随机引物在分子生物学研究中的应用

随机引物指非特异序列的寡聚核苷酸作为DNA合成过程中的引物, 是相对于特异引物的概念.90年代它与PCR技术结合衍生了几项新技术:采用不同长度随机引物进行DNA指纹分析而衍生出的RAPD、AP-PCR及DAF方法; 进行mRNA多态分析的“差异显示”; 以及rPCR, T-PCR等技术. 以RAPD为例介绍了随机引物PCR的技术特点及其在分子生物学研究中的应用.     

帕金森病相关蛋白质LRRK2在脑中的表达分布与定位分析

帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2 (leucine-rich repeat kinase 2)基因突变引起.原核表达和纯化得到LRRK2多肽与GST的融合蛋白,免疫新西兰雄兔,得到了anti-LRRK2兔多克隆抗体. 抗体用途分析实验表明,自制的anti-LRRK2兔多克隆抗体可用于Western 印迹, 免疫组织化学,免疫细胞染色等实验.利用自制的抗体,Western 印迹证明,LRRK2在大鼠脑主要神经解剖学部位均有表达.免疫荧光双染色的结果表明,LRRK2定位于线粒体.本研究对了解LRRK2在PD中的分子生物学功能具有重要的意义.     

胎膜组织贴壁细胞：一种新的间质干细胞来源

[目的] 建立体外分离纯化胎膜组织贴壁细胞（fetal membrane derived adherent cells,FMDACs）的方法,并且研究FMDACs的基本生物学特性。[方法] 用胰酶消化法分离FMDACs,体外传代培养,并进行向成骨、成脂细胞的诱导分化培养,流式细胞仪、免疫细胞化学检测表面抗原,核型分析及致瘤性实验。[结果] 成功地进行了FMDACs的原代培养及传代培养,FMDACs具有良好的增殖能力,表达CD44、CD29,不表达CD34、CD14、CD45,经诱导后能够分化为成骨细胞和成脂细胞,传代多次后核型正常,无致瘤性。[结论] 胎膜组织中可以分离得到具有间质干细胞特性的贴壁细胞,具有较强的自我更新和多向分化能力,遗传背景稳定无致瘤性。FMDACs为临床应用进行细胞治疗和基因治疗提供了新的来源。     

1200条带阶段的人类染色体高分辨带性模式图

本文分析了来自10名正常个体的20个处于1200条带阶段的高分辨G带分裂相。根据显微镜下和照片的观察测量结果,在ISCN（1985）850条带染色体模式图基础上绘制了1200条带阶段的人类染色体高分辨带型模式图。     

人类人工染色体构建及其作为基因载体的价值

人类人工染色体（ＨＡＣ）作为基因载体将解决基因治疗存在的一些关键问题。本文探讨了在不完全了解着丝粒、复制起始点、端粒等人类以体基本功能单位的情况下构建ＨＡＣ的三种策略。利用染色体基本功能单位在细胞内构建成功的第一代ＨＡＣ,解决了ＨＡＣ构建的一些难题,同时也带来了某些新的问题。ＨＡＣ作为基因治疗载体具有很多优势,但第一代ＨＡＣ离它作为基因治疗载体还相距很远．为此,作者正在进行解决这些问题的尝试。     

微卫星荧光标记基因组扫描

微卫星荧光标记基因组扫描为 2 0世纪 90年代发展起来的一项分子生物学技术 ,在基因定位、个体识别等方面有广泛的应用 .文中对其原理、策略、分析方法及应用作了论述 ,并探讨了它的发展前景 .     

一个先天性眼球震颤家系致病基因的初步定位

为确定一个X染色体显性遗传先天性眼球震颤家系的致病基因与X染色体的连锁关系, 选用X染色体上的DXS1214、DXS1068、DXS993、DXS8035、DXS1047、DXS8033、DXS1192和DXS1232共8个微卫星DNA标记对该家系进行基因扫描与基因分型,并利用LINKAGE等软件包对基因分型结果进行分析,探讨该家系致病基因与X染色体的连锁关系。 两点连锁分析时X染色体短臂4个基因座最大LOD值均小于-1,不支持与该家系致病基因连锁; X染色体长臂4个基因座中最大LOD值达到2,提示存在较大的连锁可能性。该家系的致病基因可初步定位于X染色体长臂,且提示Xq26-Xq28区间附近可能是先天性眼球震颤一个共同的致病基因座,但区间范围仍较大,仍须进一步选择合适的微卫星标记进行精确的定位以缩小候选基因的筛查范围。Abstract： To investigate the relationship between X chromosome and obligatory gene of a pedigree with congenital nystagmus,we used the following markers: DXS1214、DXS1068、DXS993、DXS8035、DXS1047、DXS8033、DXS1192 and DXS1232.Genome screening and genotyping were conducted in this pedigree of congenital nystagmus, and linkage analysis by LINKAGE package was used to determine the potential location. The linkage was not found on the Xp ( All LOD score <-1) but on Xq (the maximum LOD score=2). The related gene of this pedigree was located on the long arm of X chromosome. We demonstrate that Xq26-Xq28 is a common locus for CMN. It bring us closer to the identification of a gene responsible for X-linked CMN.     

两个常染色体显性遗传寻常性鱼鳞病家系致病基因的定位

为了对寻常性鱼鳞病的致病基因进行定位, 收集了2个湖南寻常性鱼鳞病家系, 采集外周血, 提取基因组DNA, 采用1号染色体和10号染色体上2个已知寻常性鱼鳞病位点的微卫星标记对这两个家系进行基因分型和连锁分析。结果显示, 寻常性鱼鳞病家系1的致病基因位于D1S498(1q21)附近, 与已知定位区间重叠; 寻常性鱼鳞病家系2的致病基因位点与已知的寻常性鱼鳞病位点不连锁, 可能存在新的致病基因位点。     

基因药物的前沿技术

基因药物的直接体内基因治疗发展迅速,新型基因药物不断产生。本文讨论了效果比较肯定的基因疫苗、反义ＲＮＡ药物、三链ＤＮＡ药物这三种新型基因药物技术的基本方法。分析了它们各自存在的优点和问题,并介绍了它们的应用范围及应用研究进展。     

真核生物中基因打靶的策略

本文综述了真核生物中应用较为广泛且较为有效的基因打靶策略,并且比较了这几种策略的优缺点,对新近发展起来的组织特异性基因打靶和可诱导的基因打把策略也作了介绍在打靶在人类遗传病动物模型的构建,基因治疗和基因功能研究方面都有着重要的作用。