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人鼻咽与鼻咽癌及肺癌基因表达谱差异的研究 总被引:10,自引:0,他引:10
研究鼻咽癌、肺癌与正常鼻咽组织基因表达谱差异及筛选鼻咽癌相关基因,采用α- 32P逆转录标记组织总RNA,将cDNA探针与有5 184个基因或表达序列标签EST(expression sequence tag)的高密度cDNA微阵列GF200杂交,软件分析表达谱差异.结果发现三者均呈低表达为主的表达谱,密度值在200以上的基因及EST在鼻咽癌有110个,肺癌134个而鼻咽组织有158个;5个EST在鼻咽高表达但鼻咽癌低表达,3个EST在鼻咽癌高表达但正常鼻咽低表达.结果表明鼻咽癌与正常鼻咽及肺癌组织存在差异表达基因,可能还有新基因在鼻咽癌发生中起作用;采用高密度cDNA微阵列是一种筛选差异表达基因的快速有效方法. 相似文献
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采用代表性差异分析法(RDA)研究了银额果蝇两个单雌系AKM46(含B染色体)和AGZ2(不含B染色体)两基因组间的差异。用AKM46作检测(tester)扩增子,AGZ2作驱赶(driver)扩增子,通过三轮消减杂交后,获得了6个差异片段(100bp~300bp)。亚克隆后,对11个片段测序并与GenBank数据库进行同源性比较分析,获得了9个新的序列。选择clone22及clone42进行Southern杂交分析,这两个片段仅在检测扩增子及第一、第二、第三轮差异片段中检测到杂交信号,而在驱赶扩增子检测不到杂交信号。证实了这两个片段来自含有B染色体的单雌系AKM46,而且可能是B染色体上的特异基因片段。 相似文献
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EB病毒不能感染小鼠是因为小鼠CR2受体构像与人的不同,通过对小鼠CR2受体进行定点空变,然后将野生型和突变型小鼠CR2/1(MCR2/1)及人CR2(hCR2)用基因转移技术导入小鼠鼻咽上皮细胞系(TMNE)进行表达,观察转染阳性细胞是否具有结合EB病毒的能力,EBER-1杂交结果显示,只有转染hCR2和空变型MCR2(mtMCR2)的TMNE细胞可以感染EB病毒,但是前感染EB病毒的阳性率比后高的高得多。电镜结果也进一步证实EB病毒可以感染这两种细胞,这为进一步研究EB病毒进入细胞的机制及建立EB病毒相关的鼻咽癌动物模型奠定了良好的基础。 相似文献
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本文报道以人Epstein-Barr病毒的潜代膜蛋白基因BNLF-1作为目标基因,插入至逆转录病毒载体pZipNeoSV(x)的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体pZipNeoSV(x)-LMP及其反义载体pZipNeoSV(x)-anti-LMP,通过质粒DNA的电转染和G418培养基筛选,然后对10个抗性克隆进行基因整合分析、获得6个含MLV-LTR/BVLF-1融合基因的阳性克隆,采用N 相似文献
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cDNA RDA法克隆小鼠鼻咽部组织特异性表达基因 总被引:3,自引:1,他引:2
采用cDNA代表性差异分析法(cDNA RDA)克隆小鼠鼻咽部组织特异性表达基因。通过三轮消减杂交后,获得了七个差异片段。随机选择两个差异片段TDP1和TDP4,经DNA印迹和RNA印迹证实了TDP1在鼻咽部特异性表达,而TDP4在鼻咽部及食道均有表达,并没有特异性。进一步对这两片段测序分析,并与Gen-Bank等数据库同源比较,推测TDP1和TDP4是两个新的基因片段,但是仅TDP1在小鼠鼻咽部 相似文献
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EB病毒(EBV)是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒.已往的研究表明,潜伏膜蛋白(LMP)基因是EBV最可能的致瘤基因.为制备LMP基因转基因小鼠,探讨LMP的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白-1(MT-1)基因调控区和LMP基因编码区的pBR322-MT-LMP质粒,并用电击法将该质粒与pKJ1-Neo质粒共转染人胃癌细胞株MGC,对MT-LMP基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究.结果表明:(1)两质粒共转染效率为86.7%;(2)PCR和Southern杂交分析显示,完整的MT-LMP基因已整合入转染的MGC细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,MT-LMP基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从1到19不等;(3)RT-PCR和Northern杂交分析证实,MT-LMP基因不仅在转染的MGC中能够转录,而且在10μmol/L镉诱导下,MT-LMP基因转录增强,平均增高约1.4倍.结果说明,在MT-1基因调控区指导下,LMP基因不但有mRNA水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备MT-LMP转基因小鼠 相似文献
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对鼻咽癌恶性转化基因Tx表达的初步研究 总被引:9,自引:1,他引:8
运用杂交组化及Northern法,对中国人鼻咽癌细胞株恶性转化基因Tx的表达进行了初步研究。结果表明该基因在鼻咽癌细胞株中表达1.3kbmRNA,但表达强度较低,在HPV阳性或阴性人宫颈癌细胞中均无表达,EBV阴性的B淋巴细胞系及HTLV-1阳性的T细胞系中为阴性,而在EBV阳性的B95-8及Raji细胞中Tx基因表达强烈,从而提示HPV及HTLV-1不增强Tx的表达水平,而EBV可能使Tx基因活化.这为进一步研究EBV与Tx等瘤基因协同作用提供了新的依据。 相似文献
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一种检测人中期染色体原位切口移位的新方法 总被引:3,自引:2,他引:1
本研究首次详细描述了在BrdU替代4个细胞周期以上的中期染色体上进行原位染色体切口移位的方法。研究证明,切口移位效率达峰值的最适温度为15—20℃,最佳时间为10—15分钟,DNasc Ⅰ的最佳浓度为2ng/ml。用本方法进行的人外周血淋巴细胞染色体的原位切口移位带型表明,原位切口移位的染色体带型特征与已知的G带、R带有较明显的差异,是另一种新的带型。本方法较用’H-dTTP或Bio-dUTP作标记物进行染色体原位切口移位更简便、快速,不仅可用于活性基因在不同种类基因组内的分布研究,而且可能在细胞遗传学和分子生物学研究中具有更广泛的用途。 相似文献
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肿瘤内环境与肿瘤的发生密切相关.肿瘤细胞周围的组织在癌变发生时不会是一个沉默的旁观者,可能在肿瘤的发生和发展中扮演十分重要的角色.本研究分别采用不同的磁珠分选技术分离T淋巴细胞.采用CK LMP1,CD105和成纤维细胞表面蛋白,结合全血总T细胞试剂盒,间接法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞;采用CD3直接磁分选法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞,然后用免疫组化法鉴定分选的效果和细胞的质量.结果表明,免疫组化显示间接磁分选法分离出来的T淋巴细胞不能完全去除肿瘤细胞,RNA的质量不佳;而直接磁分选分离出来的T淋巴细胞为纯净的T淋巴细胞,而且RNA的质量良好.提示直接磁分选技术是分离鼻咽癌基质T淋巴细胞的首选方法. 相似文献
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