提高人胚胎干细胞建系率的优选培养体系与方法

目的:建立一种从废弃胚胎中提高囊胚形成率和质量的培养体系,寻找多种促进内细胞团(ICM)数目增多、贴壁、增值的方法,提高人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)建系效率,建立人胚胎干细胞库。方法:将179枚IVFDay3废弃的胚胎放入优选培养体系中培养(G2.5培养液中添加10%人血清蛋白,人白细胞抑制生长因子(hLIF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF))。到Day7将形成的囊胚全部用机械法分离ICM,接种于丝裂霉素C灭活处理的原代小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)上,培养8-9天,每4-5天传代1次。结果:优选培养体系的囊胚形成率为29.1%(52/179),其中A级囊胚形成率为11.2%(20/179),50个ICM贴壁生长,20个出现克隆形态,成功建立11株hESC(FY-hES-11至FY-hES-21)。11株hESC均具有共同的多能性生物学特性。结论:优选培养体系可以明显提高囊胚形成的质量,促进ICM的增值,纯熟的机械切割法可以避免损伤ICM并提高其贴壁率,原代灭活的MEF饲养层可以明显促进细胞增殖。     

直肠癌的淋巴结转移的危险因素

目的:本研究主要目的为确定直肠癌的淋巴结转移的危险因素。方法:通过对1250例于2004年-2008年行直肠癌根治性切除的患者进行单因素和多因素分析,以确定淋巴结转移相关的危险因素,同时对PT分期和肿瘤大小之间的关系进行了相关性分析。结果:直肠癌患者淋巴结转移发生率为41%。在单因素分析中,患者年龄(P=0.008)、肿瘤大小(P=0.003)、PT分期(P<0.0019)以及分化程度(P<0.001)和淋巴结转移相关。在多因素分析中,年龄(P=0.017,OR=0.988,95%可信区间:0.978-0.998)、PT分期(P<0.001,OR=1.952,95%可信区间:1.656-2.302)和分化程度(P<0.001,OR=3.697,95%可信区间:2.112-6.472)是淋巴结转移的独立因素。结论:在直肠癌相关分析中,肿瘤的大小和PT分期呈正相关。年龄、PT分期和肿瘤分化程度是淋巴结转移的独立因素。在直肠癌中,肿瘤的大小和PT分期呈正相关。     

从甘蔗渣泥中分离降解木质素的真菌

采用涂布平板法从甘蔗渣泥中共分离得到5株优势真菌,分别为头孢霉属（Cephalosporium）、曲霉属（Asper-gillus）、木霉属（Trichoderma）、毛霉属（Mucor）和地霉属（Geotrichum）。对分离得到的真菌进行产酶特性的研究。采用两种不同的产酶培养基（培养基Ⅴ,培养基Ⅵ）,这两种培养基的无机盐成分、含量相同,它们的主要差别为碳源不同。培养基Ⅴ的主要碳源为葡萄溏,培养基Ⅵ的主要碳源为甘蔗渣（过60目筛）。结果表明：分离得到的真菌在这两种培养基中的产酶酶活力相差很大,最优菌株为木霉属Q-3,在培养基Ⅵ中产酶酶活最高,赖锰过氧化物酶和漆酶最高活性分别为4．2245U／mL、1．2525U／mL,相对应的纤维素酶活性较低。     

1200 例孕中期产前筛查结果的回顾性分析

目的:评价孕妇血清标记物(甲胎蛋白AFP、β-绒毛膜促性腺激素β-hCG和雌三醇uE3)的孕中期三联筛查在临床中的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)对1200例孕中期(14～22周)孕妇进行血清标记物AFP、β-hCG和uE3的检测,结合孕龄、孕周、体重等因素,经专门的筛查分析软件,计算唐氏综合征,18三体及神经管缺陷(NTD)的风险率。如孕妇为高风险,则进行胎儿的超声检查和染色体核型分析的产前诊断。结果:在1200例孕妇中,筛查高风险的孕妇有73例,其中唐氏综合征,18三体,NTD高风险孕妇分别为65例,5例和3例,假阳性率为6.08%(73/1200)。其中59例接受了产前诊断,占高风险孕妇的80.8%(59/73)。共检出1例唐氏综合征儿和1例无脑儿,未发现18三体,检出率为100%(2/2),未有漏诊的情况。妊娠不良结局在筛查高风险组和低风险组的比率分别为17.1%和1.32%,两组有显著性差异(P<0.01)。结论:利用孕妇血清标记物(AFP、β-hCG和uE3)的孕中期无创伤性产前筛查,结合产前诊断,对减少出生缺陷儿的出生,具有重要意义,并且高风险的筛查结果对胎儿的预后有一定的提示作用。     

草莓遗传转化研究进展

草莓是一种重要的小型浆果,近年来育出很多优良品种,种植面积逐渐扩大.然而仍有很多因素限制了草莓生产的发展.基因工程技术为植物育种、种质资源开发利用等领域开辟了新的途径,可以获得常规育种难以或无法得到的新类型.本文综述了近年来国内外在草莓抗病虫、抗逆、抗除草剂、品质特性、耐贮运性等基因工程的研究进展以及基因型、试管苗生理状态、共培养时间、侵染时间和菌液浓度、抗生素等因素对草莓遗传转化的影响.对草莓转基因研究中存在的主要问题和今后的研究方向及应用前景进行了探讨.     

正常与异常核型人类胚胎干细胞体外分化不同时期基因表达的异同

目的:研究正常核型和异常核型人胚胎干细胞(hESC)基因的表达异同.方法:实时荧光相对定量PCR检测两株正常核型(46,XX)及一株平衡易位13三体核型和一株三倍体核型hESC在体外自体分化不同时期X连锁基因PGK1、抑癌基因RBBP7及癌症基因GPC4的表达情况,并比较分化后不同时期、不同核型对父系印迹基因H19、IGF2R,母系印迹基因SNRPN及多能性调控基因OCT4、NANOG的影响.结果:随着分化时间的增加:①正常和异常核型hESC的PGK1均上调表达;②异常核型hESC抑癌基因RBBP7及癌症基因GPC4相对正常核型hESC呈现明显上调表达;③正常和异常核型hESC中印迹基因表达基本一致:H19、IGF2R上调而SNRPN表达变化不明显或下调;④多能性调控基因OCT4、NANOG在正常核型hESC中较在异常核型hESC中表达明显下降.结论:X连锁基因PGK1、印迹基因在hESC的发育过程中能维持正常调节而不受核型的影响.异常核型hESC抑癌基因、癌症基因在发育过程中的表达上调表明此种细胞具有更危险的发育前景,同时多能性基因在分化后仍能检出表明此种细胞分化能力较正常细胞弱.     

纤维素在不同介质中的吸附碱的研究

文中研究了纤维素在不同介质(水、乙醇、吡啶及N,N-二甲基乙酰胺)中吸附碱测定情况并通过对比总结出了纤维素对氢氧化钠随用碱量及介质变化规律:纤维素的吸附碱量随着介质及用碱量不同而有所变化,用水作碱化介质比用有机溶剂/水作碱化介质时的吸附碱量少;在用有机溶剂/水作碱化介质时,纤维素对碱吸附表现出大致相同的变化趋势。     

建立人类异常染色体核型的成纤维细胞系及滋养层细胞系

从自然流产绒毛或者中期妊娠羊水中分离细胞体外培养, 建立人类异常染色体核型成纤维细胞系及滋养层细胞系.中期妊娠羊水染色体诊断或自然流产绒毛染色体诊断过程中, 行G显带细胞核型分型, 对于发现异常核型的细胞, 进行分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定, 建立细胞系, 用PowerPlex 16系统行DNA-STR基因型检测.建立1株来自羊水的21三体成纤维细胞系, 以及7株来自绒毛的滋养层细胞系, 核型分别为47, XX 21; 69, XXX; 69, XXY; 47, XY 12; 47, XX 5; 48, XY 21, 22; 47, XY 18.所有细胞系体外传代均超过10代, 冷冻复苏率大于50%, 核型维持稳定, DNA-STR基因检测能对人细胞系进行个体识别.人异常染色体核型的成纤维细胞系和绒毛膜滋养层细胞系的建立,可以为探讨异常染色体产生机制及相关的分子遗传学研究提供细胞来源.     

广西瑶山鳄蜥的新分布

瑶山鳄蜥(Shinisaurus crocodilurus)是第四纪冰川后期残留的我国华南区爬行类的特有种,已往的研究认为它仅分布在广西东部北纬24°—24°25′之间的狭长地带。1987年6—10月间我们在广西大藤峡电站库区进行野外调查时,发现在离原分布区较远的南部地区也有鳄蜥分布。新分布区大藤峡河段在黔江两岸皆为陡峭的山峰石壁,黔江似在群山被切开的狭缝中穿过,丹霞式地貌在此尤为突出。水流很急,河面宽约80—200米左右(指枯水或丰水期),在河谷处的海拔约45米,主峰洪水顶为1314米;南岸莲花山的主峰高800多米。我们先后在金田乡罗宜、三莲村;大藤峡河…