多荧光标记引物增强甘蔗染色体寡聚核苷酸探针杂交信号

荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization, FISH）是植物分子细胞遗传学研究最为重要的手段之一。近些年,基于参考基因组设计的低拷贝寡聚核苷酸探针在FISH中应用得越来越广泛。然而,由于植物基因组中分布大量的重复序列,这使得oligo-FISH的分辨率存在一定局限性。利用包含多个荧光基团的荧光PCR引物,扩增出甘蔗染色体特异oligo探针,并进一步优化甘蔗的荧光原位杂交体系,提高了甘蔗oligo探针识别近缘物种染色体的效率。通过开发多荧光标记的甘蔗oligo探针以及甘蔗荧光杂交体系的优化,有效拓宽荧光信号的最小分辨率,提高信噪比（signal-to-noise ratio, SNR）,并成功基于甘蔗oligo探针对高粱1-10号染色体分型。多荧光标记引物增强oligo探针信号的新方法及FISH体系的优化为今后在其他物种中提高oligo-FISH鉴定染色体及捕捉微弱的荧光信号提供了参考。     

基于转录组的甘蔗PPR基因家族的鉴定及表达分析

本研究基于甘蔗花叶病毒(sugarcane mosaic virus, SCMV)侵染甘蔗(Saccharum spp.)健康幼嫩叶部转录组数据,运用生物信息学方法在甘蔗基因组中鉴定了196个甘蔗三角状五肽重复蛋白(sugarcane penta-tricopeptide repeat protein, ScPPR)家族基因,并对该家族成员蛋白的基本理化信息、亚细胞定位、保守基序、系统进化树和转录组表达量等进行分析和RT-qPCR验证。分析结果表明,甘蔗中包含有196个ScPPR基因家族成员,其编码蛋白质含有52～1 293个氨基酸,分子量为5 897～144 174 kDa,理论等电点范围为4.70～10.54;对ScPPR家族成员亚细胞定位预测分析结果表明大多数成员定位于叶绿体和细胞核中;系统进化关系分析表明ScPPR基因家族分为GroupⅠ和GroupⅡ;对甘蔗转录组的基因表达分析表明ScPPR2、ScPPR48、ScPPR54、ScPPR58、ScPPR151、ScPPR165、ScPPR168、ScPPR184的基因表达量有显著差异。利用RT-qPCR实验进行验证,其中ScP...     

脑Willis环循环分析专用软件研制Ⅰ．软件功能介绍

脑血管疾病是严重危害人类健康的常见病。大量实验及临床研究表明．许多患者在发病前期．其循环动力学状态已有显著变化,因此为了适应于临床检测和大规模人群普查,有必要编制一套基于Win95／Win98平台上的专用软件,用于实时检测与分析脑血管动力学参数,使它成为早期诊断有价值的指标。本文描述了该软件的流程和各模块的功能,有关临床实际应用将在后续文章中叙述。     

重组逆转录病毒介导的转蚓激酶基因兔

目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清直接注射雄性兔的睾丸组织转染精原干细胞。结果病毒上清经NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。病毒注射3月龄兔睾丸组织,过1.5个月取其睾丸、肾、脾、肝、肺进行组织切片观察,结果正常。提取交配所得F0、F1代仔兔基因组,经PCR、Southern检测,转基因阳性率F0代为6.3%(2/32)、F1代为15.3%(2/13)。结论通过重组逆转录病毒直接注射3月龄兔睾丸组织可获得转基因兔,病毒对兔的脏器无损害。     

2012年大连市流行性角结膜炎疫情的病原鉴定与基因特征分析

目的 鉴定一起大连市流行性角结膜炎疫情的病原体及型别.方法 采用荧光PCR方法针对30份眼拭标本进行检测,确定病原,并针对特定片段扩增产物测序进行分子定型.结果 21份标本荧光PCR检测结果为腺病毒阳性,核苷酸序列与人腺病毒15、29、56及其重组型高度同源,多重序列比对后构建的系统进化树上与人腺病毒56及其重组型位于同一分支.结论 本次疫情的致病病原为D亚属人腺病毒,疑为人腺病毒56型或其重组型.后续需要开展对五邻体(Penton)及纤突(Fi-ber)基因的全核苷酸序列测定及生物信息学分析最终确定型别.     

应用重定向超速区带离心法纯化HBsAg的研究

采用重定向超速区带离心法进行了从乙肝阳性血清中提纯ＨＢｓＡｇ的研究，获得了一套最佳离心条件，可清除阳性血清中的各种杂蛋白，获得不含乙肝病毒（Ｄａｎｅ颗粒）的纯ＨＢｓＡｇ。此方法具有离心时间短、不漏液、故障少及成本低等优点。本试验结果为采用重定向超速区带离心法大规模纯化ＨＢｓＡｇ、基因工程表达产物及其它生物大分子蛋白提供了实验依据     

地高辛标记探针检测生物制品中残余DNA含量

用地高辛标记探针检测由传代细胞系生产的人用精制狂犬病疫苗,重组（CHO细胞）乙肝疫苗,出血热疫苗及痢疾多糖结合疫苗原液中残余DNA含量。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,可用于上述生物制品中残余DNA含量的检测。     

不同调控序列作用下GUS基因在烟草中瞬时表达活性

以pB1121为出发质粒,利用烟草泛素启动子Ubi．U4、CaMV35S启动子以及Kozak序列构建4种GUS基因表达载体,通过叶盘转化法转化烟草叶片,检测瞬时表达活性,研究不同调控序列对外源基因表达的调控作用。结果表明：CaMV35S启动子附加Kozak序列后使GUS活性比独立使用CaMV35S提高了近2倍：双CaMV35S启动子附加Kozak序列驱动GUS基因的表达活性与单CaMV35S附加Kozak序列相当;烟草泛素启动子附加Kozak序列的表达活性为CaMV35S启动子附加Kozak序列的1．5倍;Ubi．U4-CaMV35S复合启动子附加Kozak序列驱动GUS基因表达水平最高,其表达效率是双CaMV35S启动子附加Kozak序列调控下GUS表达效率的3倍,为CaMV35S独立作用时的10倍。     

非侵入性超声测定狗的心输出量

本文介绍了应用二尖瓣和主动脉根部的回声图测定狗的心输出量,并用染料(伊文氏蓝)稀释法对照。每搏输出量按下列 Lalani公式计算:Q=V·α·LVET,V 为收缩期二尖瓣前叶回声图的关闭斜率,假设该斜率代表主动脉腔内血液的平均流速;α为主动脉根部的横截面积;LVET 为左室射血时间;Q 为每搏输出量。在8条狗的实验中,超声测定心输出量共13次,其中10次有染料稀释法对照。用超声法观察到狗的每搏输出量为9.1～24.7毫升,平均为14.2±5毫升,每分输出量为1662～3087毫升,平均为2258±414毫升。超声和染料稀释法所测得的每分输出量,两者密切相关(r=0.856,P<0.01,n=10)。心输出量是心功能的重要指标之一,非侵入性准确地测定心输出量,将给临床工作者监视患者心功能的变化,从而采取必要的临床措施提供方便,也给生理和药理工作者进一步研究心血管功能提供一个很重要的观察指标。1976年 Lalani 等在临床上应用超声记录二尖瓣和主动脉根部的回声图来推算心输出量,并用 Fick 直接法对照,获得两者的相关系数为0.9(n=34)。本实验试图利用这一超声方法对狗进行研究,用染料(伊文氏蓝)稀释法对照,计算两者的相关系数。     

四价流感病毒裂解疫苗安全性及免疫原性研究

目的探讨四价流感病毒裂解疫苗(quadrivalent influenza vaccine,QIV)的安全性和有效性。方法用WHO当年推荐的A1型、A3型和2株B型流行性感冒病毒株制备QIV,按照企业注册标准及《中华人民共和国药典》2015版(三部)的要求全面检定后进行毒理试验和免疫原性试验。结果毒理试验结果显示,QIV在动物中未见有害作用的剂量为15μg/株;免疫原性试验结果显示,免疫效果完全能够达到或超过三价流感病毒裂解疫苗(trivalent influenza vaccine,TIV)的免疫效果,且QIV所特有的B2亚型,除最低剂量外,小鼠的血凝抑制抗体(hemagglutination inhibition,HI)滴度均超过了1∶40的阳性水平。结论本试验条件下QIV在动物中具有良好的安全性和免疫原性。