文采唇柱苣苔的组织培养与快速繁殖

以肉质叶为外植体,研究文采唇柱苣苔的组织培养和快速繁殖。结果表明：培养基MS＋6-BA 0.1 mg？L-1＋NAA 0.1mg？L-1适用于初代培养时的愈伤组织诱导和植株再生;MS＋6-BA 0.5 mg？L-1＋NAA 0.2 mg？L-1＋10%香蕉泥和MS＋6-BA 0.5mg？L-1＋NAA 0.5 mg？L-1＋10%香蕉泥分别适用于继代增殖及壮苗培养,60 d后的增殖系数分别为6.7和4.8;培养基MS适用于生根培养,培养30 d,生根率达100%。另外,对文采唇柱苣苔生根试管苗进行大棚移栽,移栽成活率约为94%。     

香味菌临床分离株耐药谱分析

目的回顾性分析本院临床分离的香味菌的药物敏感情况,指导临床合理使用抗生素。方法收集本院2012年1月至2013年12月期间临床分离的香味菌,采用法国生物梅里埃公司的全自动微生物分析仪VITEK-2进行菌株鉴定,以及VITEK-2配套药敏试验复合板进行药敏检测,分析其耐药谱。结果共收集了8株香味菌,且均呈现多重耐药谱。对头孢菌素类抗生素的耐药率很高,特别是对头孢唑林、头孢他啶、头孢曲松的耐药率均为100%。对氨曲南和呋喃妥因的耐药率均为100%。对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的非敏感率达到87.5%。而耐药率最低的左旋氧氟沙星为37.5%。结论本院分离的香味菌呈现多重耐药谱,需对其耐药机制进一步研究。     

建立新生大鼠吸入麻醉模型及异氟醚对其海马凋亡的影响

目的:建立新生大鼠吸入麻醉模型并探讨吸入麻醉药异氟醚对其海马凋亡的影响。方法:Penlon Prima SP麻醉机、异氟醚挥发罐及自制带进出气口的麻醉小室。共55只7日龄的SD大鼠用于实验。将其中35只大鼠随机分为7组(n=5)。实验组(Ⅰ-Ⅵ组)异氟醚挥发罐刻度分别为0.125%,0.25%,0.5%,1%,1.5%,2%;新生大鼠置于自制密封麻醉小室内,分别通入含上述异氟醚浓度的混合气体。对照组(第Ⅶ组)给予未混合异氟醚的30%的氧气。将小室安放于37℃恒温箱内。调节气体流量2L/min。实验组于通入气体5,10,15,30,90,180,360 min(T1-7)时于小室出口处抽取10mL气体,采用气相色谱法测定麻醉小室内异氟醚浓度。于通入气体360 min(T7)自新生大鼠左心室采血行血气分析;另取SD大鼠20只,随机分为对照组(C组,n=10),1.5%异氟醚组(I组,n=10),按上述方法建立异氟醚吸入麻醉模型,麻醉结束后2h处死大鼠,采用免疫组织化学法观察C组和I组大鼠大脑海马区Active caspase-3的表达。结果:①麻醉小室出口异氟醚浓度(Y)与麻醉机挥发罐异氟醚浓度(X)的直线回归方程为Y=1.5472X-0.0575(r=0.9993)。②血气分析结果显示:Ⅰ-Ⅵ组与Ⅶ组血气分析组间差异无统计学意义(P0.05)。③免疫组化结果显示:与C组相比,I组大鼠海马Active caspase-3明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论:通过麻醉机、异氟醚挥发罐及自制密封带进出气口的麻醉小室成功建立了新生大鼠异氟醚麻醉模型;为进一步研究异氟醚及相关吸入麻醉药对突触发生期的神经毒性提供了实验基础。     

外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆

DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一, 已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3′-5′外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆（ligation-independent cloning, LIC）|证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、反应时间、片段载体比例和量等多个参数进行了优化,建立了一种快速、简便和高效的DNA克隆方法。     

抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体的表达、鉴定及活性分析

设计并合成多个60bp左右的DNA小片段 ,经重叠延伸PCR扩增获得1640bp的抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体完整基因片段 ,将其克隆入真核定点表达载体pcDNA5 FRT中 ,脂质体法转染Flp-In^TM CHO细胞 ,获得稳定表达细胞株 ,目的蛋白在上清中的表达量约为 300μg/L。采用Ni_NTA柱对其进行了纯化 ,经SDS-PAGE蛋白电泳及Western-blot分析结果表明 ,含组氨酸标签的目的蛋白的分子量约为 70kD ,与预期结果一致。活细胞间接免疫荧光实验和玫瑰花环实验证明抗CD3抗CD20双特异性单链抗体具有与Ramous(CD20+)及Jurkat(CD3+)细胞特异性结合的活性。光学显微镜下可以观察到抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体可以有效介导人外周血淋巴细胞裂解B淋巴瘤细胞Ramous。以上工作为进一步了解抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体的体内体外生物学活性奠定了基础。     

中国猕猴预存抗腺病毒中和抗体滴度对腺病毒体外感染单核细胞效率的影响

为了探索通过血液系统利用重组腺病毒载体的方法,以中国猕猴为动物模型,以复制缺陷型人5型腺病毒(human adenovirus serotype 5,HAd5)为载体携带报告基因在体外直接感染外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMC).首先对HAd5在体外感染PBMC的条件进行优化,证实离心力可提高HAd5的感染效率;细胞分群结果表明HAd5特异感染PBMC中的CD14 单核细胞,仅感染小部分自然杀伤细胞,但几乎不感染T淋巴细胞和B淋巴细胞.首次发现:猕猴体内预先存在的抗HAd5中和抗体滴度越高,其单核细胞在体外对HAd5的易感性越强.这种现象将拓宽基于腺病毒载体的基因治疗和疫苗的临床应用范围,尤其是对预先存在腺病毒中和抗体的人群更具意义,为探索更方便有效的基因治疗和疫苗研究带来新的思考.     

磁化矿泉水对细菌影响的实验观察

本采用Al-3型低频电磁综合治疗机输出的交变电磁场,分不同的时间对兴城矿泉水磁化后,观察对金黄色葡萄球菌的影响,并对比了用同法磁化海水和自来水的抑菌情况。结果：磁化90,120,150和180分钟的矿泉水及磁化120,150,180分钟的海水均有轻度抑菌作用,以矿泉水组较为明显,磁化30和60分钟的矿泉水,磁化30-90分钟的海水及磁化30-180分钟的自来水均无抑菌作用。结果表明：磁化水的抑菌作用与水的离子浓度和磁处理时间有关,提示在应用磁化矿泉水治疗炎性疾病时,用低频交变电磁场处理90-180分钟为宜。     

丝瓜籽中一种具有翻译抑制活性和胰蛋白酶抑制剂活性的多肽——Luffin P1的纯化和性质

通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、蓝胶亲和层析和FPLCMonoS阳离子交换层析 ,从丝瓜籽抽提液中分离到一种多肽luffinP1。经MALDI TOFMS测得其分子量为 5 2 2 6 .5。氨基酸序列测定及同源性分析发现 ,luffinP1的N端 11个氨基酸序列与丝瓜籽中的一种 6 .5K富含Arg Glu的多肽AGRP的部分序列相同 ,并与南瓜籽中一种胰蛋白酶抑制剂C2肽具有很高的同源性。体外分析表明 ,luffinP1同时具有两种生物活性 :(1)对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 0 .6nmol L ;(2 )具有明显的胰蛋白酶抑制活性 ,IC50 为 2 2 μmol L。     

苯二氮卓化合物F89对高邮鸭增重及血清GH和IGF-1水平的影响

89属于苯二氮卓类化合物 (Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｓ,ＢＺｓ) ,自七十年代发现这类化合物能够促进动物的食欲 ,并且具有剂量小、效应强、有效剂量范围宽、无副作用等优点以来 ,其促摄食作用一直备受人们的关注。以往的研究证明Ｆ89不仅具有显著的促进食欲作用 ,而且不降低消化率 ,明显提高动物的生长速度 ,但是Ｆ89的作用具有种属差异 ,即使同种属中不同品种或品系的动物也会呈现不同的效应。本研究以生长速度快的高邮鸭为对象来观察Ｆ89对其增重的影响 ,并采用外周注射Ｆ89的方法 ,与生长速度慢的绍兴鸭进行比较 ,观察Ｆ89对鸭作用是…