大鼠胚胎和成年组织中EGFR基因转录分析

本文报告用2.4Kb EGFR cDNA PE7为探针,分析大鼠胚胎发育过程中全胚组织、成年大鼠七种组织和再生肝组织中EGFR基因转录产物的水平。实验结果说明:(1)用人EGFRcDNA探针可以检测到大鼠肝脏细胞转录约为5.6Kb的EGFRmRNA。(2)大鼠胚胎发育过程中,EGFR基因转录活性显示骤然变化。10—12天胚胎中EGFR mRNA出现高峰。(3)成年大鼠肝、肾、肺、脑、脾、心脏和睾丸组织中均有EGFR基因的转录,转录水平各有差异,以肾为最高。(4)大鼠肝脏再生过程中,EGFR基因转录呈现时相调节的特征,部分肝切除刺激EGFR基因转录活性的增高,8小时达到高峰后又回落到接近正常的水平。这些EGFR基因转录的变化可能与大鼠组织和细胞的生长及分化的调控有关。     

藏红花愈伤组织诱导及其细胞培养的研究

藏红花幼叶愈伤组织的诱导频率在ＭＳ,Ｂ５和Ｗｈｉｔｅ三种培养基上均高达９８％;幼叶和芽的诱导率差异不大,高达９９％;不同时期的叶片差异较大,以幼叶诱导为佳;球茎诱导率为近８０％;激素配比以２．４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡＰ０．１～０．５ｍｌ／Ｌ为宜。在继代培养阶段,ＭＳ比Ｂ５和Ｗｈｉｔｅ更适合细胞的快速生长繁殖;并且以叶片的愈伤组织生长较快,芽次之,球茎最慢,适合于细胞生长的激素配比为ＮＡＡ２．０～３．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡＰ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ为宜。     

铁皮石斛和百令胶囊对老年SD大鼠肠道菌群的影响

目的探讨铁皮石斛和百令胶囊对自然衰老SD大鼠肠道菌群组成和多样性的影响。方法选取自然衰老SD雄性大鼠30只随机分为5组,分别为铁皮石斛高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组及百令胶囊组(40 mg/kg)、空白对照组,每组6只,对各组大鼠连续灌胃8周。在灌胃结束后,取各组大鼠的新鲜粪便,通过16S rRNA测序技术分析粪便菌群,采用生物信息学方法对大鼠肠道菌群结构和多样性进行分析。结果与空白对照组相比,PCoA和韦恩图分析结果显示铁皮石斛和百令胶囊使大鼠肠道菌群结构发生显著变化;铁皮石斛高剂量组放线菌门(Actinobacteria)菌群数量增多,Patescibacteria和厚壁菌门(Firmicutes)菌群数量减少,并且铁皮石斛高剂量组增加了肠道菌群种类的丰富度,如新增疣微菌门(Verrucomicrobia);百令胶囊组肠道菌群组成差异不显著,在原菌群的基础上调整其组成比例,表现为厚壁菌门数量增多,变形菌门(Proteobacteria)数量减少。结论铁皮石斛和百令胶囊对自然衰老大鼠肠道菌群具有调节作用,不同剂量的铁皮石斛对肠道菌群有不同的调节作用。铁皮石斛高剂量组对肠道菌群的调节具有重要意义,可增加有益菌的丰度,降低有害菌的丰度。     

圈养雄性林麝(Moschus berezovskii)维持社会等级的冲突行为模式

为了解圈养雄性林麝维持社会等级的冲突行为模式,于2016年6月1日至7月28日在四川马尔康林麝繁育中心,采用行为取样法对14只圈养雄麝进行了防御、追击、取代、进攻及威胁等社会冲突行为取样,分析了圈养雄性林麝社会等级与其发出(接受)的冲突行为类型和表达强度之间的关系。结果表明:林麝雄性圈养群发育了稳定的社会等级结构,作为冲突行为发起者,雄麝均有防御行为和侵犯行为(追击、取代、进攻和威胁)的表达,其防御行为的表达频次(7.71±2.18,n=14)显著高于追击(1.29±0.50,n=14)(P0.05)、取代(1.36±0.57,n=14)(P0.05)、进攻(0.21±0.15,n=14)(P0.05)和威胁(1.29±0.77,n=14)(P0.05) 4种侵犯行为的表达频次;防御行为表达频次与其社会等级呈显著负相关(P0.05);不同序位雄性发出的侵犯行为类型不同,高序位雄麝的高强度侵犯行为(追击和进攻)和低强度侵犯行为(取代和威胁)均有表达,低序位雄麝缺失高强度侵犯行为,仅表达取代行为;作为冲突行为的接受者,雄麝接受的取代行为频次(1.43±0.53,n=14)显著高于进攻(0.29±0.12,n=14)(P0.05)和威胁(0.36±0.16,n=14)(P0.05);中等序位雄麝接受侵犯行为的频次(5.50±1.50,n=2)有高于低序位雄麝(4.60±2.088,n=5)和高序位雄麝(1.14±0.55,n=7)的趋势(P0.05)。由此得出,圈养林麝社群主要通过展现较低强度的侵犯行为维持其社会等级结构,冲突行为的发起者多是序位较高的雄麝,其高强度侵犯行为的表达频次也相对较多。     

塞来昔布联合survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布和survivin反义寡核苷酸(ASODN)联合作用对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法:构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠随机分为4组:对照组、塞来昔布组(给予1000ppm的塞来昔布饮水)、survivin ASODN组(瘤内注射40μg/200μL的survivin ASODN)、联合组(给予1000ppm的塞来昔布饮水的同时瘤内注射40μg/200μL的survivin ASODN);观测裸鼠肿瘤生长情况并测量不同时间的体积变化,于接种肿瘤的35天处死裸鼠,测瘤体质量,应用cas- pase-3试剂盒检测caspase-3活性,免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数(PI)和微血管密度(MVD)。结果:治疗组平均体积均明显低于对照组(491.97±4.62mm~3,427.34±14.62mm~3,300.39±6.59mm~3 vs 703.56±12.51 mm~3,P<0.01),其中联合治疗组体积明显低于塞来昔布组或survivin ASODN组(P<0.01);平均抑瘤率分别为32.26%、50.86%、62.07%。治疗组caspase-3相对活性明显高于对照组(0.026±0.003、0.040±0.018、0.059±0.005 vs 0.006±0.001,P<0.01),其中联合治疗组caspase-3相对活性明显高于塞来昔布组(P<0.01)或survivin ASODN组(P<0.05);治疗组平均PI和MVD均明显低于对照组(P<0.01,或P<0.05),其中联合治疗组平均PI和MVD明显低于塞来昔布组或survivin ASODN组(P<0.01,或P<0.05)。结论:COX-2抑制剂塞来昔布和survivin ASODN联合应用可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过共同提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应,为胰腺癌的治疗提供了新的思路。     

肾脏脱细胞基质结构功能重建的初步研究

目的:本实验利用多种脱细胞剂通过半自动体外循环灌注洗脱肾脏细胞,摸索出最佳脱细胞剂种类及脱细胞方案.方法:以健康兔肾为研究对象,采用半自动体外循环灌注法,在10-15 ml/min流速及不同浓度、温度条件下经肾动脉灌注各种脱细胞剂,观察肾脏灌注过程中变化,灌注结束解剖肾脏,大体观察后行苏木精-伊红(HE)染色及组织形态学观察,重点观察肾小球、肾小管细胞结构的变化.结果:比较理想的肾脏脱细胞方案是1％Ⅳ型胶原酶-37℃,20 min,该酶能在相对较短的时间内洗脱部分肾实质细胞而对肾脏基质未造成明显损伤.该方案灌注时间短,能减少肾脏热缺血时间,有助于肾脏再生.其次是0.5％胰蛋白酶-25℃,2h,该方案能使肾小球细胞比较彻底的脱出,只留基质部分,对肾小管作用较小,但该方案用时较长,已达到肾脏体外耐受缺血的极限,理论上肾脏灌注后很可能会因缺血缺氧时间过长而坏死,故不推荐使用.洗脱效果最强的脱细胞剂是SDS,但其对肾脏实质结构造成不可恢复的破坏,尤其是引起基底膜断裂不利于肾实质细胞再生.其他脱细胞方案均不理想.结论:本研究证实通过选择适当的脱细胞剂,配合适合的温度、浓度、灌注压等条件,是可以实现肾脏部分脱细胞基质的,为下一步研究衰竭肾脏的部分脱细胞基质甚至是在体灌注乃至脱细胞后肾脏结构功能的重建提供了实验依据.     

细胞培养技术在农业上的应用

植物细胞具有生长发育的全能性,即在一定的条件下可进行离体增殖、生长、发育、脱分化或再分化等,拥有发育成为完整植株的潜力。因此,植物细胞进行离体培养具有独特的用途。可有目的地改造作物细胞的遗传组成,培育出人们所需要的作物新品种或具有某些新特征的细胞群体;同时,也可进行作物遗传种质的保存、提纯或复状等。植物细胞离体培养首先是将细胞从植物体内取出,然后将其接种在特定的含一定营养物质的培养容器内,让其在一定的条件下,继续生长和繁殖。细胞培养成功的关键是营养条件（如糖、氨基酸、维生素、无机盐等）和生长环境…     

迟缓爱得华氏菌溶菌蛋白NlpD的致病性研究

目的：以牙鲆为模式生物检测了迟缓爱得华氏菌一个潜在的毒力相关蛋白NlpD的生物学功能。方法：对NlpD蛋白序列进行分析,在大肠杆菌中进行了蛋白重组表达,并通过同源重组原理采用插入失活的方式构建了nlpD的突变型菌株TNlpD。结果：NlpD由316个氨基酸组成,与已知的细菌NlpD具有很高的同源性;生物信息学分析表明,NlpD包含两个结构域：N-端的细胞溶解酶结构域和C-端的肽酶结构域,在大肠杆菌中获得的重组蛋白具有溶菌活性;与野生型菌株相比,TNlpD的生长情况基本无变化,但对牙鲆的致死率以及在牙鲆组织内的扩散和增殖能力大幅下降,此外,TNlpD抵抗牙鲆巨噬细胞活性氧的杀伤能力也明显降低。结论：迟缓爱得华氏菌的NlpD具有溶菌活性,是一种毒力相关因子,在宿主体内扩散增殖、抑制巨噬细胞呼吸爆发等过程中发挥重要作用。     

植物性别分化的遗传基础与标记物研究

性别分化是植物个体发育的重要阶段 ,其分化机理的阐明不仅在发育生物学中具有重要的理论意义 ,而且具有极为重要的实践价值。遗传标记 ,尤其是近年来快速发展起来的蛋白质、分子标记等技术 ,在揭示植物性别分化机理的研究中起着越来越重要的作用。本文在比较不同开花系统植物性别分化的遗传基础上 ,综述了各类遗传标记在植物性别分化中的研究和应用 ,包括形态标记、蛋白质标记、同工酶标记和分子标记等 ,并对各种遗传标记在性别分化研究应用中的优缺点进行了分析。     

新型血管内皮细胞抑制因子VEGI_(151)的基因克隆表达及其活性

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。