.16×10-6,质粒转化吸附的饱和浓度为5μg/l03CFU。利用此条件,将重组杀蚊毒蛋白克隆pJB41 7转入Bacillus subtillis 168M和Bacillumphaericus Ts-1中,使得B.Sublilis有了杀蚊活性,但未能提高Ts-1的毒性。 相似文献
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中国科学院上海植物生理研究所 上海 相似文献
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尿素明显地影响热带假丝酵母的长链二元酸合成。当存在适量尿素(0.1%)时,长链二元酸大量合成,但当尿素量增加至0.2%以上时,长链二元酸基本上不积聚,但短链二元酸,主要是庚二酸有所增加。 尿素的利用呈S形曲线,说明尿素可能经酶的诱导利用。在发酵中当尿素量增至0.2%以上时,整个发酵过程均残留少量尿素,它对长链二元酸的合成起着调节作用。 发酵中加入和尿素含氮量相当的酒石酸铵或硫酸铵以代替尿素,或在适量尿素的发酵过程中,补加入和0.1%尿素含氮量相当的氨时,均不明显抑制长链二元酸的合成,但在不同时间补加入0.1%尿素时,则受强烈抑制。 适量尿素(0.1%)培养的休止菌体,在不同时间补加尿素都显著抑制长链二元酸的合成,表明尿素对已生成的酶系具有抑制作用。但过量尿素培养的休止菌体,不能转化烷烃生成长链二元酸,说明过量尿素所培养菌体的长链二元酸合成酶系受到显著的阻遏作用。 适量尿素培养的休止菌体,在不同时间加入氨,它的抑制作用远较尿素为低。用适量尿素含氮量相当的铵盐培养的休止菌体,亦具有类似现象,但过量氨培养的休止菌体转化时仍能生成多量长链二元酸。以上均说明尿素对长链二元酸合成的影响不是氨而是尿素分子本身起了抑制和阻遏作用。 尿素分子的化学结构类似物——硫脲和胍也具 相似文献
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1980年7月20—25日在加拿大安大略省伦敦市的西安大略大学联合举行了第六届国际发酵讨论会和第五届国际酵母菌讨论会。来自各国的1580名代表参加了会议。大会主席是东道国的J.E.Zajic教授,副主席是C.C.Stewart教授。我们作为中国代表首次应邀参 相似文献
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林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶的酶学性质 总被引:4,自引:0,他引:4
在分离纯化的基础上,报道了pH、温度和金属离子对林肯链霉菌(Streptomyceslincolnensis)Z-512谷氨酸胺合成酶(GS)活力的影响及GS底物专一性的研究结果.在动力学性质的研究中,发现林肯链霉菌GS在生物合成反应系统中,对底物NH_4CI的饱和曲线不遵守米氏方程.Hill作图呈两相曲线.在NH_4CI浓度低的情况下,Hill系数大于1,具有正协同效应;当NH_4CI浓度增加到一定程度时,Hill系数小于1,具有负协同效应.这说明NH_4CI不仅作为林肯链霉菌GS的底物,而且作为一种效应物调节GS的活性.林肯链霉菌GS对底物Glu及ATP的饱和曲线遵守米氏方程.在不同的激活离子存在下,GS对Glu、ATP的Km值也不同. 相似文献