慢病毒介导的HTRA1 基因稳定过表达人脑血管平滑肌细胞株的建立

目的:构建并包装针对HTRA1基因以及其1091TC突变基因(HTRA1-Mut)的过表达慢病毒载体,以及建立稳定表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)株。方法:采用RT-PCR方法扩增HTRA1及HTRA1-Mut基因片段并将其连接于GV287载体质粒,采用慢病毒包装三质粒系统(GV287/p Helper 1.0/p Helper 2.0)转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液并标定病毒滴度,慢病毒感染经培养和鉴定的HBVSMC细胞株。结果:成功构建含HTRA1及HTRA1-Mut基因的慢病毒重组载体,PCR鉴定阳性的克隆进行测序和BLAST比对分析显示与源基因序列一致,并能够有效的感染并在293T细胞中表达。表达载体包装后测定病毒滴度为:2E+8 TU/mL。过表达慢病毒感染后HBVSMC有荧光表达,并且荧光率达80%以上,细胞生长良好传后细胞几乎无死亡现象。结论:成功构建了过表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的慢病毒表达载体,得到了较高滴度的病毒悬液,建成了稳定表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的HBVSMC细胞株,为进一步探讨HTRA1基因及突变后细胞的功能变化提供了良好的研究工具。     

保守治疗颈性眩晕的研究进展

颈性眩晕是指因颈源性因素引起的以眩晕为主的综合征,多发于40岁以上,患病率非常高,临床表现为眩晕、颈头痛、耳鸣、耳聋、眼球震颤、恶心、呕吐、肩背痛、心悸、出汗等,症状不但复杂,而且不典型,患者常同时患耳鼻喉科与神经内科的疾病。研究表明,50岁以上的眩晕患者中,约50%为颈性眩晕,其伴随症状的复杂性和高患病率严重影响了患者的健康和生活。目前,颈性眩晕的发病机制、诊断标准、治疗方法仍未完全明确,常造成误诊、误治,且尚无一种治疗手段能够彻底治愈此病。手术治疗此病较少,临床多以保守治疗为主,包括手法推拿按摩治疗、牵引治疗、针灸及理疗以及中、西医药治疗、神经阻滞治疗等。本文主要对保守治疗颈性眩晕的研究进展进行了综述。     

辩证唯物主义的重大胜利——人工合成蛋白质的哲学意义

近百年来,不少科学家费尽心思探索合成蛋白质,由于没有成功的事例,成了自然科学中的一个“神秘领域”。1965年,我国科技人员遵循毛主席的教导,在辩证唯物主义指导下,走自己的科学研究道路,首次人工合成胰岛素,闯进了这个“神秘领域”。在无产阶级文化大革命的推动下,又成功地对胰岛素晶体结构作了测定。它标志着人工合成蛋白质时代已经开始了。继我国之后,其他国家也合成了几种蛋白质。近几年来,我国和一些国家又开始进行人工合成核酸的研究。人类在人工合成生命物质的漫长征途上已迈进了一大步。这是辩证唯物主义的重大胜利。它有力地批判了邓小平和科技界不肯改悔的走资派散布的奇谈怪论。     

斜带石斑鱼MyD88基因的原核表达及蛋白纯化简

正Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一类重要的模式识别受体,其胞外结构域可识别特定的病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),胞内的TIR(Toll-like/IL-1 receptor)结构域则参与启动胞内信号转导,诱导细胞产生活性氧中间体(Reactive oxygen intermediate)、活性氮中间体(Reactive nitrogen intermediate)和促炎症因子,在感染早期发挥重要作用[1]。在哺乳动物中,髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor     

毛头鬼伞子实体中甾类化合物的结构鉴定及其抑制肿瘤细胞增殖活性的研究

从毛头鬼伞子实体中分离得到4个甾类化合物,通过波谱分析,分别鉴定为麦角甾醇(1)、啤酒甾醇(2)、麦角甾醇葡萄糖甙(3)和tuberoside(4)。4个化合物均为首次从毛头鬼伞中得到。通过体外细胞毒性筛选试验,结果表明化合物4有较强的抑制人乳腺癌细胞MCF-7和狗肾细胞MDCK增殖的活性,其抑制增殖的IC50值分别为10.9μg/mL(18.4μmol/L)和5.8μg/mL(9.8μmol/L)。化合物3对MCF-7和MDCK的抑制作用则较弱,当其浓度为10.0μg/mL(17.9μmol/L)时,对MCF-7和MDCK的增殖抑制率分别为12.5%和7.5%。     

膜技术纯化菊花总黄酮的工艺研究

研究膜分离技术分离纯化菊花黄酮的工艺,以菊花总黄酮纯度和操作过程稳定性为评价指标,采用膜分离技术对菊花提取液进行处理,对膜的规格、溶液温度、操作压力和操作时间进行了优选。结果表明:选择孔径0.5μm无机陶瓷膜,在溶液温度50℃、操作压力0.25 MPa条件下,微滤180 min能达到较好地除杂和澄清的效果;选择截留分子量为8×103的超滤膜,在溶液温度40℃、操作压力1.6 MPa条件下,超滤120 min,总黄酮纯度为19.81%。采用膜技术纯化菊花总黄酮的工艺操作简单,纯化效果高。     

光子中医信息疗法

本文简述了弱激光血疗的机理及其发展过程,并在此基础上详细阐述了我们自己提出的光子中医信息疗法。该疗法根据中医辨证施治的原则,选用经中医信息调制的半导体激光束照射患者口咽部（或鼻腔）和与疾病关联的穴位,综合激光血疗、激光针疗和激光理疗,可引发多种激光生物效应,启动人体生理功能的整体调节机制,逐渐改善和恢复生理功能。除此之外,我们还设计研制了相应的治疗仪器。     

cDNA微阵列技术研究NaHCO3胁迫下星星草基因表达谱

为研究NaHCO3胁迫下星星草基因的表达,分别将荧光染料Cy5-dCTP和Cy3-dCTP用反转录方法标记在处理和对照星星草cDNA上制成探针,并与载有星星草基因的cDNA芯片进行杂交。通过对芯片的杂交信号强度分析来研究基因的表达情况。分析结果显示,共有25个基因在NaHCO3胁迫处理前后差异表达,其中17个基因在NaHCO3胁迫下表达下调,8个基因在NaHCO3胁迫下表达上调。生物信息学分析表明这些基因的功能涉及了信号传导与转录调控、细胞防御、细胞代谢等多个方面。从而获得了NaHCO3胁迫下星星草的基因表达谱,定量地阐述了NaHCO3胁迫和非胁迫条件下星星草基因的差异表达情况。     

一种作用于花青素和甜菊醇的甜菊糖基转移酶的基因克隆和功能分析

本文对一种新的甜菊糖基转移酶进行了基因克隆和功能分析。获得的基因cDNA全长1419bp,编码473个氨基酸,蛋白质分子量约53．2KDa。与常见的糖基转移酶基因比较,相似性达44％以上,工具有糖基转移酶的保守序列。体外异源表达获得的融合蛋白,具有在花青素类和甜菊醇等糖基受体上转糖基的酶活性。在对一系列不同底物的酶活性进行比较后,推测这种糖基转移酶在体内参与了甜菊糖苷的合成。结果表明,具有广泛的底物活性的类黄酮类糖基转移酶,在甜菊体内不仅对类黄酮转糖基,而且在生成水溶性甜菊糖苷的过程中也扮演重要的角色。     

一种作用于花青素和甜菊醇的甜菊糖基转移酶的基因克隆和功能分析

本文对一种新的甜菊糖基转移酶进行了基因克隆和功能分析。获得的基因cDNA全长1419bp,编码473个氨基酸,蛋白质分子量约53.2K Da。与常见的糖基转移酶基因比较,相似性达44%以上,且具有糖基转移酶的保守序列。体外异源表达获得的融合蛋白,具有在花青素类和甜菊醇等糖基受体上转糖基的酶活性。在对一系列不同底物的酶活性进行比较后,推测这种糖基转移酶在体内参与了甜菊糖苷的合成。结果表明,具有广泛的底物活性的类黄酮类糖基转移酶,在甜菊体内不仅对类黄酮转糖基,而且在生成水溶性甜菊糖苷的过程中也扮演重要的角色。