分子生物学技术讲座（二）——分子克隆中所用的酶

限制性内切酶及其它DNA与RNA修饰酶是分子克隆技术的基本工具。1限制性内切醉和DNA甲基化酶限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性内切酶识别序列的特定的DNA序列或附近的序列,并在此切割DNA双链。它可以分成3类：Ⅰ类和Ⅲ类在同一蛋白分子中兼有修饰（甲基化）作用及依赖于ATP的限制（切割）活性。Ⅰ类酶结合于识别序列,但随机切割DNA;Ⅲ类酶能在识别序列位点切割DNA。在分子克隆中1类和皿类酶都不常用。D类限制一修饰系统限制性内切醇和修饰（甲基化）酶不在同一蛋白分子中,限制性内切酶能专一地切割识别序列,并不依…     

大孔吸附树脂对紫锥菊提取物中菊苣酸分离纯化的研究

采用大孔吸附树脂分离纯化紫锥菊提取物中免疫活性成分菊苣酸,7％(v／v)的甲醇-水溶液洗脱,HPLC法对产品中菊苣酸含量进行检测分析。该法能把紫锥菊提取物中菊苣酸含量(4％)提高9倍左右,回收率达到95％以上,且操作简单,可用于菊苣酸的分离纯化。     

含L-苹果酸单元功能聚酯的酶催化合成及表征

以脂肪酶Novozyme-435为催化剂,L-苹果酸、己二酸和1,8-辛二醇为单体,在不同有机溶剂中直接缩合聚合得到主链带羟基的线型功能性聚酯,对聚合物的结构和热性能进行了表征.不同有机溶剂不影响酶的选择性;引入L-苹果酸单元后,聚合物的结晶性能降低,热稳定性下降.     

奇异变形杆菌中基因岛介导的多重耐药传播研究进展

奇异变形杆菌是导致医院内感染的重要条件致病菌,广泛分布于自然环境及人和动物的肠道中。基因岛是细菌染色体上约10-200 kb独立的DNA片段,能促进宿主细菌适应复杂多变的环境,与细菌适应性进化密切相关。近年来在奇异变形杆菌基因组中发现了多个与多重耐药密切相关的基因岛,包括沙门菌基因岛1及其相关基因岛、SXT/R391整合性接合元件、PmGRI1等,表明基因岛在奇异变形杆菌多重耐药形成和传播中具有重要作用。本文对奇异变形杆菌中与耐药相关基因岛的结构特征、传播机制、流行情况等进行综述,以期为奇异变形杆菌中多重耐药相关基因岛的深入研究提供参考。     

F9-1胚胎癌细胞与大鼠胸腺细胞杂交产生分化细胞

利用抗8氮鸟嘌呤的F9-1 aza突变株细胞与大鼠胸腺细胞融合,在HAT培养基中成功地筛选到FRT杂交细胞。该种细胞与亲本细胞F9-1 aza的细胞形态完全不同,呈成纤维样、上皮样、圆形或多突起样的分化细胞形态。在扩大繁殖后主要为成纤维样或上皮样细胞。对其中一个集落FRT-1核型检查表明杂种细胞染色体众数为80(范围62—88),C分带显示??包含F9和大鼠胸腺细胞二个亲本的染色体。FRT-1细胞的乳酸脱氢酶图谱中出现由大鼠LDH-A亚基与小鼠LDH-A亚基组成的杂种酶带。该细胞接种到经x光照射的129/Sv-ter小鼠皮下不能长瘤,亦不能在软琼脂上生长,表明F9-1 aza细胞的恶性表型已受到大鼠胸腺细胞基因组的抑制。     

分子生物学技术讲座（一）：分子克隆的载体

自本世纪50年代初沃森（J．D．Watson）和克里克（F．Crick）提出关于DNA双螺旋模型学说以及70年代初期DNA限制性内切酶的发现和一整套DNA体外重组技术的建立,分子生物学技术以空前的速度蓬勃发展,建立了一套完整的技术体系,并在生命科学的各个研究领域得到广泛应用,成为不可取代的研究技术手段。同时,分子生物学技术已对农、林、牧、副、渔,食品,制药,化工,石油工业以及环境监测和保护等国民经济诸多领域产生深远的影响,为人类社会带来难以估量的社会效益和经济效益。本讲座将分子生物学技术分成几个专题进行介绍,首先介…     

分子生物学技术讲座（五）：放射性标记的DNA和RNA探针的制备

放射性标记的核酸探针（DNA和RNA探针）目前已被广泛地应用于分子生物学的各个领域,例如克隆的筛选,Southern杂交分析,基因表达水平的测定等等。放射性核酸分子探针是指特定的已知核酸分子片段,内含放射性核素（例：‘千、‘H和”S）,并能与被检测的核酸分子退火杂交（核酸序列互补）,因此可用于待测核酸样品中特定基因序列片段的探测。1探针的种类和选择根据核酸分子探针的来源及其性质可将其分成3大类,即：DNA探针、RNA探针和人工合成的寡聚核青酸探针。而DNA探针又可分为基因组DNA探针和。DNA探针。探针的选择是根据不…     

大连市城市生态系统发展趋势研究

在对大连市城市生态系统进行系统分析的基础上,用系统动力学和灰色系统等方法探讨了大连市城市生态系统在3种不同策略下的发展趋势,为大连市城市规划和发展提供了科学依据和对策.     

血液透析联合血液透析滤过对患者营养及微炎症指标的影响

目的:探讨血液透析(HD)联合血液透析滤过(HDF)对维持性血液透析(MHD)患者营养及微炎症指标的影响。方法:选择2005年12月到2014年12月在我院接受治疗的140例MHD患者,随机分为HD组(n=70)和HD+HDF组(n=70)。比较两组患者治疗前后营养不良-炎症评分(MIS)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、血红蛋白(Hb)、握力(HS)、肱三头肌皮褶厚度(TSF)的变化。结果:治疗后,HD+HDF组患者MIS明显降低,ALB、PA、Hb、HS、TSF明显升高(均P0.05),且各指标改善程度均优于HD组(均P0.05);治疗后,HD+HDF组患者相比于治疗前和HD组治疗后,CRP、IL-6明显降低(均P0.05)。结论:HD联合HDF较单纯HD能更好的改善患者营养状态,减轻微炎症反应。     

早期经皮气管切开治疗原发性脑干出血的临床效果

目的:探讨早期经皮气管切开治疗原发性脑干出血中的临床效果。方法:选择2012年8月至2015年6月我院ICU收治的原发性脑干出血患者125例,按患者行气管切开的时间分组,以早期行气管切开(发病5 d内)定为观察组,发病5 d后行气管切开的患者定为对照组,对比两组患者的治疗效果。结果:两组患者的性别、年龄、APACHEII评分、GCS评分、疾病构成方面对比无明显差异(P0.05);观察组患者气管切开时机为(2.6±0.8)d,低氧血症发生的次数(20.6±5.5)次,镇静药物用量(132.8±23.4)mg,抗生素使用时间(11.2±0.9)d,机械通气时间(153.5±82.4)h,HAP发生率44.6%,病死率23.1%,均明显优于对照组患者,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:早期气管切开有助于降低原发性脑干出血的死亡率,临床效果更好。