三角酵母菌D-氨基酸氧化酶的纯化和一些基本性质的研究

1．比较了17株霉菌和36株酵母菌的D-氨基酸氧化酶活力,其中以三角酵母的酶活力最高,比较适宜作为研究D-氨基酸氧化酶的材料。 2．用硫酸铵、聚乙二醇(PEG 6000)分部沉淀,Sephadcx G-200、羟基磷灰石柱层析分离纯化了三角酵母D-氨基酸氧化酶,聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一组份。 以聚丙烯酰胺凝股梯度浓度电泳测得D-氢基酸氧化酶的分子量为170,000,sDs凝胶电泳测得其亚基分子量为42,000,表明三角酵母D-氨基酸氧化酶由四个相同亚基组或。 3．三角酵母D-氨基酸氧化酶在以D-丙氨酸为底物时,最适pH为8．3,米氏常数(Km)为3．3mM。三角酵母D-氨基酸氧化酶具有较宽的底物专一性,多种D或DL型氨基酸都可以做它的底物。     

冻土毛霉两型性的研究

本文报遭了冻土毛霉两型菌体(M型与Y型)形成条件,比较了两种菌体的主要生理特征和超显微结构,并对CO2,引起代谢途径改变的机制作了初步探讨。在无足量的CO2存在下,仅有M型菌体形成,好气条件下的M型菌体具有高度氧化代谢,在嫌气条件下的M型(通N2)则进行酒精发酵。在有足置CO2(30％)存在下,不论O2分压的高低,均形成Y型菌体。CO2使菌体形态呈Y型的同时,代谢途径由有氧代谢转变为酒精发酵。     

力复霉素生物合成中N标记化合物参人的研究

使用稳定同位素15N标记化合物示踪方法,研究力复霉素分子中氮原于代谢途径。结果证明：硝酸钾(K15NO3)加入到rifl突变株,在有机培养基发酵中能促进力复霉素的中间体A32的生物合成,而且15N标记也参入到A32分子中。应用以15N标记谷氨酰胺为前体,证明酰胺氮原子是rifl突变株产物A32分子中氮原子的供体。15N标记A32,不论在高产菌株,还是无活力突变株经共合成,都能参入到力复霉素分子中。通过上述实验,阐明力复霉素氮原子的参入途径为K15NO3→→15NH3→谷氨酰胺-CO15NH2→→HA32-15NH2→→→力复霉素-15NH。     

硝酸盐,镁盐对林可霉素生物合成的促进作用

在林肯链霉菌生物合成林可霉素代谢调节的研究中,发现硝酸盐可明显促进林可霉素的生物加入硝酸钾０．８％,林肯链霉菌合成林可霉素的产量可增加３７％．在发酵９６ｈ之前加入硝酸盐均能促进林可霉素的合成,但产量的增加随加入时间的延迟而降低。硝酸钾在促进产量的同时,使菌体生长减少,看来硝酸盐对林可霉素的合成与菌体生长之间起着调节作用。     

地中海拟无枝菌酸菌U32中amrC/amkC基因的序列分析及在大肠杆菌中的表达

从力复霉素SV产生菌--地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsismediterranei)U32的硝酸盐同化基因簇的上游克隆了一个2.6kb的EcoRI-XhoIDNA片段并测定其序列.序列分析表明,该DNA片段编码两个完整的开放阅读框架(ORF),ORF2的起始密码子GTG与ORF1的终止密码子TGA在TG处重叠.ORF1编码一个含224个氨基酸的多肽,它同放线菌中典型的应答调节蛋白包括AfsQ1和MtrA有很高的同源性;ORF2编码一个含472个氨基酸的蛋白,它同包括AfsQ2和MtrB在内的组氨酸激酶同源.ORF1和ORF2有可能构成典型的双组份信号传导系统,分别命名为amrC和amkC.在T7启动子的控制下,完整的amrC和去除子N端一个可能的跨膜区的amkC在大肠杆菌中分别得到了高效表达,表达蛋白的分子量分别为30kD和46kD,与推测蛋白的分子量一致.     

尿素对热带假丝酵母Candida tropicalis合成长链二元酸途径的调节——Ⅱ.几个关键酶活力的消长

前文已报道尿素及尿素结构类似物对长链二元酸的合成酶系既有抑制作用,也有阻遏作用,从而调节了长链二元酸的合成。本文进一步从离体酶系探索过量尿素对热带假丝酵母在烃类氧化过程中有关三羧酸循环,乙醛酸循环,呼吸链,ω和β氧化等几个关键酶活力的消长关系。实验结果证明,过量尿素(0.2%)以上培养菌体的三羧酸循环三个主要脱氢酶,苹果酸脱氢酶,琥珀酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶(NADP)的比活力分别为正常尿素(0.1%)培养菌体的5.3、3.0、1.7倍。乙醛酸循环关键酶,异柠檬酸裂解酶和苹果酸合成酶分别为正常尿素培养物的2.6和2.8倍。另一方面当尿素过量时ω-氧化酶系活力极微,而β-氧化酶系活力大大提高,以致长链二元酸难以积累。另外过氧化氢酶活力在过量尿素存在时也有显著提高。而谷氨酸脱氢酶、NADH氧化酶和由NAD连结的异柠檬酸脱氢酶在两种菌体内无明显差别。