汕头牛田洋沿海围垦区锯缘青蟹病害爆发的环境因素

锯缘青蟹(Scylla serrata)是汕头市的传统特色和优势养殖品种,也是拥有3万多亩海水养殖池塘的牛田洋围垦区的主养品种。近年来,每年9-11月份,牛田洋的青蟹病害严重,经济损失较大。为探讨青蟹发病与养殖环境的关系,于2007年4月至12月份对牛田洋养殖区的水体理化因子和生物因子进行连续监测研究,结果发现:各因子呈现出明显的季节性变化。在发病前的7-8月份,青蟹处于较高水温(≥28℃)和较低盐度(≤6)环境中。在发病期(9-11月份),各种环境因子恶化,其中铵态氮(NH4+-N)和亚硝态氮(NO2--N)在9月份达到峰值,分别为235.63μg·L-1和27.75μg·L-1;硝态氮(NO3--N)(10.85μg·L-1)、无机磷(PO34—P)(39μg·L-1)及生物因子(水体异养菌157.93×105cfu·L-1、弧菌116.75×103cfu·L-1,干重底泥异养菌157.93×105cfu·g-1、弧菌141.65×103cfu·g-1)在10月份达到峰值。结果说明:水体理化因子的恶化和条件致病微生物的大量增生是青蟹病害爆发的重要原因。     

麋鹿血液cDNA文库的构建

为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol 试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA 纯化试剂盒纯化后,根据Stratagene 公司的cDNA 文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA 文库。初始文库滴度为1.96 ×106 pfu/ ml,总库容为1.96 ×106 个独立克隆;cDNA 插入片段平均长度约为1.0 kb;重组率为95.6 % 。文库各项指标均达标准经典cDNA 文库的基本要求。利用本实验室设计的可扩增MHCⅡ类DQA 基因第二外显子的引物检测扩增后的文库,得到了特异性非常好的目标条带,说明本文所建文库可以用于麋鹿MHC 相关基因的分离。     

超显性效应对水稻杂种优势的重要作用

在衍生于杂交稻推广组合汕优10号的群体中,单株产量和单株穗数表现出明显的F₁超亲优势和F₂自交衰退.以均匀分布于连锁图谱的标记为固定因子,将F₂群体分成亚群体,发现在大量亚群体中,特别是固定因子为杂合型的亚群体中,杂合度与产量和穗数呈显著正相关.在表现这种相关性的杂合型亚群体中,检测到15个单株产量QTL和13个单株穗数QTL,其中大多表现超显性.结果表明,超显性效应是水稻杂种优势的重要基础之一.     

硝磺草酮抗性菌株的筛选及抗性基因的克隆表达

【目的】从采集的土壤中筛选出硝磺草酮的抗性菌株,并从中克隆对羟苯基丙酮酸双加氧酶抗性基因。【方法】以酪氨酸为唯一碳源,采用富集培养法筛选分离硝磺草酮抗性菌株,利用16S rRNA基因序列分析对菌株进行初步鉴定。通过PCR扩增获得其HHPD基因序列,构建pETH4表达载体并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达。通过检测色素在440 nm处的吸收值分析菌株E. coli BL21(DE3)-pETH4对硝磺草酮的抗性特性。【结果】在含10 mmol/L硝磺草酮和1 g/L酪氨酸的选择培养基上,分离得到7株硝磺草酮抗性细菌,1株为不动杆菌属,2株为无色杆菌属,4株为假单胞菌属。从抗性最佳的Pseudomonas sp. AM-H4中扩增得到HPPD的基因片段为1 056 bp,其序列与Acinetobacter baumannii基因组中HPPD的基因序列相似性达到99%,341位点由天冬氨酸突变为丙氨酸。HPPD基因在大肠杆菌中实现异源表达,蛋白分子量大小约40 kD。菌株E. coli BL21(DE3)-pETH4在40 μmol/L硝磺草酮酪氨酸LB培养基中的色素吸收值显著降低,能够耐受高于200 μmol/L的硝磺草酮。【结论】克隆获得的HPPD具有良好的硝磺草酮抗性,将在新除草剂抗性作物选育中有一定的应用潜力。     

三峡库区山区乡村功能多元化与坡耕地演变的耦合关系

探究快速城市化、工业化背景下,山区乡村功能多元化与坡耕地演变的耦合关系,对山区耕地保护和乡村可持续发展具有重要意义。从人地关系视角,构建了山区乡村功能多元化与坡耕地演变耦合关系测度模型,并以三峡库区奉节县为例,采用乡村功能评价、耦合协调度模型等方法,揭示其耦合关系及其驱动机制。结果表明:(1)奉节县各乡村功能均呈现发展的趋势,其中社会保障功能的发展最为明显,乡村功能综合指数呈现南北部增加、中部减少的特征,且南部增加幅度大于北部;(2)奉节县坡耕地占比呈现下降趋势,缓坡耕地减少最少,急陡坡耕地减少最多,呈现南部减少幅度小、北部减少幅度大的特征;(3)乡村功能多元化与缓坡耕地演变的耦合协调度呈下降的趋势,与陡坡耕地和急陡坡耕地的耦合协调度呈先降后升的趋势,其耦合响应类型可以归纳为可持续型、转型型、一致型和衰退型4种类型;(4)乡村功能多元化与坡耕地演变耦合变化主要受到自然、社会经济、政策等要素驱动,今后应当从发展生态农业、推行环境治理等方面来提高乡村功能发展与坡耕地利用之间的协调性。研究方法和研究结果可为其他山区坡耕地资源的优化利用、生态保护以及乡村可持续发展提供借鉴价值。     

全科医学科住院患者医院感染病原菌分布与危险因素

目的 分析2014年7月－2017年6月我院全科医学科住院患者医院感染的病原菌分布及危险因素,为临床合理应用抗生素提供依据。方法 采用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统进行病原菌的鉴定,采用纸片扩散法（K-B法）和MIC法测定其对抗菌药物的敏感性,根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）2014年标准对药敏试验结果进行分析判断。结果 1532例全科医学科住院患者发生医院感染190例、245例次,医院感染率和例次感染率分别为12.40%和15.99%。感染部位以呼吸系统、泌尿系统和消化系统为主,分别占50.61%、21.63%和12.65%。共分离出病原菌125株,其中革兰阴性菌79株（63.20%）,革兰阳性菌38株（30.40%）。药敏结果显示：大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率最高,为94.74%,对美罗培南和亚胺培南的耐药率均为0.00%;肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率最高,为95.45%,对美罗培南、亚胺培南的耐药率均为0.00%;鲍曼不动杆菌对头孢替坦的耐药率最高,为100.00%,对阿米卡星的耐药率最低,为20.00%;金黄色葡萄球菌对青霉素G的耐药率最高,为100.00%,对万古霉素、替加环素、利奈唑胺和奎奴普丁/达福普汀的耐药率均为0.00%;表皮葡萄球菌对青霉素G的耐药率最高,为100.00%,对万古霉素、替考拉宁、替加环素、利奈唑胺和奎奴普丁/达福普汀的耐药率均为0.00%;屎肠球菌对克林霉素的耐药率最高,为100.00%,对替加环素、利奈唑胺和奎奴普丁/达福普汀的耐药率均为0.00%;住院时间>30 d、糖尿病、鼻饲管置管、泌尿道插管、深静脉置管和应用抗菌药物是全科医学科住院患者医院感染的独立危险因素（P<0.05）。结论 应针对全科医学科住院患者医院感染的病原菌特点及危险因素,加强防控以降低医院感染率。     

微生物流式分选的单细胞样品制备及存活率提高的方法优化

【背景】以流式细胞技术为代表的高通量筛选技术能够高效筛选具有目标性状的微生物工程菌株。在流式分选中微生物的粘连会造成分析数据不准确,分选纯度降低,因此快速简便的单细胞样品制备是流式检测的关键。优势菌大多是通过筛选偶联荧光蛋白的随机突变库获得,阳性率低,杂质和死细胞的自发荧光较强,容易混入分选门内造成存活率降低,亟须提高分选存活率的方法。【目的】建立一种简便的微生物流式分选的单细胞样品制备方法,并通过碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色提高分选样品存活率。【方法】分别在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌和酵母菌4种底盘细胞中探索超声波、消化酶、表面活性剂及超声-表面活性剂联合作用4种方式对单细胞制备效率的影响。提高微生物流式分选存活率,用常压室温等离子诱变(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)技术处理含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的酿酒酵母HZ848 (简称HZ848-GFP),形成不同强度GFP文库后,按照GFP强度分选全细胞和PI染色阴性细胞的前0.5%,统计单细胞存活率。【结果】酵母细胞分散条件为：0.01% Tween-80联合超声1 min,单细胞率达到88%以上,PI染色细胞破损率＜1.4%。谷氨酸棒状杆菌单细胞分散条件为：0.01% Tween-80联合超声5 min,单细胞率达到97%以上,PI染色细胞破损率＜1%。分选存活率结果表明,未用PI染色的酿酒酵母分选后单细胞存活率是4.3%,用PI染色去除死细胞后再分选单细胞存活率是18.3%,后者是前者的4.3倍,且具有显著性差异。【结论】本研究为微生物流式分选建立了一套简单快捷的单细胞样品制备方法,证实了PI染色法能够显著提高分选样品存活率。     

泥炭地苔藓植物孢子生活力的快速检测

适量的烟气能够促进有性繁殖体萌发,但迄今尚无辅助烟气处理探究孢子生活力快速检测方法的研究报道。该文选择毛缘泥炭藓（Sphagnum fimbriatum）、中位泥炭藓（S.magellanicum）和粗叶泥炭藓（S.squarrosum）作为材料,分别使用亚甲基蓝染色法、四唑（TTC）染色法、碘-碘化钾（I₂-KI）染色法和红墨水染色法对泥炭藓孢子进行染色,并比照营养液、烟溶液+营养液培养的孢子萌发试验,对比研究泥炭地苔藓植物孢子生活力快速检测的最佳方法。结果表明：亚甲基蓝染色法的染色效果最为明显,TTC和I₂-KI均未能使泥炭藓孢子着色,孢子对红墨水虽有着色反应但不清晰;与营养液培养相比,添加烟溶液使毛缘泥炭藓、中位泥炭藓和粗叶泥炭藓孢子萌发率分别提高5%、5%和18%;使用亚甲基蓝染色的孢子染色率与经烟溶液处理过的孢子萌发率最为接近。综上认为,亚甲基蓝染色法能快速检测泥炭藓孢子的生活力。     

核仁纺锤体相关蛋白1在宫颈癌中的高表达及其临床病理学意义

目的探讨核仁纺锤体相关蛋白1(nucleolar spindle-associated protein 1,Nu SAP1)在宫颈癌组织中的表达与临床病理特征的关系及其临床意义。方法采用Envision二步法免疫组织化学染色检测Nu SAP1蛋白在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达情况,应用基因公共数据库在线分析Nu SAP1 m RNA在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达水平。结果 Nu SAP1蛋白在宫颈癌组织中的高表达率为54.1%(60/111),正常宫颈组织中的高表达率为5.0%(2/40);Nu SAP1 m RNA在宫颈癌组织中表达水平高于正常宫颈组织。宫颈癌中Nu SAP1蛋白的表达水平与组织分化程度、淋巴结转移、淋巴脉管间隙浸润、间质浸润深度、FIGO分期相关,与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、宫旁浸润无关。Nu SAPl蛋白高表达患者的术后复发、转移率高于低表达患者。结论 Nu SAP1在宫颈癌组织中存在高表达,其表达水平对宫颈癌患者术后复发、转移的预测具有指导意义。     

远海50个站位沉积物中潜在木质素降解菌的分离与鉴定

[背景]微生物在海洋木质素的降解过程中发挥了至关重要的作用,然而来源海洋环境的木质素降解菌的相关研究报道却很少.[目的]从远海沉积物环境分离潜在的木质素降解菌,为木质素的可再生化学物质转化提供菌种资源.[方法]利用以木质素为唯一碳源的培养基,对50个远海沉积物样品中的木质素降解菌进行富集培养与纯化,并利用含苯胺蓝的脱色...